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丙型肝炎病毒多表位抗原的原核表达及免疫原性分析作者：孙文佳, 赵红玲, 刘龙丁, 董承红, 纳锐雄, 赵树栋, 李琦涵【摘要】目的: 研究丙型肝炎病毒(HCV)十表位抗原HCVe在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。
方法: 在大肠杆菌DH5α中表达非融合蛋白HCVe, 纯化该蛋白后利用Westerb blot分析其抗原反应性。
免疫小鼠, 检测其免疫特异性。
结果: HCVe十表位抗原能在原核表达系统中高效表达。
Western blot和ELISA分析表明HCVe十表位抗原能与HCV病人阳性血清特异性结合, 并可诱发小鼠产生特异性HCV抗体。
结论: 表达的HCVe十表位抗原具有特异的抗原反应性及免疫原性。
【关键词】丙型肝炎病毒; 多表位抗原; 体液免疫丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)是经血液途径传播的一类肝炎病毒。
目前全球约有1.7亿～2.0亿HCV感染者, 此感染者中70%～85%可发展成为慢性感染, 病程长达20～30年[1], 约有30%可发展成为进展性肝病, 包括肝硬化或肝癌[2]。
目前, 对HCV 慢性感染尚无高效的特异性治疗方法, 标准治疗方案是聚乙二醇干扰素α联合利巴韦林治疗24～72周, 由于干扰素和利巴韦林副作用巨大, 使部分患者无法耐受而提前终止治疗[3]。
因此迫切需要研发一种有效疫苗来预防HCV感染。
由于HCV复制力差、感染力弱, 基因组高度变异, 并且缺乏有效的细胞和动物感染模型, 因此采用传统方法研制丙肝疫苗难以达到目的[4]。
以抗原表位预测和人工合成抗原表位基因为基础的多表位疫苗是近年来新的研究趋势[5], 表位肽虽然微小, 但免疫原性强, 可以克服主要组织相容性复合体(major histocompability complex, MHC)分子的遗传限制, 同时多表位疫苗在诱生细胞免疫和克服免疫应答中的不利因素方面有着独特优势, 为特异性免疫治疗和基因治疗奠定了基础, 因此多表位疫苗成为HCV预防和治疗性疫苗的研究突破点。
利用DNAStar软件预测热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的抗原表位王晓哲;肖正泮;韦双双;王大勇;裴业春【摘要】利用DNAStar Protean软件对热带无爪螨主要致敏原Blo t 5的二级结构和表面特性进行分析,如理化性质、亲水性、表面可及性、可塑性等,预测Blo t5蛋白的B抗原表位和T抗原表位.实验结果表明,Blo t5蛋白的二级结构以α螺旋为主,存在6个潜在的B抗原表位位点,可能的B抗原表位区域有:18-31,39-48,56-77,86-101,105-112,117-133氨基酸残基或其附近.含有7个潜在的T细胞抗原表位区域:32-37,40-44,57-65,70-79,86-95,100-104,115-120氨基酸残基或其附近.笔者应用Protean软件预测了热带无爪螨主要致敏原Blot 5的抗原表位,为进一步研究Blot 5致敏原的结构与功能,研制针对热带螨的预防性和治疗性疫苗、开发相应的诊断试剂盒奠定了基础.%The secondary structure and surface properties of Blot 5 allergen from Blomia tropicalis,such as physical and chemical characters,hydrophilicity,surface probability,flexible regions and antigenicity,were analyzed by using the DNAStar Protean software to predict B-cell and T-cell epitopes of Blot.5.The secondary structure of Blot 5 was rich in alpha helix,and the Blo t 5 contained six potential B cell epitopes located at 18-31,39-48,56-77,86-101,105-112,117-133 amino acid residues or nearby.There were seven potential T cell epitopes located at 32-37,40-44,57-65,70-79,86-95,100-104,115-120 amino acid residues or nearby.The epitopes of the major allergen Blot 5 from B.tropicalis were predicted by using the Protean software.The results can provide a base for the studies of structure and function of the allergen Blot 5,anddevelopment of preventive and therapeutic vaccines for Blomia tropicalis and diagnostic kits for detection of allergens induced by B.tropicalis.【期刊名称】《热带生物学报》【年(卷),期】2017(008)001【总页数】6页(P107-112)【关键词】热带无爪螨;抗原表位;Blo t 5;DNAStar 软件【作者】王晓哲;肖正泮;韦双双;王大勇;裴业春【作者单位】海南大学热带农林学院动物科技学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院生物学院,海口570228;海南大学热带农林学院动物科技学院,海口570228【正文语种】中文【中图分类】R384.4尘螨是支气管哮喘发生的重要诱因之一，对尘螨敏感的人口比例高达10%，而在过敏性哮喘病人中，这个比例超过90%(美国过敏、哮喘和免疫学会网站数据，ACAAI)。
·141·单纯疱疹病毒性角膜炎是由Ⅰ型单纯疱疹病毒 （herpes simplex virus type 1，HSV -1） 感染引起的角膜疾病。
HSV -1感染角膜后，病毒入侵角膜细胞，在角膜细胞内复制、增殖，引起细胞病变，导致细胞水肿、破裂。
单纯疱疹病毒性角膜炎急性发作期的典型临床表现为疱疹、树枝状或者地图状角膜溃疡、角膜刺激症状。
初次感染病毒后，机体免疫力强时可清除病毒，但如果机体免疫力无法清除病毒，病毒经感觉神经末梢侵入三叉神经节，进入三叉神经节后病毒不再复制增殖，在三叉神经节中潜伏即进入潜伏期，HSV -1的特点为终身潜伏［1］。
机体免疫功· 论著 ·HSV -1糖蛋白B和糖蛋白D的T细胞表位重组核酸疫苗的构建及其免疫原性王丹凤，马小力（中国医科大学附属第一医院眼科，沈阳 110001） 摘要 目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒 （HSV -1） 糖蛋白B （gB ） 和糖蛋白D （gD ） 的T 细胞表位重组核酸疫苗，并研究其作为核酸疫苗的免疫原性。
方法 登录免疫表位数据库 （IEDB ） ，查阅已发表的无症状表位，联合运用SYFPEITHI、IEDB 等生物信息学软件，预测潜在的HSV -1 gB 和gD 的T 细胞表位。
将已知表位和预测表位串联，设计并合成HSV -1 gB、gD 的T 细胞多表位基因盒 （Tg ）。
将Tg 克隆入真核表达载体pVAX，构建真核表达质粒pVAX -Tg。
pVAX -Tg 转染293T 细胞，鉴定其蛋白表达。
将pVAX -Tg 免疫小鼠，检测小鼠血清γ干扰素 （IFN -γ） 水平的变化。
结果 成功构建真核表达质粒pVAX -Tg，且该质粒能够成功转染细胞并表达目的蛋白。
将pVAX -Tg 免疫小鼠后，血清IFN -γ水平明显升高 （P < 0.001）。
结论 本研究成功设计构建HSV -1 gB 和gD 的T 细胞表位核酸疫苗，其能够在体外真核细胞中表达，并能够有效诱导细胞免疫，为HSV -1多表位核酸疫苗的研究奠定了坚实基础。
A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree of Master in EngineeringThe Predication of Immunoproteasome Cleavage SitesCandidate : Liu YingMajor : Bioinformatical TechnologySupervisor : Prof. Zhou YanhongHuazhong University of Science and TechnologyWuhan, Hubei 430074, P. R. ChinaJanuary, 2012独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。
对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。
本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。
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本论文属于不保密□。
（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要免疫蛋白酶体对蛋白质的裂解，是MHC-I途径的起始环节，限定了能被呈递以致引起CTL抗原反应多肽的基本特征。
将免疫酶切预测结果整合到MHC-I抗原表位预测中，能有效提高预测准确度。
而MHC-I抗原表位在免疫相关研究中占有重要地位，因此，免疫蛋白酶体剪切位点的预测也就具有重要意义。
高免疫原性T细胞抗原表位预测方法的研究T细胞抗原表位是T细胞抗原上具有特殊功能的肽段,能够特异性地被T细胞识别,从而激起T细胞免疫应答。
因此,研究T细胞抗原表位不仅有助于了解传染性疾病、自身免疫性疾病、过敏反应以及肿瘤等疾病的免疫应答机理,而且对计算机辅助疫苗设计起到推动作用。
生物信息技术的迅猛发展为研究T细胞抗原表位提供了有效途径。
针对目前T细胞抗原表位的研究现状,本文选择了其中的几个热点问题进行了研究。
主要工作如下：(1)结合序列信息和结构信息预测抗原表位是抗原表位预测工作的发展方向。
HLA-A2分子是人群中普遍存在的一种MHCI类分子,选择HLA-A2结合的抗原肽作为研究对象,对抗原肽的氨基酸理化性质以及其与MHC结合时的能量项进行了挖掘。
为了避免使用的特征存在冗余,影响到分类的效率和性能,利用最大相关最小冗余(MRMR)的方法对特征进行了筛选,最终筛选出了50个具有较高辨识能力的特征,构建了一个针对HLA-A2类分子抗原肽的预测方法。
预测结果表明筛选出的特征能够有效地识别HLA-A2类分子结合的抗原肽。
(2)I-Ag7分子和HLA-DQ8分子是小鼠和人类体内与Ⅰ型糖尿病有关的MHC Ⅱ类分子。
为预测这两类MHC分子限制性抗原表位,开发了GPS-MBA软件包。
将吉布斯取样算法进行了改进,获得了抗原表位的核心序列,又使用GPS算法对这些核心序列进行打分,构建出预测模型。
经过了全面的评测和比较,发现GPS-MBA 的性能要优于同类型软件。
使用此软件可以预测出大量潜在的Ⅰ-Ag7和HLA-DQ8抗原表位。
另外,设计了Ⅰ型糖尿病的抗原表位数据库(TEDB),其中包含了所有的经过实验验证或预测出的与Ⅰ型糖尿病有关的抗原表位。
(3)为了验证阴性选择假说、研究抗原表位的免疫原性,分别针对人类和小鼠两个宿主,分析了外源T细胞抗原表位和非抗原表位肽段与宿主蛋白质序列之间的相似性。
利用序列比对的方法,发现仅仅有极少量抗原表位与宿主蛋白质序列相似,这个数量低于非抗原表位肽段与宿主蛋白质序列相似的数量。
这个结果表明,外源T细胞抗原表位与宿主蛋白质序列相似性低,提示了使用与宿主蛋白质序列相似性低的抗原表位做疫苗可以有助于降低交叉免疫反应的概率、增强疫苗免疫原性、触发抗原特异性免疫应答。
(4)为了进一步开发蛋
白酶体酶切位点预测软件,以便提高预测抗原表位的准确度,开展了对现有预测软件的评估共作。
日前已经有多种方法和软件对蛋白酶体酶切位点进行预测,比较常用的软件有PAProC、MAPPP与NetChop。
使用统一的数据集对这三个软件进行性能评测,结果表明NetChop软件与另两个软件相比性能更好。
