Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义
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第32卷第1期2012年2月健康研究
HealthResearchVol．32No．1Feb．2012
收稿日期：2011－10－16
作者简介：邱丽香（1982－），女，浙江龙泉人，本科，护师。DOI：10．3969/j．issn．1674-6449．2012．01．002基础医学
Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义
邱丽香1，翟淑亭2，秦建芬1
（1．浙江大学医学院附属邵逸夫医院护理部，浙江杭州310016；2．杭州市下沙医院普外科，浙江杭州310006）
摘要：目的研究Notch3在大鼠肝癌发生发展中的动态变化。方法二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌的发
生，于4周、8周、12周、16周时取肝脏标本，免疫组化和Westernblot法检测标本中Notch3的表达。
结果随着肝组织损伤加剧，Notch3表达逐渐升高。与正常组相比，肝损伤组、肝硬化组和肝癌组的
Notch3蛋白明显表达增加（P＜0．05）。结论Notch3参与了大鼠肝癌发生的全过程，并且随着肝损
伤的不断加剧，其表达也逐渐上升。Notch3信号的激活可能是肝癌发生的一项重要机制。
关键词：Notch3蛋白；肝癌
中图分类号：R735．7文献标识码：A文章编号：1674－6449（2012）01－0004－03
ExpressionofNotch3inRatLiverCancerandItsEffect
QIULi-xiang1，ZHAIShu-ting2，QINJian-fen1
（1．DepartmentofNursing，TheSirRunRunShawHospital，SchoolofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou，Zhejiang
310016，China；2．DepartmentofGeneralSurgery，HangzhouXiashaHospital，Hangzhou，Zhejiang310006，China）
Abstract：ObjectiveObjectiveToinvestigatethedynamicchangesofNotch3inthedevelopmentandprogressionof
hepaticcarcinomainrats．MethodsHepatocarcinomawasinducedbydiethylinitrosamine．Liverspecimensweretaken
atweek4，8，12and16fordetectionofNotch3expressionusingimmunohistochemicalandWesternblotmethods．Results
Notch3expressionincreasedgraduallywiththeworseningofhepaticinjury．Therewerestatisticallysignificantincreases
ofNotch3proteinexpressioninhepaticinjurygroup，hepaticcirrhosisgroupandhepatocarcinomagroupascomparedtothe
normalcontrolgroup（P＜0．05）．ConclusionsNotch3participatesinthewholeprocessofhepatocarcimadevelopment
andprogressioninrats．IncreasedexpressionofNotch3isassociatedwiththeworseofhepaticinjury．Theactivationof
Notch3maybeanimportantmechanismforthedevelopmentofhepatocarcinoma．
Keywords：Notch3protein；hepatocarcinomaNotch信号通路在哺乳动物的胚胎形成中扮演
重要的角色，作为一种进化上相对保守的细胞相互
作用机制，维持着细胞增殖、分化、凋亡之间的平衡，
对细胞分化命运起决定性作用。目前在人类中发现
了Notch蛋白家族的4个同源体，包括Notch1、
Notch2、Notch3、Notch4。1991年Notch1在人类T淋
巴母细胞白血病中被首先鉴定出来，首次提示了
Notch信号通路与肿瘤相关。目前在肝癌中针对
Notch3的研究还较少。本实验拟在已建立二－乙
基亚硝酸胺（diethvlnitrosamine，DEN）诱发性肝癌
模型的基础上，模拟人体肝癌发生发展过程，选择
Notch3作为主要检测指标探讨Notch信号通路在肝
癌发生发展过程中的作用，为阐明肝癌发生发展机
制提供实验依据，为肝癌早期诊断和特异性药物开
发等提供新思路。［1］
1材料和方法
1．1试剂和仪器DEN（Sigma）、兔来源Notch3抗
体（SantaCruzBioteehnology，Inc．）、非生物素超敏
二步法免疫组织化学检测试剂盒（北京中杉金桥生
物技术有限公司）、德国莱卡公司的ASP300组织脱
水机、EG1160石蜡包埋机、BM2155组织切片机、日
本Olympus公司的BX31数码显微照相系统。
1．2大鼠肝癌模型的建立和标本收集雄性SD
大鼠，体重200～250g，共40只，随机分为模型组
（32只）和对照组（8只），模型组饲以含0．08‰DEN
的饮水，连续16周；对照组8只常规自由饮水。于
实验4、8、12、16周处死动物，取肝脏标本置液氮中
保存。
1．3Notch3蛋白在肝组织中表达的测定
1．3．1免疫组化法部分标本置于4%多聚甲醛
中固定，常规石蜡包埋，连续切片，脱蜡至水，微波热
修复。
1．3．2Western-Blot法部分标本切碎后置超声波
粉碎仪中低温粉碎，加入细胞裂解液提取组织蛋白。
1．4统计学处理数据资料应用SPSS13．0软件处
理，p＜0．05有显著性差异，p＜0．01有极显著差异。
2结果
2．1免疫组化法观察各组Notch3蛋白表达情况
免疫组化显示阳性着色定位于细胞浆，呈棕黄色，均匀弥漫性。正常组：肝细胞未见阳性染色（封三图
1），胆管上皮细胞上偶见阳性表达的细胞。肝细胞
损伤期：造模后第4周开始，门管区周围细胞首先呈
Notch3蛋白阳性着色（封三图1），可见部分Notch3
蛋白阳性细胞沿胆管上皮横断面呈环状排列，在肝
小叶内也偶见一些阳性表达的细胞。造模后第8
周，门管区Notch3蛋白阳性细胞有向肝小叶内穿插
生长的趋势（封三图1）。肝细胞增生硬化期：肝组
织的正常结构已被大量的假小叶取代，此期Notch3
蛋白表达阳性细胞增多，主要分布于门管区、肝小叶
的周边及非典型增生结节内，其中以门管区居多，并
呈现向肝小叶内无序穿插生长的趋势（封三图1），
在增生的小叶间胆管的上皮细胞中也有Notch3蛋
白表达。在脂肪变性的肝细胞质中也可见表达。肝
细胞癌变期：癌周组织中有大量的Notch3蛋白表达
阳性肝细胞，癌结节中或肝癌组织中Notch3蛋白表
达更高（封三图1）。
2．2Western-Blot法观察各组Notch3蛋白表达情
况WB结果显示Notch3蛋白在肝癌发生过程中呈
逐渐上升趋势（图1）。正常组：肝组织未见Notch3
蛋白表达。肝细胞损伤期：4周时肝组织中Notch3
蛋白表达明显增加，到8周时增加更为明显，与正常
组比较有显著差异（P＜0．05）。肝细胞增生硬化
期：至12周时随着肝脏正常结构破坏，假小叶形成，
Notch3蛋白表达较损伤期进一步升高，与正常组相
比有极显著差异（P＜0．01）。肝细胞癌变期：癌周
组织Notch3蛋白表达明显增高，在癌组织中的表达
最高，与正常组（P＜0．01）、肝细胞损伤组（P＜
0．01）、肝硬化组（P＜0．05）相比均有显著性差异
（表1）。
图1Western-Blot法观察正常肝组织及肝癌
组织中Notch3蛋白表达情况5第1期邱丽香，等：Notch3在大鼠肝癌中的表达及其意义表1各组各种蛋白的相对含量
Notch3/GAPDHN4W8W12W16W条带一00．08850．22010．47240．8122条带二0．02210．13960．16640．42350．8329条带三0．01250．10010．23790．56180．7356平均值0．0115330．10940．208133*0．4859＊＊0．793567＊＊方差0．0110820．0267890．0372220．0701310．051256
*与正常组比较，P＜0．05；＊＊P＜0．01
3讨论
Notch信号通路与Wnt和Hegehog信号通路一
起是公认的哺乳动物胚胎发育过程中的三条重要信
号通路，在胚胎干细胞分化形成各组织、器官的过程
中发挥重要作用［2-3］。Notch信号通路相对保守，在
成熟细胞中的表达较少，本研究发现Notch3蛋白在
肝癌发生过程中表达逐渐升高，证明了Notch3蛋白
确实参与了肝癌发生的整个过程。
Notch3蛋白在癌组织中高表达在其他肿瘤中
早有报道［4］。在对肺癌的研究中发现抑制Notch3
的表达可以在一定程度上抑制肿瘤生长［5］。在对
特殊类型的脑肿瘤的研究中发现，Notch3甚至是以
癌基因的形式发挥作用，促进肿瘤的发生［6］。
Notch3在肝癌的研究相对滞后，但是仍然有研究指
出肝癌细胞株HepG2有异常高水平的Notch3含
量［7］，而进一步的研究还发现不仅是Notch3蛋白，
Notch4蛋白在人类肝癌组织中也有异常的高表
达［8］。但是对于整个肝癌发生的过程来讲，Notch3
蛋白究竟发挥了何种作用，目前的研究尚不能完全
揭示。而本文通过动物模型模拟肝癌发生发展的全
过程，有力地证明了Notch3蛋白在肝癌的发生中所
起的决定性作用。
既往研究还发现，低水平表达的Notch1蛋白能
促进肿瘤生长，而持续激活Notch1信号却能诱导肿
瘤细胞生长抑制［9］。本研究结果表明，当正常肝组
织受到损伤时，Notch3信号迅速被激活，并且随着
损伤的不断加重，Notch3的表达也不断上升。因而
我们可以推测，在肝脏损伤的初始阶段，Notch1信
号和Notch3信号可能同时被激活，然而随着损伤的
加重，Notch3信号表达增强，而Notch1信号则不断
削弱，最终导致了平衡被打破，肿瘤得以形成。目前原发性肝癌的发病机制仍未阐明，以往研
究认为病毒感染和外界化学刺激是诱发肝癌的两大
因素。本文采用的模型是化学诱导的方法，而临床
上尚有大量的肝癌病人是由慢性肝炎发展而来，与
化学刺激的致病机制有所不同。尽管如此，Notch3
信号参与肝癌的发生仍是不争的事实，肝组织中
Notch3信号的异常活化可能是发生肝癌的一个重
要标志，而通过抑制Notch3信号的激活来治疗甚至
预防肝癌有可能是今后肝癌研究的一个重要方向。
参考文献：
［1］李廷铎，王东，李笑岩，等．Patched蛋白在肝癌发生发展过程中的
表达及意义［J］．解剖学研究，2009，31（4）：245－248．
［2］TakebeN，HarrisPJ，WarrenRQ，etal．Targetingcancerstemcells
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