Polo样激酶1在肾癌组织中的表达及其抑制剂BI2536对肾癌细胞株A498增殖的影响论文

中国病理生理杂志 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ２０１９，３５（５）：７９１７９６ 杂志网址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｊｐｐ．ｎｅｔ
［文章编号］ １０００４７１８（２０１９）０５０７９１０６
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ＭｉｃｒｏＲＮＡ１４５通过 ＡＤＡＭ２８抑制人肾癌细胞 Ａ４９８上皮间充质转化功能
梁 莹１， 李剑波２， 邵欣宁１， 林 柳１， 雷 鸣１△
（１广州市第八人民医院肾内科，广东 广州 ５１００６０；２中山大学附属第一医院肾内科，广东 广州 ５１００８０）
［摘 要］ 目的：探讨微小 ＲＮＡ（ｍｉＲ１４５）对人肾癌细胞 Ａ４９８上皮间充质转化（ＥＭＴ）功能的影响及其相 关机制。方法：将 Ａ４９８肾癌细胞株分别转染 ｍｉＲ１４５模拟物（Ｍ１４５）和模拟物阴性对照（ＭＮＣ），分别作为 Ｍ１４５ 组和 ＭＮＣ组，并设立空白对照（ＭＣ）组，采用 ＲＴｑＰＣＲ法检测各组细胞 ｍｉＲ１４５水平。Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ实验检测 ３组细 胞侵袭能力的变化。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测 ３组细胞波型蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）、Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ和 ＡＤＡＭ２８表达水平。应用生 物信息学方法预测 ｍｉＲ１４５的靶基因。采用 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测 ＡＤＡＭ２８过表达对 ｍｉＲ１４５抑制 ＥＭＴ的拮抗作 用。双萤光素酶报告基因实验验证 ｍｉＲ１４５与 ＡＤＡＭ２８的关系。结果：与 ＭＣ组相比，Ｍ１４５组 ｍｉＲ１４５的表达水 平显著上调（Ｐ＜００５）。Ｍ１４５组侵袭细胞数量显著低于 ＭＣ组（Ｐ＜００５）。Ｍ１４５组细胞 ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达量显 著降 低 （Ｐ＜００５），Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ蛋 白 表 达 量 显 著 升 高 （Ｐ＜００５），ＡＤＡＭ２８蛋 白 表 达 量 显 著 降 低 （Ｐ＜００５）。 ＡＤＡＭ２８过表达 Ｍ１４５组肾癌细胞中 ｖｉｍｅｎｔｉｎ蛋白表达量显著升高（Ｐ＜００５），Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白表达量显著降低 （Ｐ＜００５）。双萤光素酶报告基因实验结果显示 ＡＤＡＭ２８为 ｍｉＲ１４５的下游靶基因。结论：ｍｉＲ１４５可能通过降 低下游靶基因 ＡＤＡＭ２８水平影响 ＥＭＴ相关蛋白表达，从而抑制人肾癌细胞 Ａ４９８的 ＥＭＴ过程。

激光生物学报ACTA　LASER　BIOLOGY　SINICAVol. 32 No. 4Aug . 2023第32卷第4期2023年8月收稿日期：2023-03-11；修回日期：2023-05-26。

基金项目：山西省自然科学基金面上项目（201901D 111371）。

* 通信作者：邓双年，主治医师，主要从事各种实体肿瘤内科治疗方面的研究。

E-mail: dsn 9484647251@ 。

安罗替尼对肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及对PI3K/AKT 通路的调控邓双年a*，李　娟b ，李　辉c（临汾市人民医院 a. 肿瘤科；b. 消化科；c. 胸外科，临汾 041000）摘　要：基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI 3K ）/丝苏氨酸蛋白激酶（AKT ）信号通路探究安罗替尼对A 549细胞增殖、凋亡的影响。

将A 549细胞分为对照组、各剂量试验组、安罗替尼组、阳性药物组、抑制剂组和激活剂组。

干预24 h 后检测A 549细胞活力、细胞形态、增殖率、凋亡情况及相关蛋白的表达水平。

结果显示：20 μmol/L 安罗替尼处理后，A 549细胞活力降低；安罗替尼组和阳性药物组较对照组A 549细胞生长受到抑制，细胞增殖率、细胞周期素D 1（Cyclin D 1）及p-PI 3K 、p-AKT 的表达水平降低，细胞凋亡数量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达水平升高。

抑制剂增强了上述各指标的变化，而激活剂则具有与抑制剂相反的趋势。

该研究结果说明，安罗替尼可显著抑制人肺癌A 549细胞的增殖并促进其凋亡，其作用机制可能与抑制PI 3K/AKT 通路的信号转导相关。

该研究结果进一步说明了安罗替尼作为抗肺癌药物的潜在价值，为抗肺癌药物的研发提供了新的理论基础。

关键词：安罗替尼；肺癌；激酶信号通路；增殖；凋亡中图分类号：R 734.2 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1007-7146.2023.04.009Effect of Anlotinib on Proliferation and Apoptosis of Lung Cancer cellA549 and Regulation of PI3K/AKT PathwayDENG Shuangnian a*, LI Juan b , LI Hui c(Linfen People ’s Hospital a. Department of Oncology; b. Department of Gastroenterology; c. Department of Thoracic Surgery,Linfen 041000, China)Abstract: To investigate the effects of anlotinib on proliferation and apoptosis of A 549 cells based on phosphatidylinosi-tol 3-kinase (PI 3K)/serine-threonine protein kinase (AKT) signaling pathway. A 549 cells were divided into the control group, the experimental groups with different doses, the anlotinib group, the positive drug group, the inhibitor group and the activator group. The intervention time was 24 hours. The cell viability, cell morphology, the rate of proliferation, apoptosis and related protein expression levels were detected. The results showed that cell viability decreased after treatment with 20 μmol/L anlo-tinib. Compared with the control group, the cell growth of anlotinib group and positive drug group was inhibited, the cell prolif-eration rate, cysteinyl aspartate specific proteinase D 1 (Cyclin D 1) and the expression levels of p-PI 3K and p-AKT decreased, and the number of apoptosis cells and the expression of cysteine aspartic protease-3 (Caspase-3) increased. The inhibitor en-hanced these changes, while the activator had the opposite trend to the inhibitor. These results of this study indicate that anlotinib can significantly inhibit the proliferation and promote apoptosis of A 549 cells, and its mechanism might be related to the inhibi-tion of PI 3K/AKT pathway signal transduction. The results of this study further illustrate the potential value of antilung cancer drugs and provide a new theoretical basis for the research and development of anti-lung cancer drugs.Key words: anlotinib; lung cancer; kinase signaling pathway; proliferation; apoptosis （Acta Laser Biology Sinica , 2023, 32(4): 360-367）361第4期肺癌（lung cancer）为常见恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国居于首位［1］。

加入脾氨肽口服液培养的人肺癌细胞系A549增殖凋亡及线粒体膜电位、活性氧簇表达观察石颖慧1，王铁山2，王煊3，卢涛11 北京中医药大学生命科学学院，北京102488；2 北京中医药大学北京中医药研究院；3 北京中医药大学第三附属医院呼吸科摘要：目的　观察脾氨肽口服液对人肺癌细胞系A549增殖凋亡迁移是否有影响，并进一步探讨脾氨肽口服液的可能作用机制。

方法　取对数生长期A549细胞，随机分为四组，1、2、3组分别在含10%胎牛血清的DMEM 培养基中加入0.5、1.0及2.0 mg /mL 脾氨肽口服液，4组不做任何处理，观察细胞的增殖、凋亡及迁移情况，检测各组细胞线粒体膜电位及活性氧簇（ROS ）。

结果　与4组比较，培养24 h 时1、2、3组细胞的细胞活力低，各时间点2、3组细胞的细胞汇合度低、相对划痕区域密度小；培养24 h 时1、2、3组细胞的细胞凋亡率高，线粒体膜电位低，培养24 h 时2、3组细胞的ROS 相对表达量高（P 均<0.05）。

随脾氨肽口服液浓度上升，A549细胞活力逐渐下降、细胞汇合度降低、细胞凋亡率升高、相对划痕区域密度降低、线粒体膜电位下降，ROS 相对表达量升高，且呈剂量依赖性（P 均<0.05）。

结论　脾氨肽口服液可抑制A549细胞的增殖迁移，促进细胞凋亡，其中2.0 mg /mL 的脾氨肽口服液作用更明显。

脾氨肽口服液可能通过降低细胞线粒体膜电位、促进细胞ROS 表达抑制A549细胞的增殖迁移、促进细胞凋亡。

关键词：脾氨肽口服液；肺癌；细胞增殖；细胞凋亡；细胞迁移；线粒体膜电位；活性氧簇doi ：10.3969/j.issn.1002-266X.2023.30.002中图分类号：R734.2 文献标志码：A 文章编号：1002-266X （2023）30-0006-05Observation on proliferation ， apoptosis ， mitochondrial membrane potential ， and expression of reactive oxygen species in human lung cancer cell line A549 cultured with spleen aminopeptide oral solution SHI Yinghui 1， WANG Tieshan ， WANG Xuan ， LU Tao1 School of Life Sciences ， Beijing University of Traditional Chinese Medicine ， Beijing 102488， ChinaAbstract ： Objective To observe whether spleen aminopeptide oral solution has any effect on the proliferation ，apoptosis and migration of human lung cancer cell line A549， and to further explore the possible mechanism of action of spleen aminopeptide oral solution. Methods A549 cells in the logarithmic growth phase were randomly divided into four groups ： groups I ， II ， III ， and IV. Cells in the groups I ， II and III were added with 0.5， 1.0 and 2.0 mg /mL spleen ami‐nopeptide oral solution in DMEM medium containing 10% fetal bovine serum ， and cells in the group IV were not treated. We observed the proliferation ， apoptosis ， and migration of cells and detected the mitochondrial membrane potential and re‐active oxygen species （ROS ） in cells of each group. Results Compared with the group IV ， the cell viability of cells in the groups I ， II and III at 24 h of culture was lower ， the cell confluence of cells in the groups II and III at all time points was lower ， and the density of relative scratch area was smaller ； the apoptosis rates of the groups I ， II and III at 24 h of cul‐ture were higher ， the mitochondrial membrane potential was lower ， and the relative expression levels of ROS in cells in the groups II and III at 24 h of culture were higher （all P <0.05）. With the increase of the concentration of splenic aminopep‐tide oral olutionn ， the viability of A549 cells gradually decreased ， the cell confluence decreased ， the apoptosis rate in‐creased ， the density of relative scratch area decreased ， the mitochondrial membrane potential decreased ， and the relative expression of ROS increased ， and it was in a dose -dependent manner （all P <0.05）. Conclusion Spleen aminopeptide oral solution could inhibit the proliferation and migration of A549 cells and promote the apoptosis of these cells ， withthe most obvious effect of spleen aminopeptide oral solution at a concentration of 2.0 mg /mL. The spleen aminopeptide oral solution might exert the above effects by decreasing the mitochondrial membrane potential and promoting the expres‐第一作者简介：石颖慧（1998-），女，硕士，主要研究方向为免疫调节。

老 年医学与 保健 ２ ０ １ ３ 年第 １ ９卷第 ３ 期Ｇ ｅ ｒ ｉ ａ ｔ ｒ Ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ Ｃ ａ ｒ ｅ ， ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． １ ９ ． Ｎｏ ． ３
腺病毒介 导 的 Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ基 因沉默抑制 肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ
细胞增殖 并促进 细胞凋亡
ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｉ ｎ ｅ ７ ８ ６ — ０ｉ ｎｖ ｉ ｔ ｒ ｏ Ｌ Ｗｅ ｎ － ｊ ｕ ｎ ，Ｘ Ｉ ＡＳ ｈ ｉ － ｊ ｉ ｎ ．Ｚ Ｈ Ａ ＮＧＸ ｉ ａ ｏ － 髓 Ｙ ＥＺ ｈ ｉ — ｂ ｉ ｎ ，
Ｈｕ ａ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ，Ｆ ｕ ｄ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ２ ０ ０ ０ ４ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
陆文俊 夏世金 张 晓 丽 叶 志斌 吴毓 敏
【 摘 要】目的 应用腺病毒技术下调 Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ ＯＲ表达水平 ， 检测 Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ基 因沉默对人肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞增殖和凋
亡的影响。方法 收集人 肾癌及癌旁样品 ，Ｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ检测两组样 品中 Ａ ｋ ｔ 和 ｍＴ Ｏ Ｒ的 ｍＲ ＮＡ水平 。利用病毒包
沉默后 ，肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞增殖 、凋亡及 Ｐ Ｃ ＮＡ表达水平的改变 。结果 与癌旁组织相比，Ａ ｋ ｔ 和 ｍＴ Ｏ Ｒ的 ｍＲ ＮＡ水
平在肾癌组织 中分别上调 了 ２ ． ６ １ ３和 ３ ． ２ ５ ４倍 。成功获得 ｋ ｎ ｏ ｃ ｋ ｄ ｏ ｗ ｎ Ａｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ的 ｒ Ａ ｄ ５ 一 Ａ ｍ 腺病毒及对照腺病 毒， 感染 肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ 细胞。Ｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍｅ Ｐ Ｃ Ｒ显示 ｒ Ａｄ ５ 一 Ａ ｍ 组与 ＮＣ组 相比 Ａｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ的 ｍ ＲＮ Ａ 水平分别下调 ６ ５ ． ３ ％和 ７ ７ ． １ ％， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂ ｌ ｏ ｔ 结果显示 ｒ Ａ ｄ ５ 一 Ａ ｍ组 与 Ｎ Ｃ组相 比 Ａｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ的蛋 白表达水平分别下调 ７ ８ ． ４ ％和 ８ ９ ． ２ ％。 ｒ Ａ ｄ ５ ． Ａ ｍ能显著降低 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞 中 Ａｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ基 因的表达。细胞增殖与凋亡实验表明 ， Ａｋ ｔ ／ ｍ Ｔ Ｏ Ｒ基 因沉默后能显著抑制 肾癌细胞 ７ ８ ６ － Ｏ的增殖 ，并促 进其凋亡 （ ｒ Ａ ｄ ５ 一 Ａ ｍ组细胞凋亡率是 Ｎ Ｃ组 的 ２ ． ５ ７ 倍） 。进一步的实验结果表 明，Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ下调后能降低 Ｐ Ｃ ＮＡ的蛋 白量 ，从而抑制 。 肾癌细胞的增殖 。ｒ Ａｄ ５ 一 Ａｍ感染的。 肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞的增殖和 Ｐ Ｃ ＮＡ 蛋白量受到抑制 ，而凋亡率增加。结论 构建出能稳定干扰 Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ ＯＲ基因表达 的。 肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞株 。Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ腺 病毒 干扰载体可有效沉默 肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞的内源性 Ａｋ ｔ ／ ｍ Ｔ Ｏ Ｒ基因 ，抑制肾癌 ７ ８ ６ 一 Ｏ细胞 的增殖 ，下调 Ｐ Ｃ ＮＡ的表 达，并促进细胞 凋亡 。 【 关键词】 腺病毒 ；Ａ ｋ ｔ ／ ｍＴ Ｏ Ｒ；肾细胞癌 ；肾癌 ７ ８ ６ － Ｏ细胞 ；Ｐ Ｃ ＮＡ ［ 中图分类号】Ｒ ７ ３ ７ ． １ １［ 文献标识码】Ａ ［ 文章编号】１ ０ ０ ８ — ８ ２ ９ ６（ ２ ０ １ ３ ）一 ０ ３ — １ ４ ９ — ０ ５