方药实验设计复习题纲2012

《方药实验设计-药理篇》复习思考题

2012-12-09

1．实验药理学研究内容是什么？药理学实验常用方法有哪些？

答：研究内容：实验药理学解决药理学问题的实验技术，阐明药理学原理的实验方法和药理学实验中的共性问题。特点：①药理学与生命科学的各个学科在共同发展的实践过程中，实现了相互促进、共同发展的现代科学研究新模式；②药理学实验研究是应用其他各个学科的技术和方法，来解决药理学问题。常用方法：①物理学方法；②化学方法；③数学方法；④实验动物学方法；⑤细胞生物学和分子生物学方法；⑥基础医学和临床医学方法。

2．药理学实验设计首先要的四个基本原则是什么？随机方法、对照类型有哪些？如何理解其含义。

答：随机原则；重复原则；对照原则。随机的方法：①原始抽签法；②投硬币法；③随机数字表法；④随机数字法。将随机原则应用于药理学实验设计和实验过程中，以求最大限度地降低各种客观因素产生的影响。对照类型有：①自身对照；②组间对照（空白对照、实验对照、阳性对照）。设立对照是为了准确表现出特定因素产生的作用，排除各种无关因素可能产生的影响。设立对照应符合齐同可比的原则。

3．重复具有哪两方面含义，实验例数（重复数）如何确定？其中经验估计法

和计算法如何进行。实验中的偶然结果出现和处理，在实验中要求一定的重复数的意义。

答：重复是保证实验结果可靠的重要措施之一。重复具有两方面含义：①重现性；②重复数。确定实验的重复数首要考虑的是获得可靠的结论，其次是使用最少例数，即最大效果和最小成本。确定药理实验的重复数（例数）主要有两种方法：①经验估计法：即在已有资料和经验的基础上，根据实验的类型和特点，估计实验所需要的重复数，在应用估计法确定实验的重复数时，需要留有一定的余地，以保证实验的成功。②计算法：a.经验估计法选取的样本例数；b.计算法（包括用于计数资料的公式和用于计量资料的公式）。意义：①消除个体差异和实验误差，提高实验结果的可靠性；②对实验结果的重现性验证。在实验中设置一定的重复数，是药理学实验的基本要求。实验中的偶然结果出现和处理：1）由于某些非常规因素引起的假象，是错误的结果，这种结果必然不可能重现；处理：要及时排除，减少假象的干扰。2）由于尚未认识的影响因素导致的客观表现，但是由于对影响因素缺乏足够的认识，暂时不能获得重复的结果。处理：如果获得结果确实具有重要价值，而且符合逻辑，则应该认真研究影响因素，以求实现结果的重现。

4．实验方案的设计的内容有哪些，其中分组实验设计有哪些方法。

答：内容：确定实验方法、项目和指标；确定实验对象的数量；资料整理和统计。分组实验设计方法：单纯平行对照、平行分批对照、平行分层对照、交叉对照

5．试述药理研究中最适剂量的探索、多剂量实验中剂量间距、剂量的换算。

答：最佳剂量的探索一般有两种途径：①由动物实验中该药与已知药物的效价比值来推算；②由剂量折算系数法计算出最大耐受量的等效剂量。试用剂量首先考虑安全，其次才考虑是否有效。随着剂量的递增，每次增加的比例要逐步减少到30％～35％ 。剂量间距:多剂量实验中各组剂量应取“等比数列”。分组组数视实验性质而定。①整体动物药效实验：按新药申报资料规定应分3组，通常取1：3：9或1：2：4：8。间距太小，易出现相邻组药效倒置现象。间距太大，药效易处于S形曲线平坦处，不利于对比分析。②离体器官药效实验：通常按1：10比例安排剂量，即1：10：100：1000„„。如要在其间再插中间剂量，可用相邻剂量的比例中项（M，M＝（A*B）1/2），取3.16或其近似值3，即1：3：10：30：100。③计算LD50或ED50的实验：要求0％及100%之间有3～6个剂量组；质反应的计数资料一般取1：0.6～1：0.85的组间比值；量反应的测量资料则根据数据性质取1：0.1～1：0.5的组间比值。剂量的换算：（1）同种动物的剂量换算：一般动物的用药剂量均以mg/kg值来表达。根据体重和动物体型近似地推算体表面积（A=R*W2/3），式中A是动物体表面积（m2），W是体重（kg），R是动物的体型系数。同种动物之间折算，可取以下比例式：D1：D2=A1：A2= W12/3：W22/3。（2）不同动物间的剂量换算：标准动物的等效剂量折算系数法（Bios氏原法）

6．如何提高药理实验的稳定性？

答：①从实践和理论上认识待试药物对所用实验动物的生物反应差异性的规律：考虑实验的专属性，即反应指标在多大程度上体现药物的作用强度。研究剂量与效应的关系，选择那些剂量与效应的直线关系范围宽，剂量增减一定程度后效应增减幅度较明显，相同剂量各次反应之间差异较小的实验方法、模型或指标；②调整样本数：生物差异大的实验，用较多的动物，可以提高实验的准确性；生物差异小的实验，用较少的动物，以节省人力物力。③加强实验条件的控制：如限制动物年龄、体重、性别和窝别等，使动物条件基本一致；在实验安排上采用能使条件因素的影响在统计分析时分离开来的实验设计方法，以减少实验误差。④实验方法的反应类型：量反应或直接测定最小数量的方法，使每一动物都能在计算结果时提供的每一信息得到采用。用反应百分率的质反应，一组动物才能产生一个信息数据，为提高精密度，质反应所用动物要比量反应多得多。⑤统计方法的应用：利用统计方法对影响实验精确度的异常值可以删去；用可靠的显著性检验方法，对每一实验规定一定概率下的可信限，通过误差运算，以舍去那些可能由于不正常的操作或某些难以预测的因素的影响；可以用重复实验和合并计算等手段的正确运用来提高实验结果的正确性。

7．何谓一般药理研究，其研究目的和主要观察指标有哪些。

答：一般药理研究是指新药主要药效作用以外的广泛药理作用的研究。研究目的：①对药物的全面作用有一个基本认识；②有助于对新药药理机制的了解；③利于新的药理作用的发现；④为长期毒性试验的实验设计是重要参考。观察指标：①中枢神经系统；②心血管系统；③呼吸系统；④其他指标。

8．试述药理学实验中选择实验动物的基本原则。

答：①选用与人的机能，代谢，机构和疾病特点相似的动物；②选用解剖、生理特点符合实验目的的实验动物、充分利用不同品种品系实验动物存在的某些特殊反应；③根据课题研究目的内容选用相匹配的标准化动物；④选用与实验要求相适应的实验动物规格；⑤选用人兽共患疾病的实验动物和传统应用的实验动物；⑥实验动物的选择和应用需注意符合相应的国际规范。

9．试述镇痛药理研究研究方法有哪些？小鼠扭体法的原理，扭体诱导剂及本方法的评介。

答：研究方法：小鼠扭体试验；家兔K 离子皮下透入致痛实验；小鼠光辐射热甩尾法；冷板诱发的痛觉超敏；丙酮诱发的痛觉超敏；冷诱发的甩尾反射；电刺激小鼠甩尾法；角叉菜胶诱发大鼠炎痛模型；福尔马林试验辣椒素诱导疼痛动物模型；坐骨神经挤压模型实验；急性内脏痛模型。

原理：把一定容量和浓度的化学刺激物质(醋酸溶液等)或盐水注入小鼠腹腔内, 由于刺激脏层和壁层腹膜,引起深的、大面积而持久的疼痛刺激，引起深部广泛的腹膜炎造成腹壁肌肉紧张、炎性疼痛, 致使小鼠出现典型的腹部肌肉收缩，同时伴有一侧后肢外伸的躯体伸缩行为。扭体诱导剂：醋酸溶液，酒石酸锑钾溶液，苯醌水溶液(饱和溶液) ，缓激肽溶液，2-苯-1,4-苯甲酰苯醌(含有5 %酒精水溶液) ，0.02%苯醌混悬于1%羧甲基纤维素溶液等。方法评价：1.小鼠扭体法是筛选镇痛药的常用方法之一,尢其是弱镇痛药的一种常规筛选试验方法。适合于中枢和外周镇痛药的筛选研究, 尤其用于外周镇痛药的评价。其试验的作用强度和临床镇痛效果具有明显的相关性。2.观察记录药物抑制小鼠扭体鼠数或扭体次数, 以出现扭体鼠为阳性, 不出现扭体鼠为阴性, 计算其ED50, 评价药效作用强度。所反应药效作用前者强,后者弱。3.己被许多学者所采用的一种操作简单、敏感、方便、重复性好、经济实惠的实验方法。 4.扭体反应代表内脏痛(紧张性病理性疼痛), 亦是应用最为广泛的内脏痛模型之一。无刺激特异性。方法缺乏特异性, 一些非镇痛药,如中枢抑制剂、阿托品、利多卡因等有抑制扭体反应,出现假阳性(应结合其他测痛方法), 约有8％的动物不出现扭体反应，而且不能在同一个动物上观察药物的时效作用。

10．如何设计活血化瘀类、清热类方药药理研究指标？试按方剂功能主治设计以下方药药理研究指标：补阳还五汤、血府逐瘀汤。

答：根据活血化瘀方药的功能主治可以得出研指标的选取范围：活血化瘀复方与血小板功能、与血管平滑肌细胞（VSMC）、与内皮细胞、与血管的生成、与离子通道、与抗纤维化。从这些方面设计建立考察指标。

如何设计清热方药药理研究指标？

答：1）抗病原微生物:主要是抗病毒和抗菌两个方面，主要有直接抗和间接抗两大渠道。

2）抗毒素：直接抗毒素，通过降解内毒素和拮抗外毒素两个渠道进行。间接降低细菌毒力：通过抗透明质酸酶功能和抑制凝固酶形成。

3）抗炎：清热药不论是单方还是复方，都有不同程度的抗炎作用。如大青叶、板蓝根等。

4）抗肿瘤：清热、解毒、攻毒、化毒是中草药抗肿瘤的药理基础。研究进展至今，中草药对肿瘤和恶性肿瘤的治疗是肯定的，大量的体外试验和临床实用业已证明了这个成效。

5）解热：

6）对免疫功能的影响：不少清热药用药后，对机体有明显的免疫功能提高的作用。当前中草药免疫有两大功能，一是非特异性；二是特异性。

7）消除自由基：自由基过多，则严重损害了组织细胞，而导致组织器官异常变。所以自由基是机体内的有“毒”物质，中医观点认为是内“毒”，清热药既清外毒，也清内毒。

补阳还五汤可治疗AS，抑制病变内膜增厚，管腔狭窄明显改善。其机制除降血脂，减轻高血脂对内皮细胞的氧化损伤外，也与其促进内皮细胞合成与分泌。磷酸葡萄糖异构酶2和一氧化氮（NO）等生物活性物质，进而促进中层VSMC调亡。血府逐淤汤可降低血小板聚集率、粘附率，并可改善微循环。抑制血管平滑肌细胞（VSMC）由收缩型向合成型转变而抑制血管平滑肌细胞（VSMC）和内膜增生。

11．何为长期毒性研究（重复给药毒性研究）, 长期毒性研究的主要目的; 在进行长期毒性研究时，应遵循什么原则。长期毒性研究内容是什么?

答：长期毒性研究（重复给药毒性研究）是反复多次给药的毒性试验的总称，描述动物重复给予受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要内容。主要目的：①发现受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、量效和时效关系、可逆性等；②推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织；③预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全范围；④提示临床试验中需重点监测的安全性指标；⑤对毒性作用强、毒性症状发生迅速、安全范围小的受试物，长期毒性研究还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。原则：①长性毒性研究应遵循“具体问题具体分析”的原则；②长期毒性研究的试验设计应符合随机、对照、重复的原则。内容：①试验管理；②受试物；③试验动物；④给药途径；⑤给药频率；⑥给药期限；⑦给药剂量；⑧观察指标。

12. 药品临床前毒理学研究局限性的原因?

答： 1）实验动物缺乏人所具有的对药物毒性作用的主觉反应；2） 毒理试验动物数量有限，发生率低的毒性反应，难以经小样本实验得以发现；3）所用动物均系实验室培养品系，且多为健康动物，对药物的反应性多较单一。4）人体的疾病因素，可能影响人体对药物的反应性，以致产生在临床前毒性试验中难以观察到的毒性现象。5）人与实验动物在药物代谢动力学方面的差异，亦会造成人与实验动物对药物毒性反应的差异。