大鼠脊髓全横断损伤模型的建立_黄纯海

一、实验背景脊髓损伤（Spinal Cord Injury, SCI）是一种严重的神经系统损伤，可能导致截瘫、感觉丧失和膀胱功能障碍等一系列并发症。

为了深入研究脊髓损伤的病理生理机制，建立可靠的动物模型至关重要。

本研究旨在通过脊髓造模实验，探讨脊髓损伤后的病理变化，为后续治疗提供理论依据。

二、实验目的1. 建立大鼠脊髓损伤模型。

2. 观察脊髓损伤后的病理变化。

3. 探讨脊髓损伤的潜在治疗策略。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康成年SD大鼠40只，雌雄不限，体重200-250g。

2. 仪器：手术显微镜、手术器械、电生理记录仪、脊髓损伤评分系统等。

3. 试剂：氯化钠、葡萄糖、生理盐水、肝素等。

四、实验方法1. 分组：将40只大鼠随机分为4组，每组10只。

A组为正常对照组，B组为脊髓损伤模型组，C组为脊髓损伤治疗组，D组为脊髓损伤对照组。

2. 建立脊髓损伤模型：采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型。

首先，对大鼠进行麻醉，然后暴露T10-T12节段脊髓。

使用显微器械在T11椎间隙向上剪开骨面，剔除脊髓正中上方的骨头，暴露脊髓。

接着，用重物坠击器从上方打击脊髓，造成脊髓损伤。

3. 观察指标：- 脊髓损伤评分：在损伤后第1、3、7、14天，对各组大鼠进行脊髓损伤评分，包括感觉功能、运动功能和膀胱功能。

- 脊髓病理学检查：在损伤后第1、3、7、14天，对各组大鼠进行脊髓病理学检查，包括脊髓组织学观察和免疫组化染色。

- 电生理检查：在损伤后第1、3、7、14天，对各组大鼠进行电生理检查，包括神经传导速度和神经肌肉电生理检查。

4. 治疗方法：C组大鼠在脊髓损伤后给予药物治疗，D组大鼠给予安慰剂治疗。

五、实验结果1. 脊髓损伤评分：与A组相比，B组大鼠在损伤后各时间点的脊髓损伤评分均显著升高，表明脊髓损伤模型建立成功。

C组大鼠在损伤后各时间点的脊髓损伤评分低于B组，表明药物治疗对脊髓损伤有一定的治疗作用。

2. 脊髓病理学检查：与A组相比，B组大鼠在损伤后各时间点的脊髓组织学观察和免疫组化染色均显示明显的病理改变，如神经元变性、胶质细胞增生等。

脊髓横断模型的详细步骤及方法随着对中枢神经损伤后可塑性的重新认识，越来越多的学者致力于脊髓损伤后神经再生的有关研究，进行了大量的动物试验，主要采用锐利的刀片选择性地将脊髓进行全横切、半横切、部分切断，或造成块状缺损，形成脊髓横断、半横断损伤或脊髓缺损。

使损伤部脊髓的运动和感觉传导通路的头端失去解剖连续性及生理上的联系，从而观察损伤轴突再生、突触重建，以及有关神经递质、神经营养因子、神经组织、细胞移植对这一过程的影响及作用。

横断模型是采用手术刀切断的方式使脊髓失去解剖连续性而造成的损伤。

可以分为全横断和半横断两种损伤模型。

在啮齿类动物如大鼠横断模型中可以选择切断某一特定的传导束进行离断。

如切断脊髓背外侧束以阻断红核脊髓束，观察损伤后同侧前肢运动功能的变化。

1.全横断损伤模型脊髓全横断损伤是脊髓损伤中严重的类型。

表现为脊髓的完全离断，一旦发生，损伤平面以下的所有运动及感觉功能随即丧失，还可能伴发自主神经功能障碍。

同时，由于脊髓连续性完全中断，损伤平面无残留神经纤维，损伤后脊髓溃变的面积较大，即使断端有神经纤维再生，也难以逾越损伤处，从而使完全性脊髓损伤后结构重建和功能恢复显得更为困难。

由此所导致的感觉、随意运动功能丧失或大小便功能障碍将伴随患者的一生。

为了确保脊髓完全被切断，有研究者用脊髓腹侧穿线的方法。

此类模型的共同优点是操作简便，创口清楚，出血少，继发反应轻，重复性好，损伤程度恒定，解剖定位准确，功能障碍容易确定，损伤彻底，可以摒除残留纤维再生对治疗结果观察评定的干扰；缺点是与临床实际损伤病例相差较大，重复性木高，难以保证动物模型的一致性。

有研究者认为脊髓横切的情况在人类脊髓损伤中很少见，由于脊髓本身的张力，切断的两头会分离，而在人类损伤的情况中，这样的裂隙几乎不会出现；其次要将脊髓切断必须打开硬脊膜，这将使得外源性细胞侵入脊髓损伤，从而明显改变损伤部位的内环境；且动物术后护理较难，死亡率非常高，得到整批数据较难。

《夹脊电针对脊髓损伤大鼠治疗作用的研究》一、引言脊髓损伤（SCI）是一种严重的神经系统疾病，其治疗一直是医学领域的难题。

近年来，随着中医针灸的深入研究，夹脊电针作为一种新型的电刺激治疗方法，在脊髓损伤的治疗中显示出良好的应用前景。

本文旨在研究夹脊电针对脊髓损伤大鼠的治疗作用，以期为临床治疗提供理论依据。

二、材料与方法1. 实验材料本实验选用健康成年SD大鼠作为实验对象，建立脊髓损伤模型。

实验所需药品、试剂及仪器均符合实验要求。

2. 实验方法（1）建立脊髓损伤模型：采用重量落体法制作大鼠脊髓损伤模型。

（2）分组与治疗：将大鼠随机分为正常组、模型组、电针组和药物治疗组。

电针组接受夹脊电针治疗，药物治疗组接受常规药物治疗。

（3）指标检测：分别在治疗前、治疗后检测大鼠的运动功能、神经传导速度、病理形态学改变等指标。

三、实验结果1. 运动功能恢复情况经过治疗，电针组和药物治疗组的大鼠运动功能均有明显恢复，其中电针组恢复程度较药物治疗组更为显著。

2. 神经传导速度变化治疗后，各组大鼠神经传导速度均有提高，其中电针组提高幅度最大，表明夹脊电针能有效地促进神经再生。

3. 病理形态学改变治疗前，脊髓损伤大鼠的病理形态学改变严重。

治疗后，各组大鼠的病理形态学改变均有改善，其中电针组改善程度最为明显。

四、讨论本研究表明，夹脊电针对脊髓损伤大鼠的治疗作用显著。

通过电针刺激，能够有效地促进大鼠的运动功能恢复、提高神经传导速度、改善病理形态学改变。

这可能与夹脊电针能够刺激神经再生、改善局部微环境、促进血液循环等作用有关。

此外，夹脊电针作为一种非侵入性的治疗方法，具有操作简便、安全性高、副作用小等优点，为脊髓损伤的治疗提供了新的选择。

五、结论本研究通过实验证明，夹脊电针对脊髓损伤大鼠的治疗作用显著，能够有效地促进大鼠的运动功能恢复、提高神经传导速度、改善病理形态学改变。

因此，夹脊电针有望成为一种有效的脊髓损伤治疗方法，为临床治疗提供新的思路和方法。

《神经干细胞移植联合电针治疗对大鼠脊髓损伤的修复作用研究》一、引言脊髓损伤（SCI）是一种严重的神经系统疾病，常常导致永久性的运动、感觉和自主神经功能障碍。

随着医疗科技的进步，人们逐渐认识到通过干细胞移植以及物理疗法等方式可能有助于促进脊髓损伤的修复。

近年来，神经干细胞移植及电针治疗在脊髓损伤修复领域的应用逐渐受到关注。

本研究旨在探讨神经干细胞移植联合电针治疗对大鼠脊髓损伤的修复作用。

二、材料与方法1. 实验材料本实验采用SD大鼠作为研究对象，以构建大鼠脊髓损伤模型，并进行后续的神经干细胞移植和电针治疗。

此外，还准备了实验所需的相关器材、药品和试剂。

2. 实验方法（1）模型建立：采用适当的手术方法建立大鼠脊髓损伤模型。

（2）神经干细胞移植：将培养好的神经干细胞移植至大鼠脊髓损伤部位。

（3）电针治疗：对移植后的大鼠进行电针治疗，设定合适的电针参数。

（4）评估方法：通过行为学评估、组织学分析等方法，对大鼠的脊髓损伤修复情况进行评估。

三、实验结果1. 行为学评估经过神经干细胞移植联合电针治疗后，大鼠的运动功能得到了显著改善。

与对照组相比，实验组大鼠的行走姿势更加稳定，四肢活动更加协调。

通过Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分法进行评估，实验组大鼠的评分明显高于对照组。

2. 组织学分析通过组织学切片观察，发现实验组大鼠的脊髓损伤部位出现了更多的髓鞘再生和轴突再生现象。

此外，实验组大鼠的脊髓组织中神经元数量也明显增多。

3. 治疗效果分析通过对实验数据进行统计分析，发现神经干细胞移植联合电针治疗在促进大鼠脊髓损伤修复方面具有显著优势。

与单独使用神经干细胞移植或电针治疗相比，联合治疗组的大鼠在行为学评估和组织学分析方面均表现出更好的治疗效果。

四、讨论本研究表明，神经干细胞移植联合电针治疗对大鼠脊髓损伤的修复具有显著的促进作用。

这可能与以下因素有关：1. 神经干细胞的移植为脊髓损伤部位提供了新的细胞来源，有助于促进髓鞘再生和轴突再生；2. 电针治疗可能通过刺激损伤部位的神经组织，促进其再生和修复；3. 联合治疗可能具有协同作用，使得两种治疗方法在促进脊髓损伤修复方面发挥出更大的优势。

脊髓继发性损伤大鼠动物模型的制作【摘要】目的观察继发性脊髓损伤大鼠。

方法用组织化学和电子显微镜投射方法观察大鼠脊髓前角运动神经原细胞的变化。

结果继发性脊髓损伤大鼠脊髓前角运动神经细胞化学组织染色的改变。

结论组织化学染色反应物减少及电子显微镜的超微改变证明脊髓继发损伤动物模型制作成功。

【关键词】继发性脊髓损伤；化学组织染色；大鼠急性脊髓损伤后开始时常为不完全性，最后结果常为两种损害机制引起：原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤(SSCI)。

继发性脊髓损伤为伤后几小时至几天发生的一系列损伤激活的自身破坏过程，使最初病灶周围原来完整的组织发生自身破坏性病变，周围神经功能损害逐渐发展。

所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤[1]。

1 材料与方法1.1 实验材料雄性SPF大鼠60只，电子显微镜，化学试剂。

1.2 实验动物分组本实验选用雄性健康SPF大鼠60只，体重260～300 g，正常对照组：20只。

动物模型组的组织化学染色：20只。

动物模型组的电子显微镜组：20只。

1.3 实验方法1.3.1 继发性脊髓损伤大鼠模型制备1%戊巴比妥钠腹腔麻醉动物(30 mg/kg)，俯卧位固定于立体定位仪上。

以T10为中心暴露上下位锥板，咬除椎板，保持硬脊膜完整。

在T10阶段节段脊髓表面垫一曲度与脊髓表面一致的3 mm×8 mm塑料片，用30 g重物垂直压迫T10节段脊髓10 min，逐层缝合肌肉皮肤。

符合以下条件的大鼠归入损伤组：压迫时身体痉挛性颤动、尾巴痉挛性摆动、双下肢及躯体回缩样扑动；压迫后硬脊膜内充血或水肿，双下肢呈迟缓性瘫痪，斜板实验测定最大角度＜30°。

对照组大鼠只暴露脊髓。

术后不同时间点处死动物，4％多聚甲醛灌注固定，无菌条件下取损伤节段脊髓组织约1.0 cm，液氮保存或石蜡包埋。

1.3.2 组织染色标本的取材对实验动物用1％戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min滴入1％肝素钠的生理盐水500 ml，同时剪开右心耳。

《神经干细胞移植联合电针治疗对大鼠脊髓损伤的修复作用研究》一、引言脊髓损伤（SCI）是一种严重的神经系统疾病，常常导致感觉、运动功能的永久性丧失。

当前，对于脊髓损伤的治疗手段仍然有限，效果并不理想。

近年来，随着神经干细胞移植技术的发展以及中医传统疗法的深入研究，我们提出了将神经干细胞移植与电针治疗相结合的疗法。

这一联合治疗方法被寄予厚望，可能为脊髓损伤的治疗提供新的思路。

本研究通过大鼠模型，探讨这一联合治疗方法对脊髓损伤的修复作用。

二、方法本研究采用了大鼠脊髓损伤模型，通过对实验大鼠进行神经干细胞移植联合电针治疗，观察其修复效果。

具体方法如下：1. 模型建立：采用大鼠脊髓撞击法建立脊髓损伤模型。

2. 神经干细胞移植：将培养的神经干细胞注射至大鼠脊髓损伤部位。

3. 电针治疗：在神经干细胞移植后，对大鼠进行电针治疗，以刺激脊髓神经的再生。

4. 对照实验：设立正常对照组和单纯脊髓损伤组、单纯神经干细胞移植组、单纯电针治疗组以及联合治疗组。

5. 观察指标：包括大鼠的运动功能恢复情况、神经元存活率、神经纤维再生情况等。

三、结果1. 运动功能恢复：联合治疗组的大鼠在经过治疗后，其运动功能恢复情况明显优于其他各组。

2. 神经元存活率：联合治疗组的神经元存活率明显高于其他各组，说明联合治疗能够有效地保护神经元免受损伤。

3. 神经纤维再生情况：联合治疗组的神经纤维再生情况最为显著，明显优于其他各组。

四、讨论本研究结果表明，神经干细胞移植联合电针治疗对大鼠脊髓损伤的修复具有显著的促进作用。

这一联合治疗方法能够有效地保护神经元免受损伤，促进神经纤维的再生，从而帮助大鼠恢复运动功能。

对于其作用机制，我们推测，神经干细胞的移植能够提供充足的细胞来源，促进脊髓的自我修复；而电针治疗则能够刺激脊髓神经的再生，促进神经纤维的生长。

二者相结合，能够发挥协同作用，提高治疗效果。

此外，我们还需进一步研究如何提高神经干细胞的存活率和分化效率，以及电针治疗的最佳参数和疗程，以优化这一联合治疗方法。

脊髓损伤是一种严重的神经系统疾病，其特点是神经传导功能的丧失。

脊髓损伤不仅给患者带来极大的痛苦，而且对其生活质量造成严重影响。

近年来，随着神经再生和再生医学的发展，脊髓损伤的修复研究取得了显著进展。

本研究旨在通过实验模拟老鼠脊髓损伤，探究脊髓损伤修复的机制和策略。

二、实验材料与方法1. 实验动物：选取健康成年雄性SD大鼠30只，体重200-250g，随机分为实验组与对照组，每组15只。

2. 实验分组：（1）实验组：模拟脊髓损伤，给予损伤修复干预；（2）对照组：模拟脊髓损伤，不给予损伤修复干预。

3. 实验步骤：（1）模拟脊髓损伤：采用脊髓损伤模型，将大鼠进行全身麻醉，暴露T10-T12脊髓，使用微细剪刀在脊髓中心造成损伤。

（2）损伤修复干预：实验组在损伤后24小时内给予神经生长因子（NGF）和神经节苷脂（GM1）的联合治疗，对照组给予等量的生理盐水。

（3）观察指标：观察两组大鼠的脊髓损伤修复情况，包括运动功能评分、脊髓损伤长度、神经传导速度等。

4. 数据分析：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行分析，比较两组大鼠脊髓损伤修复情况。

三、实验结果1. 运动功能评分：实验组大鼠的运动功能评分显著高于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著改善脊髓损伤后的运动功能。

2. 脊髓损伤长度：实验组大鼠的脊髓损伤长度显著短于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著缩短脊髓损伤长度。

3. 神经传导速度：实验组大鼠的神经传导速度显著高于对照组（P<0.05），表明神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著提高脊髓损伤后的神经传导速度。

本研究通过模拟老鼠脊髓损伤，探讨了神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗对脊髓损伤修复的影响。

结果表明，神经生长因子和神经节苷脂的联合治疗能显著改善脊髓损伤后的运动功能、缩短脊髓损伤长度和提高神经传导速度。

脊髓损伤修复是一个复杂的过程，涉及多种细胞、分子和信号通路。

大鼠完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后运动终板变化作者：段强彭卫华1 樊继军席学礼陈磊【摘要】目的研究完全性脊髓横断及坐骨神经损伤后损伤平面以下乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide ，CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化。

方法选取57只雌性大鼠，30只制作成完全性脊髓损伤及修复模型，24只制作成坐骨神经损伤模型，通过AchE组化染色、镀银染色和CGRP免疫组织化学法观察脊髓损伤和坐骨神经损伤后AChE、CGRP在运动终板分别1 w、1、3、6、12个月的改变。

结果脊髓损伤后1 w、1个月AChE组织化学显示与正常运动终板相比无明显变化(P&gt;0.05)。

至3、6、12个月与正常相比有统计学差异(P&lt;0.05);但12个月与6个月相比无统计学差异。

脊髓损伤后3个月时，CGRP免疫染色阳性部分与正常组相比有明显统计学差异(P&lt;0.01)。

至6、12个月CGRP免疫阳性染色部位与正常相比有统计学意义(P&lt;0.05)。

而坐骨神经损伤后AChE 含量下降，终板退变，CGRP含量明显降低甚至消失，镀银染色未发现改变。

结论脊髓损伤后功能相关蛋白含量下降，终板发生退变，退变程度明显较周围神经损伤后轻，这对于改善损伤脊髓功能后恢复运动功能提供了可能。

【关键词】运动终板;乙酰胆碱酯酶;降钙素基因相关肽;脊髓损伤;坐骨神经运动终板是运动神经元末梢与肌纤维连接的特化结构，损伤后其运动功能的恢复要依赖于运动终板结构的保存、再生、重建及其正常生理功能的恢复。

运动终板的病理变化和功能与选择的治疗方法、治疗效果的评价存在着密切的关系。

目前对于神经系统损伤后尤其是脊髓损伤后损伤平面以下联系效应器(骨骼肌)的神经乃至运动终板发生怎样的变化及变化程度文献报道亦有差异〔1，2〕，本研究采用组织化学、免疫组化等方法研究脊髓及坐骨神经损伤后乙酰胆碱酯酶(AChE)、降钙素基因相关肽(CGRP)在骨骼肌运动终板中的变化，探讨脊髓损伤后损伤平面以下骨骼肌的功能情况，为改善损伤后脊髓功能的研究奠定基础。

《大鼠脊髓损伤后不同时间点AADC细胞产生5-HT的相关研究》篇一一、引言脊髓损伤（SCI）是一种严重的神经系统损伤，其康复过程复杂且充满挑战。

近年来，关于脊髓损伤后神经元再生与修复的研究日益增多，其中，芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）细胞在5-羟色胺（5-HT）合成过程中的作用逐渐受到关注。

本篇研究主要探讨了脊髓损伤后不同时间点，大鼠脊髓内AADC细胞与5-HT 之间的关系。

我们通过这一研究，以期能够更好地理解脊髓损伤的修复机制，并为未来临床治疗提供新的思路和依据。

二、材料与方法（一）实验动物及分组实验采用成年SD大鼠，共分为三组：对照组（无损伤）、模型组（脊髓损伤后不同时间点）、治疗组（脊髓损伤后接受药物治疗）。

（二）脊髓损伤模型建立采用改良Allen法建立大鼠脊髓损伤模型。

（三）样本采集与处理分别在脊髓损伤后不同时间点（如：1天、3天、7天、14天、28天等）取材，利用免疫荧光、免疫组化等技术进行检测。

（四）检测指标与方法检测指标包括AADC细胞活性、5-HT含量等。

采用Western Blot、荧光定量PCR等方法进行检测。

三、结果（一）AADC细胞活性变化实验结果显示，在脊髓损伤后，AADC细胞的活性在早期（如1-3天内）出现明显下降，随后逐渐恢复。

在对照组中，AADC细胞的活性保持稳定。

（二）5-HT含量变化与AADC细胞活性变化相似，脊髓损伤后，5-HT含量在早期出现明显下降，随着时间推移逐渐恢复。

在对照组中，5-HT含量保持稳定。

（三）AADC细胞与5-HT的关系通过相关性分析发现，AADC细胞活性与5-HT含量之间存在显著正相关关系。

即AADC细胞活性越高，5-HT含量也越高；反之亦然。

这表明AADC细胞在5-HT的合成过程中起着重要作用。

四、讨论本实验结果表明，在脊髓损伤后，AADC细胞的活性及5-HT 含量均出现明显变化。

这一现象可能与神经元再生与修复过程有关。

AADC细胞在5-HT的合成过程中发挥重要作用，而5-HT作为一种重要的神经递质，对神经元再生与修复具有促进作用。