种植基地有机磷农药污染土壤的微生物修复

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产 有机磷 农 药厂 厂址 上对 不 同深度 的土壤 进行 残 留
周 边农 田采 样抽 检 , 乐果 、 敌畏 、 敌 对硫 磷 在 土 壤 中
同时被检出, 但检出值都很低 , 中乐果浓度范围在 其
002 009m /g平 均 为 00 3m /g敌 敌 畏 浓 度 . ~ . gk , 0 0 . gk , 0
种植基地有机磷农药污染 土壤 的微生物修 复
陈健 1 胡筱 敏 z 姜彬 慧
(. 1 辽宁省环境监测实验 中心 , 辽宁沈 阳 10 3 ;. 1032 东北大学 , 辽宁沈 阳 10 0 ; 10 4 3 宁省监测技术实验中心 , . 辽 辽宁沈阳 10 3 ) 10 6
摘 要: 针对我国土壤普遍受到有机磷农 药污染的现状 , 从有机磷农药污染土壤 中筛选 出降解作 用大、 生理性状稳 定的 5 种 抗性茵株 , 根据细菌形 态观察 、 生理 生化指标检测及 1Sr A基 因序列分析 , 6 DN 初步确定其生物 学分 类地位 。 通过 富集培养及 固 定化技 术 。 分别研 究其对 甲拌磷 、 对硫磷 、 甲基 异柳磷和氯氰菊酯等农 药的生物降解作用及 其影响 因素。初步探 讨 了微 生物对 甲 拌磷 农药的降解机理。上述研 究结果表明 : 用微 生物降解农药是一种较有开发前景的有效方法。 利 关键 词: 种植 基地 ; 土壤 污染 ; 有机磷 农药 ; 微生物修 复
天津红星制药厂 ;6 6 %甲拌磷乳油 ,天津汉沽农药 厂; 甲基 异柳 磷 高 渗乳 油 与 5 %氯 氰 菊 酯原 药 , 自 购 济南绿霸化学品责任有 限公 司; 对硫磷标准品、 甲拌 磷标准品、 甲基异柳磷标准品及氯氰菊酯标准品( 纯 度均为 9 . %)购 自农业部环境保护科研监测所 。 99 9 其 他 化学 试剂 均 为分 析纯 ,购 自国药集 团化 学试 剂
且不能彻底降解为小分子 ,因此 只能作为一种辅
助 手 段 加 以 利用 。随着 生物 技 术 的不 断 发 展 , 有 对
机磷农 药 的降解进行 了探索 ,充分肯定 了微生物
作者简介 : 陈健 , ,9 2 男 16 年生 , 工程 师 , 主要从事先进环保实用技术与示 范工程工作 。
农 药的降解菌 ,其 中一些微生物 的有机磷降解酶 的生化性质 已得到鉴定 ,少数有机磷农 药降解基
菌株 1SrN 6 A基 因序列 的 P R测 定 。 D C
范围在 0 0 —. g g平均为 O 1 m / 。 . 20 7 / , 0 4m k . g g 据环 01 kE 保部 门监测 , 黄河三角洲地区果园和蔬菜保护地栽培 连续 5 年以上的地块 , 土壤中有机磷农药检 出率高达
8%以上 。研究 表 明 ,0 5年厦 门附近海 区 中马銮 0 ] 20 内湾 有机 磷农 药 浓 度达 到 了 15 7 4 3 2mg 。 6 . ~ 5. /E 7 4 L9 ]
中图分类号 : 5 X3
文献标识码 : A
文章编号 :64 12 (0 2)5 0 3 — 4 17 — 0 12 1 0 — 0 5 0
1 引 言
目 ,我国农药市场上的杀虫剂 7 %以上为有 前 5 机 磷类 , 而此 类农 药一 半 以上 为高 毒 品种 。 以乐 果 、 甲胺磷 、 对硫磷 (6 5 、 10 ) 甲基对硫磷( 甲基 一 6 5 、 10 ) 敌敌畏等毒性较高的有机磷类农药使用最多[3 受 11 -。 农 药污 染 的耕地 约 l 0 0万 h 有机 磷农 药 是造 成 6 m, 土壤 污染 的 主要原 因 , 污染 状 况非 常严 重 , 地环 境 耕 质 量不 断下 降 [ 尹洧 等 在 己停 产 1 的原 主要 生 。 0年
sr i sw r c e n d f m eo g n p o p o u o tmia e ol wh c a i h y d g a ai n c p ct n t b e t n e e s r e e r t r a o h s h r sc n a n td s i , ih h d h g l e r d t a a i a d s l a o h o y a p y il gc l r i . h i b oo i a l s i c t n s t s s d n i e rma i c od n 6 h soo ia at T e r il gc ca s ai t u e t d p t s l i f o a wa i i f i rl a c r i gt 1 S r y o DNA e e s q e c g n e u n e a ay i , o i i g i b ce i mo p oo y p y il gc a d i c e c l x e i n r s h , n t e t e n ss c mb n n w t l h a tra l r h l g , h soo i a n b o h mi a e p r l me t e u s a d h n h b o e r d t n f n t n a d i f e c a t r n p sii e f h r t . a ah o , s fn h s meh l d c p r t rn i d g a ai c i l n ef co s e t d so o ae p r t i n ioe p o — t y y e meh i o u o n n u o c p n a we e su i d b n ih n u u e a d i r t d e y e r me tc h r c n mmo i z t n tc n l g . h e a a in me h i o c o r a im bl ai e h o o y T e d g d t c a s i o r o n m f mi r o g n s o h r t e t i ew s ay e . h s l o e a emi r b a e r d t n o g n cp o p o s n e t i e np o ae si d a l z d T e e u t s w dt t h c o i d g a ai f r a i h s h r s ci d si p c n a r sh h t l o o u i c s
Ab ta tAi ng a h tt h tt e s isp p l ry c ntmi td b r a i ho p r si e tc d s iv e itn sr c : mi tt e saust a h o l o u a l o a nae y o g n c p s ho u ns ci i e ,f e r ssa t
= 一

2 材 料 与 方 法
2 1 实验仪 器 、 备 . 设
利用 从有 机磷 农药 污 染土 壤 中筛选 出 的抗性 菌
株, 通过富集培养及 固定化技术 , 分别研究其对甲拌
实验所用仪器及设备见表 l 。
表 1 实 验 主 要 仪 器及 设 备
2 2 试 剂 _
农药 :0 5%甲基对 硫磷 乳 油 和 5%对 硫磷 乳油 , 0
a fe tv t o t v lpme t o pe t. n efc iemeh d wi de e o h n s c s pr
Ke o d : l t gb s c n a n td s i; r a o h s h r s e t ie mir b a e d a in yw r s p a i a e; o t mi a e ol o g n p o p o u si d ; c o i r me i t n n p c l o
菌株 的驯化 :本 实验 采用 逐步 提 高有 机磷 农 药 浓度 , 使其最终驯化浓度为 80 g , 5 0 / 共 个周期 , m L 20h 观察 驯化结 果 。 4 ,
用于菌株活化和放大培养 。 () 2 牛肉膏蛋 白胨 固体培养基 : 在牛肉膏蛋 白胨 液体 培养 基 中加 入 2%的琼脂 , 0 用于菌株保藏和菌落
因 已 得 到 分 离 、 定 、 造 。用 微 生 物 或 无 细 胞 酶 鉴 改 制 品 来 消 减 农 药 污 染 的生 物 修 复 技 术 显 示 出广 阔
的 应用 前 景 [ 。 “
降解与修复作用 , 取得 良好的处理效果 。 研究结果为 实现有机磷农药污染土壤高效 、快速与连续的生物 修复奠定 了理论基础。
本实验分离筛选的 目标是能够降解有机磷农药 并且能够以之为部分或全部 的碳源和能源的细菌。
菌株 的筛 选 : 将土 样 加入 含无 菌水 ( 内含无 菌玻 璃珠 ) 的锥 形瓶 中 , 滴 加适量 有机 磷农 药 ,0℃ , 另外 3 10r n振 荡培 养 2 ,从 中吸取 适量 菌 液在 无菌 2 mi / 4h
普 遍 存在 [ 。2 0 0 3年 , 在淮 安 市 清安 河 两侧 村 庄 及
收 稿 日期 :0 2 0 — 3修 订 日期 :0 2 0 — 4 2 1— 4 2 ; 21—5 1。
使用 , 已经给农产品、 土壤乃至海域都造成了严重的
污染 , 有机磷 农 药污染 治理 迫在 眉 睫 [ 1 。 由 于 有 机 磷 农 药 的水 解 和 光 解 过 程 相 对 缓 慢
( ) 肉膏 蛋 白胨 液 体 培养 基 : 肉膏 50g蛋 1牛 牛 . , 白胨 1.g氯化钠 5 , 0 , 0 .g蒸馏水 1 0 Lp 2 7 ; 0 0 ,H7 ~ . 0 m . 4
操作条件下 , 采用稀释平板法筛选抗性菌株。 待长出菌落后观察 、 编号 、 镜检 , 挑取菌落数较 多 、长势较好 的不同单菌落分别平板划线分离并接 人斜面培养基 , 培养好后 4 c 冰箱保存备用。
形态观察。 ( ) 机 盐 培养 基 : 3无 磷酸 氢 二 钠 1 , .g磷酸 二 氢 0 钾 0 , 酸镁 0 , 化氨 05 , .g硫 5 .g氯 5 .g蒸馏水 l 0 , 0mL 0