应用间接ELISA法检测牛(牦牛)原虫病感染的试验报告
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况 做 了调 查Ｉ１ ５。 ４
１ 。 取 出试 剂 盒 ，用蒸 馏 水 或 去 离 子 水稀 释 ２ ．１ ４ ０ 倍 浓度 的洗 涤液 （ 释之 前确保 所 有 的结 晶 已经溶 稀
解 ， 用 时溶液 置于 ４Ｉ 存 ） 不 ｃ保 ＝ 。
作 为 免 疫 学 检 查 法 之 一 的 酶 联 免 疫 吸 附试 验
音 布鲁克 、 塔城 、 昌吉 、 克逊 等 ５个地 区共 ９ 托 １份样
１２ 仪器 设 备 ＿
新孢 子 虫 是一 种 细胞 内寄 生性 原 虫 ， 为其 主 犬
要 的终 末 宿 主 ， 他 多 种 哺乳 动 物 和犬 本 身 都 可作 其
为 中间 宿主 。新孢 子虫 病是 由犬 新孢 子虫 寄生 于多
（ ＬＳ ， 作 简 便 ， Ｅ ＩＡ） 操 不需 要 特 殊 仪器 设 备 ， 于标 易
准化 ， 济实用 。作者应 用 酶联 免疫 吸 附试 验 （ 经 主要
１４２ 加 一 抗 ： 洗 涤缓 冲 液 冲 洗 ２次 ； 稀 释缓 ．． 用 用 冲液按 １ ０ ： ０滴 度稀 释 被检 血 清后 ，每个 样 品 平行 １ 加 到微量 板 的两 个孔 中 ， 每孔 １０ ｌ置 ３ ℃生 化 培 ０１， ７ ｘ 养箱 温育 １ 。 ｈ １４３ 加二 抗 ： 洗 涤 缓 冲 液 冲洗 ２次 ； 稀 释 液 ．． 用 用
种 动物 引起 的 ， 泛分 布于 世界 各地 ， 广 主要 危 害是 引
Ｋ Ｓ － ３ ０型酶 标仪 ；０ ｌ１０ ｌ２ ０ ｌ 量 ＨＢ Ｔ ６ ５ ｕ 、０ ｕ 、０ ｕ 微 移液 器 ； ＬＳ Ｅ ＩＡ板 、 Ｉ Ｉ Ｅ ２ 一 Ｒ 型高 速 低 温离 心 ＤＧＣ Ｎ ０
机购 ［ 西班 牙 Ｏ Ｔ Ｌ Ｅ Ａ公 司 。 ｊ Ｒ ＯＡ Ｒ Ｓ １３ ｒ Ｓ ． Ｅ ｌＡ试 剂盒 及其 组装 Ｌ
起孕 畜 的流产 或 死胎 ， 以及 新生 儿 的运动 神经 障碍 ， 对 牛 的危 害 尤 为严 重 ， 要 为导 致 流 产 。有 的牛 群 主 血 清抗 体 阳性率 可 达 到 ８ ％ ， 引起 牛 流产 的主 要 ０ 是 原 因 之一 【 ｌ １ 。我 国奶 牛 的血清 抗 体 阳性 率 为 ３ ％左 ０ 右『 １ 我 区初 次报道 新孢 子虫 病 （ １ 。在 － ２ 徐雪平 ，０ １［ ２ ０ ）１ ２
是 用 重组 Ｅ ＩＡ） Ｌ Ｓ 对来 自不 同地 区 的 ９ １份样 品 进行 了检 测 ， 出了其 阳性 率 ， 查 为细胞 内寄生 原虫病 的检 疫、 防控 提供 一定 的技 术支 撑 。 １ 试 验 材 料 与 方 法
１１ 血清 的收 集 与保存 ．
按 １ ０ ： Ｏ ｏ滴度 稀 释辣 根 过 氧化 物 酶 标 记的兔 抗 牛 ４
关键 词 ： 类 动 物 ； 孢 子 虫病 ； 牛 新 间接 Ｅ Ａ 法 ； 测 ＵＳ 检 中 图 分 类 号 ：８ ４４３ ￥５． 文 献 标 识 码 ： Ｂ
一
２ ℃冰箱 中保 存 备用 ，０ １ ６ ９月 ， 别 收 集 巴 ０ ２１ 年 ～ 分
品。
文章编号 ：０ ３ ４ ８ ｛０ ２ ０ — ０ ４ ０ １０ — ８ ９ ２ １ ）８ ０ ３ ～ ２
摘 要 ： 了防 治牛 （ 牛 ） 胞 内寄 生 的 原 虫病 — — 新 孢 子 虫病 ， 们 随机 采 集 了流 产 牛 和 非 流产 牛 的 血 样 共 ９ 份 。 新 孢 为 牦 细 我 １ 用
子 虫 ｒＬＳ 试 剂 盒 对 ９ 份 被 检 样 品 进 行 了检 测 。 结 果 显 示 ，在 ９ Ｅ ＩＡ １ １份 样 品 中 ， 新孢 子 虫感 染的 有 １ ３份 阳性 ， 其 阳性 率 为 １ Ｉ ， 明在 被 检 血 来 源 区的 牛 类 动 物均 感 染新 孢 子 虫病 ， 该 加 强 防 范 。 ４３ 说 ％ 应
ＩＧ抗体 ， ｇ 稀释 后 每孔 加 １ ０ ｌ每 孔 ｌ０ ． ３ ℃ ０１ ， ｘ ０ｐ， ７ Ｉ 生化 培养 箱 温育 １ 。 ｈ １４４ 加 底物 ： 洗 涤 缓 冲液 冲洗 ２次 ； ．． 用 ¨ 个孔
中加 入 底 物溶液 １ ０ １（ 物 中 ０１ 底 ￣ ０３ ｇｍｌ 举 ．ｍ ／ 邻
以来 ， 多 兽 医工 作 者相 继 对新 疆 地 区犬新 孢 子 虫 许
试剂 盒 由新 疆农 业 大学 动物 医学学 院寄生 虫教
研室 自制 ，新孢 子 虫临床 阳性 血 清 和临床 阴性 血 清 由新疆 农 业大 学寄 生虫 实验 室保存 备 用 ；二抗 为辣
根 过氧 化 物酶 标记 的羊抗 牛 血 清 ， 自 Ｂ Ｔ Ｌ公 购 Ｅ ＨＹ
司。 本 实验室 已成 熟 的新孢 子虫病 ｒ ＬＳ 按 Ｅ ＩＡ抗体 检 测试 剂 盒组装 方 法进行 试剂 盒组 装 。 １ ｒ ｌＡ试剂 盒检 测新孢 子 虫抗体 ． ４ Ｅ Ｓ Ｌ
病 进 行一 些 试 验研 究 。如 陈亮［ 哈希 巴特［ ３ １ 、 ４ １ 等分 别 对 我 区不 同地 区牛 （ 包括 牦 牛 ） 新孢 子 虫病 的感染 情
业
Байду номын сангаас
２１ ０ ２年第 ８期
应用 间接 Ｅ ＩＡ 法检测牛 （ ＬＳ 牦牛 ） 原虫病感染 的试 验报 告
张 玉 婷 ， 巴音 达 来 ， 张 迪 ， 张 扬 ， 巴音 查 汗
（ ． 疆农业 大 学动物 医学学 院 ， １新 新疆 乌 鲁木 齐 ８ ０ ５ ； ３ ０ ２ ２和静 县 巴音布 鲁 克镇兽 医站 ， 疆 和静 ８ １ １ ） ． 新 ３ ４ ３
颈 静 脉 采 血 （ 、 牛 血 液 ） 分 离 血 清 后 均 在 牛 牦 ，
收 稿 日期 ： ０ ２ ０ 一ｌ ２１—６ １
基金 项 目 ： 疆 农 业 大学 紧缺 人 才 专 业 大 学 生 创新 项 目 新
（ ｚｐ ２ ｌ１６ ； 疆维 吾 尔族 自治 区 高校 科研 计 ｊ ｙ ４ ０ ｌ０ ）新 ｑ
１ 。 取 出试 剂 盒 ，用蒸 馏 水 或 去 离 子 水稀 释 ２ ．１ ４ ０ 倍 浓度 的洗 涤液 （ 释之 前确保 所 有 的结 晶 已经溶 稀
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作 为 免 疫 学 检 查 法 之 一 的 酶 联 免 疫 吸 附试 验
音 布鲁克 、 塔城 、 昌吉 、 克逊 等 ５个地 区共 ９ 托 １份样
１２ 仪器 设 备 ＿
新孢 子 虫 是一 种 细胞 内寄 生性 原 虫 ， 为其 主 犬
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为 中间 宿主 。新孢 子虫 病是 由犬 新孢 子虫 寄生 于多
（ ＬＳ ， 作 简 便 ， Ｅ ＩＡ） 操 不需 要 特 殊 仪器 设 备 ， 于标 易
准化 ， 济实用 。作者应 用 酶联 免疫 吸 附试 验 （ 经 主要
１４２ 加 一 抗 ： 洗 涤缓 冲 液 冲 洗 ２次 ； 稀 释缓 ．． 用 用 冲液按 １ ０ ： ０滴 度稀 释 被检 血 清后 ，每个 样 品 平行 １ 加 到微量 板 的两 个孔 中 ， 每孔 １０ ｌ置 ３ ℃生 化 培 ０１， ７ ｘ 养箱 温育 １ 。 ｈ １４３ 加二 抗 ： 洗 涤 缓 冲 液 冲洗 ２次 ； 稀 释 液 ．． 用 用
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Ｋ Ｓ － ３ ０型酶 标仪 ；０ ｌ１０ ｌ２ ０ ｌ 量 ＨＢ Ｔ ６ ５ ｕ 、０ ｕ 、０ ｕ 微 移液 器 ； ＬＳ Ｅ ＩＡ板 、 Ｉ Ｉ Ｅ ２ 一 Ｒ 型高 速 低 温离 心 ＤＧＣ Ｎ ０
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关键 词 ： 类 动 物 ； 孢 子 虫病 ； 牛 新 间接 Ｅ Ａ 法 ； 测 ＵＳ 检 中 图 分 类 号 ：８ ４４３ ￥５． 文 献 标 识 码 ： Ｂ
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摘 要 ： 了防 治牛 （ 牛 ） 胞 内寄 生 的 原 虫病 — — 新 孢 子 虫病 ， 们 随机 采 集 了流 产 牛 和 非 流产 牛 的 血 样 共 ９ 份 。 新 孢 为 牦 细 我 １ 用
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试剂 盒 由新 疆农 业 大学 动物 医学学 院寄生 虫教
研室 自制 ，新孢 子 虫临床 阳性 血 清 和临床 阴性 血 清 由新疆 农 业大 学寄 生虫 实验 室保存 备 用 ；二抗 为辣
根 过氧 化 物酶 标记 的羊抗 牛 血 清 ， 自 Ｂ Ｔ Ｌ公 购 Ｅ ＨＹ
司。 本 实验室 已成 熟 的新孢 子虫病 ｒ ＬＳ 按 Ｅ ＩＡ抗体 检 测试 剂 盒组装 方 法进行 试剂 盒组 装 。 １ ｒ ｌＡ试剂 盒检 测新孢 子 虫抗体 ． ４ Ｅ Ｓ Ｌ
病 进 行一 些 试 验研 究 。如 陈亮［ 哈希 巴特［ ３ １ 、 ４ １ 等分 别 对 我 区不 同地 区牛 （ 包括 牦 牛 ） 新孢 子 虫病 的感染 情
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Байду номын сангаас
２１ ０ ２年第 ８期
应用 间接 Ｅ ＩＡ 法检测牛 （ ＬＳ 牦牛 ） 原虫病感染 的试 验报 告
张 玉 婷 ， 巴音 达 来 ， 张 迪 ， 张 扬 ， 巴音 查 汗
（ ． 疆农业 大 学动物 医学学 院 ， １新 新疆 乌 鲁木 齐 ８ ０ ５ ； ３ ０ ２ ２和静 县 巴音布 鲁 克镇兽 医站 ， 疆 和静 ８ １ １ ） ． 新 ３ ４ ３
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基金 项 目 ： 疆 农 业 大学 紧缺 人 才 专 业 大 学 生 创新 项 目 新
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