生物化学实验报告参考

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实验13 地衣酚法测定RNA 含量

一、实验目的

学习和掌握定糖法（地衣酚法）测定RNA 含量的原理和操作技术。

二、实验原理

CHO

H C O H

H C O H 浓H C l

-3H 2O H

3H 3O CHO H O O C O H 3+O H C O H

CH 2OH F e , H O O H

反应产物在670nm 处有最大吸收，RNA 浓度在20~200μg/ mL范围内，光密度与RNA 的浓度成正比关系，因而可用分光光度法测定RNA 含量。

三、材料、试剂和器具

（一）试剂

1、RNA 标准液；

2、样品溶液（未知和提取的）；

3、地衣酚试剂

（二）器具

比色管、水浴锅、移液管、721分光光度计等

四、操作步骤（按下表进行）

五、数据记录与数据处理

1、数据记录见上表

2、数据处理

以上表中的OD 670nm 纵坐标，RNA 含量(μg/mL)为横坐标作图绘制标准曲线，结果见下图。

由标准曲线查得相当该光密度的未知样和提取的RNA 含量分别为18.93μg/mL、

37.87μg/mL.

(或把OD 670nm =0.165、0.326分别代入回归方程:y=0.0085x+0.0041得x 1=18.93、x 2=37.87).

0. 0. O D 670n 0. 0. 0. 0. 0

[**************]80

R N A 含量(u g /m

由公式：待测液RNA μg/mL=标准曲线查得x 稀释倍数，得

未知样RNA 含量=18.93 x （6÷0.5）=227.16μg/mL；

提取液RNA 含量=37.87 x（ 6 ÷0.1 ）=2272.2μg/mL。

RNA 产率（%）=（2272.2μg/mL x 总体积x100）/新鲜肝重（g ）x 106（按实际计算）

六、实验分析

由回归方程线性相关系数R 值(>0.99)可知，回归方程线性好，本实验所得标准曲线

数据合理、准确(若R 值，则回归方程线好差，数据可靠性差，须分析原因，如标准溶液

配制不精确或测定时读数不准确或是仪器误差造成) ；因为RNA 浓度在20~200μg/ mL

范围内，光密度与RNA 的浓度成正比关系，所测到的两个未知样RNA 的含量分别为

18.93μg/mL、37.87μg/mL，均落在20~200μg/ mL范围内，而且也在所测的标准曲线数

据之间，可见所测得的未知样的RNA 含量数据准确、可靠（若测得未知样的RNA 含量不

在20~200μg/ mL 范围内，应作稀释调整，若测得未知样的RNA 含量不在标准曲线数据内，则查得值不够准确）。

七、思考题（略） R A N 标准曲线图