碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的分子生物学及其临床感染特征研究
细菌耐药性目前已成为全球性关注的问题,耐药细菌所致感染已构成新世纪抗感染治疗的新挑战,是当前人类健康和生命面临的主要威胁。肠杆菌科细菌分布广,与人类关系密切。
在医院感染中,肠杆菌科细菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌等是引起医院感染最常见的病原菌,并以多重耐药菌株引起的感染为显著特点。碳青霉烯类抗生素是目前临床治疗产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrumβ-Lactamases,
ESBLs)及AmpC酶等多重耐药菌株所引起感染的最有效的抗菌药。
但随着该类抗生素在临床上的广泛应用及不合理使用,临床上已出现对碳青霉烯类抗生素耐药的菌株。目前国内外关于肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制报道主要集中在四个方面：①产生碳青霉烯酶,如IMP型和VIM型金属酶以及KPC (Klebsiella pneumoniae carbapenemase, KPC)型碳青霉烯酶等；②ESBL和/或AmpC酶过度表达同时合并外膜孔蛋白的丢失；③外排泵高表达的膜屏障机制；④药物靶位改变。
在上述几种耐药机制中,产碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌对碳青霉烯类耐药最主要的机制。骆俊等人对2003年6月到2004年5月华山医院临床分离的耐亚胺培南的革兰阴性杆菌中的碳青霉烯酶进行了筛查,发现细菌产碳青霉烯酶是不动杆菌和弗劳地柠檬酸杆菌对亚胺培南和美罗培南等碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因之一。
沈继录等人采用琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对199株革兰阴性杆菌的最低抑菌浓度(MIC),结果显示耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌对12种抗生素的耐药率均高于碳青霉烯类敏感革兰阴性杆菌的耐药率,而且产生多种碳青霉烯酶,如KPC、IMP、VIM和OXA型碳青霉烯酶等,并在弗劳地柠檬酸杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌中有产酶克隆株的流行。在巴西,肠杆菌科细菌中对碳青霉烯耐药已成为主要问题,特别是产KPC酶的耐药株已在多个地区报道。
CTX-M-15基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌头孢他啶耐药株中的检测
李瑞华;聂大平;何丽敏
【摘 要】To investigate the relationship of CTX - M - 15 gene to
ceftazidime resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.
[ Methods ] CTX - M - 15 , CTX - M - 14 genes in ceftazidime - resistant or
susceptible, producing ESBL Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae
were detected by Multiplex - PCR. [ Results] In ceftazidime -resistant
Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae isolates, the total positive rate
of CTX - M - 15 gene was 75.9% , the positive rate of alone CTX - M - 15
gene was 40.6% and the rate of co - existence of CTX - M - 15,14 genes
was 35.2%. In ceftazidime - susceptible Escherichia coli and Klebsiella
pneumoniae isolates they were 17.7% , 5.97% and 11.89% respectively.
[Conclusion] CTX - M - 15 gene is the major mechanism of ceftazidime
1 超广谱β-内酰胺酶（ESBL）测定
作者：陈东科 文章来源：《2005细菌耐药性监测培训班》 点击数： 更新时间：2005/9/19
单纸片扩散法（初筛试验）
将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上贴
头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、
头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、
头孢曲松(Ceftriaxone,CRO)、
氨曲南(Aztreonam,ATM)、
头孢泊肟(Cefprozil,CPD)纸片，
置35℃过夜培养，若抑菌环直径CAZ≤22mm、CTX≤27mm、CRO≤25mm、ATM≤27mm、CPD≤22mm时可疑为产ESBLs菌株。
双纸片协同法（初筛试验）
将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，把含10μg/片克拉维酸纸片（Clavulanic Acid，CLA）贴于MH平板中央，于克拉维酸纸片周围分别贴上头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、头孢泊肟纸片（纸片中心距离为20~24mm），置35℃过夜培养，观察有无协同现象，CLA与任何一种ESC（超广谱β-内酰胺类抗生素）有协同现象者可疑为产ESBL菌株。
2
双纸片协同法（初筛试验）
双纸片增效法（确认试验）
将0.5麦氏单位的待检菌液涂抹于MH琼脂平板上，稍干后，在琼脂培养基上分别贴头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸、头孢曲松/克拉维酸、氨曲南/克拉维酸、头孢泊肟/克拉维酸纸片，置35℃过夜培养后量取抑菌环直径，与单纸片平皿对照，若加克拉维酸纸片较未加克拉维酸纸片抑菌环直径≥5mm，即为ESBL阳性。
双纸片增效法（确认试验）
3 （续上）
双片增效法（确认试验）
（续上）
稀释法（确认试验）
琼脂稀释法：（略）
肉汤稀释法：（略）
Etest法：
稀释法判断标准：加克拉维酸MIC值较未加克拉维酸MIC值小8倍以上（即<3个稀释度），即为ESBLs阳性。
国际检验医学杂志２００７年１０月第２８卷第】Ｏ期ｌｍ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２００７，Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１０
临床分离阴沟肠杆菌产超广谱ｌ３一内酰胺酶
及其基因分析
胡大春 邵剑春 赵晓丽 周玲 刘德华 蒋杰 钱净 杨绍敏 秦海燕
【摘要】 目的 探讨临床分离阴沟肠杆菌对ｐＩ内酰胺类抗生素的耐药性及其机制。方法 采用
Ｋ—Ｂ法药敏试验检测临床分离阴沟肠杆菌耐药表型；双纸片确认试验和增效试验检测超广谱１７－￣１酰 胺酶（ＥＳＢＬｓ）或／和高产ＡｍｐＣ酶菌株；ＰＣＲ方法检测ＴＥＭ一１、ＳＨＶ－１、ＣＴＸ—Ｍ型ＥＳＢＬｓ编码基因，
ＰＣＲ产物直接测序分析其基因亚型。结果 （１）被检菌株对ＩＰＭ、ＡＫ、ＦＥＰ、ＣＩＰ耐药率分别是
０．０ 、１４ １ 、３１ ５ 、４８ ４ ；对其他常用 内酰胺类抗生素、ＣＮ、ＳＸＴ等耐药率在５０ ０ ～ ９０ ０ 以上；（２）８８．１ 菌株高产ＡｍｐＣ酶或／和产ＥＳＢＬｓ；高产ＡｍｐＣ酶、单产ＥＳＢＬｓ、同时产
ＡｍｐＣ酶和ＥＳＢＬｓ的菌株检出率分别为２７ ３８ 、１６ ６７ 、４４ ０５ 。６０ ７０ 菌株产ＥＳＢＬｓ。（３）
ＴＥＭ一１、ＳＨＶ－１、ＣＴＸ－Ｍ １组ＥＳＢＩ ｓ编码基因检出率分别为７５ Ｏ０ 、２３ ４４ 、７７ ２７ 。（４）基因序 列分析显示存在ＳＨＶ－１２、ＣＴＸ－Ｍ ３、９ａ、１４、２２等ＥＳＢＬｓ编码基因，以ＳＨＶ－１２、ＣＴＸ—Ｍ １４、２２为主。
结论 临床分离阴沟肠杆菌多重耐药严重，对 内酰胺类抗生素的耐药机制复杂，ＥＳＢＬｓ编码基因 亚型以ＳＨ ｖ＿１２、ＣＴＸ—Ｍ１４、２２为主。
【关键词】阴沟肠杆菌； 耐药性； ＡｍｐＣ酶； ＥＳＢＩ ｓ； 基因 中图分类号：Ｒ４４６ ５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２００７）１０－８８３—０５
Ｅｘｔｅｎｄｅｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｌａｃｔａｍａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
