WHO 技术报告 附录2 微生物实验室的最佳实践

微生物实验室的最佳实践

背景

《WHO专家委员会对药物制剂的详述》在2009年被正式采用，它是《制药质量控制

实验室最佳实践》的修订版。对预先具有资格的实验室执行检查时，检查者发现一些文本

规定的指导方针可能获益于其他的指导，特别是在微生物方面。

鉴于以上，专家委员会推荐WHO秘书处形成新的制药微生物实验室的最佳实践。

以下文本介绍主要针对这种专门型的实验室。

前言及文件的适用范围

目录

1. 人员

2. 环境

2.1声明

2.2实验室的环境监测

2.3清洁、灭菌和卫生

2.4无菌检测设施

3．检测方法的验证

4．设备

4.1 设备的维护

4.2 资格认证

4.3 校准、行能核实及使用监测

5．试剂和培养基

5.1 试剂

5.2 培养基

5.3 标签

5.4 有机体的复苏

6. 标准物质和标准培养基

6.1 国际标准和药典标准物质

6.2 标准培养

7. 样品

8. 样品操作及鉴别

9. 废弃物的处理

10. 结果的质量保证和操作的质量控制

10.1 内部质量控制

11. 检测步骤

12. 检测报告

参考

附录1 操作执行区域的例子

附录2 设备维护的例子

附录3 不同实验室设备校准检查以及周期的例子

附录4 设备的合格证书及监测

附录5 常用的标准培养基

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前言及文件的适用范围

制药生物实验室的工作主要有：

——无菌检测；

——微生物（细菌、酵母菌和霉菌）的测定、分离、计数和鉴别，各种物质（如初始原料，

水），产品，表面，外观和环境的细菌内毒素的检验。

——作为整个试验系统的一部分：微生物分析。

这些指导涉及了全部微生物实验室的内容，包括上面所有的检验内容，无论是制药工厂中

独立的部分还是某一单元都有相关的指导。

有关指导和补充的要求都收录在“药物质量控制实验室的最佳操作(1)”，化学标准物质的

建立、保存和分布的总指导。版本（2）；国际药典，版本4（3）；国际药典的首次补充，

版本（4）；以及ISO/IEC 17025（5）。

术语表

1. 人员

1.1 微生物试验必须有具有微生物知识的专业人员或具有同等资格的人进行操作和监督。

人员在正式工作之前应该进行基础的微生物训练和相关的操作经验。

1.2 对全部人员来说具体的工作有检验、校准、验证和核实。实验室应该有全部技术人员

的记录、合格证书、培训、经验。

1.3 如如果报告中的检验结果有分歧或者需要进行解释，必须由权威人员定夺或者按有关

规定执行，有关规定包括：监管和技术要求以及标准允许。

1.4 实验室管理应确保全部人员有试验检测和仪器操作的培训。包括基础技术的培训等。

倒平皿、数菌落、无菌技术、培养基的制备、稀释和基本的鉴别技术都要有相关标准

规定。有资格的员工可以独立进行样品检验工作，否则要在监督下进行样品的检验。

随着有关规定的重新制定，员工的能力也要做相关的调整，必要时进行重新培训。对

于某些没有规定的方法和技术，具有相关实验操作能力的员工要对其进行验证后再用。

在一些情况下，我们对于一些技术和仪器的使用认同，而对对于一些特殊的方法就要

进行验证。

1.5 员工的培训包括在实验室设施内的必要操作必须对微生物进行控制。

1.6 员工培训包括微生物的安全操作。

2. 环境

2.1 前言

2.1.1 微生物实验室和某些支持设备（如，高压灭菌器和玻璃器皿）应该在特定的地方，

尽量和其它区域分开，特别是生产区域。

2.1.2 微生物实验室的设计应适合操作，应该有足够的区域进行活动，避免混乱、污染和

交叉污染。应该有足够的区域放置样品、相关生物，培养基（如果必要，进行冷却）、

检验和记录。由于某些物质的特性（如对相关生物的无菌培养基或培养条件）必须

分别贮存于特定的地方。

2.1.3 实验室在设计时要考虑到建筑材料的适用性，要易于清洁、避免感染和最小化污染

的危险。

2.1.4 对实验室和生产区域的空气供给要分开，空气处理单元要独立置于微生物实验室的

某个地方，以满足于温度和湿度控制的要求。供给实验室的空气要符合质量标准，

22.1.5 对进入微生物实验室的人员进行限制，应该注意以下方面：

—正确的出入程序，包括着装。

—特殊区域的使用。

—在这种区域工作的限制条件。

—实行限制的原因

—污染限度。

2.1.6 实验室工作，像样品的制备、培养基和设备的准备、微生物的计数都需要独立在某

个区间或者及时进行，以最小化交叉污染的危险、最小化假阳性结果和最小化假阴

性结果的出现。对无指定区域的使用，应实施风险管理原则。无菌检验应在指定区

域进行。

2.1.7 微生物实验室的设计应该分成不同级别的区间进行不同的操作。区间级别应按产品

的级别进行设定。无菌检验在无菌产品操作规定的级别下进行检验。

附录1是关于区域级别的介绍。

2.1.8 一般来说，实验室的设备不能在不同的洁净区内挪动，以免造成交叉污染。在微生

物实验室内使用的设备不能在微生物实验室区域外使用，除非有专门的预防措施预

防交叉污染。

2.2 实验室的环境监控

2.2.1 对某些区域（如 无菌检验区域）要进行环境监控程序，如使用的流动空气检测仪、

空气设备或接触平板、不同的温度和压力等都要进行检测。并制定警戒限和行为限。

最后要绘制环境检测结果趋势图。

2.3 清洁，灭菌和卫生

2.3.1 应该有相关的清洁和灭菌操作规程，规程中应涉及环境监测结果。

2.3.2 应该有对溢出物的处理的操作规程。

2.3.3 应当确保手洗和手工灭菌设备的清洁度。

2.4 无菌实验设施

2.4.1 为确保实验正常进行，无菌实验室设备有特殊的环境要求。WHO最佳操作实践

（GMP）对无菌药物产品要求：必须进行无菌操作并且要在特殊的无菌试验环境中。

本部分主要介绍无菌试验设施中的洁净区的要求。

2.4.2 无菌试验应该在无菌条件下操作，在这种条件下的空气质量要符合标准，前期准备、

检修、设备都应和标准的要求程序一致。

2.4.3 无菌操作应当在B级下的具有单向空气流或生物安全柜（如果有授权证）的A级环

境下进行，或者也可以在一个隔离间内进行。应注意设施布局的设计和室内空气流

的方式，以确保单向空气流不被污染。

2.4.4 无菌试验设施中的洁净区和空气处理设备必须每年由合格人员或者承包人检查是

否合格。环境要求应遵循不可行标准和可行标准，确保高效空气粒子过滤器（HEPA）

完好以及室内空气流符合要求。但是，对于频繁交替的检测只要符合质量风险管理

（QRM）才可实行。对常规检查的样品点的映射位置和暴露时间应记录下来，对各

种各样的微生物环境的频繁检验应该有书面规定程序。

2.4.5 供应至A级和B级区域内的空气应该通过HEPA（高效空气粒子）过滤器。

2.4.6 应具备以下：气流报警系统、压差和指示仪器。（GMP：对无菌药品制剂形式的要

有加热、空气流通和空调系统（8），以及无菌药品GMP（8））。

2.4.7 除非安装有可靠的压力监测系统，则必须从外部安装的压力表上读数并记录下来。

一般应该由第一个进入的人员对压力进行读数。压力表上应贴有标签，标明指示的

32.4.8 进入洁净区应通过一个气闸室和一个缓冲间，在缓冲间内按要求穿上合适的洁净

服。最后一个缓冲间应处于“休息”状态，它的级别和即将进入的洁净室的级别相

同。缓冲间应该有足够的空间进行缓冲。对不同的区域应有清晰的划分。

2.4.9 无菌试验人员的服装应符合WHO GMP无菌药品（8）第10部分的有关规定。应对

试验操作人员的着装程序进行培训和认证，并有培训记录。

2.4.10 上述事项的完成和符合程度参照WHO GMP无菌药品（8）第11部分的有关规定。

2.4.11 环境微生物检测应该反映设施的使用状况（室内或隔离），并且包括与空气接触的

表面取样方法对设备的适用度。例如：

—在空气中取样

—放置（暴露）碟子

—表面接触——重复生物检测和数碟子、标本或柔性薄膜。

—操作人员的手套印记

在操作（动态）条件下，无菌试验区域的微生物环境监测在每期工作中都要执行。

2.4.12 要有书面说明书，包括对微生物污染进行评价的合适的警戒限和行动限。微生物环

境监控限度见WHO GMP无菌药品（8）的有关规定。

3 检测方法的验证

3.1 标准（药典的）检验方法应该通过验证。但是，在特殊实验室对特殊产品的特殊检验

方法需要有与特殊产品相一致的细菌、酵母菌和霉菌的复苏菌种。在进行常规检验（方法

验证）之前和确定特殊产品的特殊检验方法是否合适（检验方法的适用性包括阳性和阴性

控制）之前，实验室要对标准检验方法的标准操作进行阐述。

3.2 如果检验方法没有按药典或者认证标准方法进行操作，都要进行验证。验证应包括：

适用性、精确度、精密度、专一性、检测限、定量限、线性和稳定性。当检测不同种样品

时，应考虑样品潜在的抑制作用。用合适的统计方法对结果进行计算，例如：要按相应国

家、地区和国际药典的规定执行。

4. 设备

用于实验室每一个设备、仪器和其它装置都要分别进行验证和校准。

作为质量体系的一部分，实验室应该有关于设备的合格证书、校准、核实、维护和设备检

测系统的文件规程。

4.1 设备的维护

设备应按文件规程中的规定在预定的时间间隔内进行维护。应有详细的记录。（维护仪器

间隔的例子见附录2）

4.2 合格证书

设备的合格方面见药品质量控制实验室最佳实践（1）的第8和12部分。

4.3校准、核实和使用监测

4.3.1 仪器上必须有标签说明校准日期、服务日期和复校准日期。

4.3.2 校准和验证的频率按文件规定执行或者从仪器必需、仪器类型和仪器精密度方面综

合考虑。校准和验证的间隔应在发现可接受限度内的飘移之前进行。（不同实验室仪器校

验间隔的例子见附录3；仪器资格和监测见附录4.）仪器的使用应遵从预定接受标准。

4.3.3 测温装置

4.3.3.1 温度不但对实验结果有直接的影响，而且还是进行仪器正确操作的关键因素。一个

良好性能的测温装置应能达到所要求的精确度。（例如，在孵化器和高压灭菌器中的液体

玻璃温度计、热电偶和铂电阻）

4.3.3.2 设备的校准应遵循国家或国际标准。

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