改良的Cajal金升汞染色法显示纤维性星形胶质细胞

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第１９卷第３期　２０１０年Ｏ６月　中国组织化学与细胞化学杂　士　Ｊ【　、　ＣＨＩＮＥＳＥ　Ｊ０ＵＲＮＡＬ　０Ｆ　ＨＩＳＴｏＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　ＡＮＤ　ＣＹＴ０ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　Ｖｏ１．１９．ＮＯ．３　Ｊｕｎｅ．２０１０　

改良的Ｃａｊ　ａｌ金升汞染色法显示纤维性星形胶质细胞　

杨壮来　

（江汉大学卫生技术学院解剖学系组织胚胎学教研室，湖北武汉４３００１６）　

（摘要］　目的探索一种快捷、简便、稳定的染色方法显示脑组织内纤维性星形胶质细胞。方法取猫、家兔、大　鼠和豚鼠的大脑组织，部分组织采用传统的Ｃａｊａｌ金升汞法制片。部分组织采用改良Ｃａｊａｌ金升汞法制片。结果　与传统　Ｃａｊａｌ金升汞法比，应用改良Ｃａｊａｌ金升汞染色法，缩短了制片时间，纤维性星形胶质细胞染色均匀，结构清晰，胶质细胞　纤维显现明显，分枝光滑，较长突起末端膨大的脚板终止于血管壁上。结论应用改良后的Ｃａｊａｌ金升汞法染色显示纤维　性星形胶质细胞效果明显优于传统Ｃａｊａｌ金升汞法。　［关键词）　纤维性星形胶质细胞；　Ｃａｊａｌ金升汞法；　猫；　大鼠；　豚鼠　（中图分类号］　Ｒ３２９　（文献标识码］　Ａ　Ｄ０Ｉ：１０．３８７０／ｚｇｚｚｈｘ．２０１０．０３．０１４　

ＩＭＰＲｏＶＥＤ　ＣＡＪＡＬ　Ｓ１．ＡＩＮ　ＭＥＴＨｏＤ　１、Ｏ　ＶＩＳＵＡＬＩＺＥ　ＦＩＢＲｏＵＳ　ＡＳ１　ＲｏＣＹ１　Ｅ　Ｙａｎｇ　Ｚｈｕａｎｇｌａｉ　（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉａｎｇｈａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ　４３００１６，Ｃｈｉｎａ）　（Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ａ　ｆａｓｔ，ｅａｓｙ，ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｆｉｂｒｏｕｓ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｗｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｃａｔｓ，ｒａｂｂｉｔｓ，ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｇｕｉｎｅａ　ｐｉｇｓ．Ｗｅ　ｍａｄｅ　ｓｅｃ—　ｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｏｌｄ　Ｃａｊａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｂｙ　ａｐｐｌｙｉｎｇ　Ｃａｊａｌ　ｆｉｘａｔｉｖｅ　ｔｏ　ｆｉｘ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｆｉｒｓｔ，　ｔｈｅｎ　ｍｅｋｉｎｇ　ｔｈｅｎ　ｆｒｏｚｅｎ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ　ｆｉｎａｌｌｙ　ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｗｅ　ａｌｓｏ　ｍａｄｅ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｃｃｏｒｄ—　ｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｃａｊａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｂｙ　ｆｉｘｉｎｇ，ｆｒｏｚｅｎ　ｓｅｃｔｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｃａｊａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｒｅ—　ｑｕｉｒｅｄ　ｌｅｓｓ　ｔｉｍｅ　ｔｏ　ｍａｋｅ　ｔｈｅ　ｓｅｃｔｉｏｎｓ．Ｉｔ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｉｎ　ｗｅｌｌ—ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｏｆ　ｆｉｂｒｏｕｓ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ，ｃｌｅａｒ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｏｂｖｉｏｕｓ　ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ｏｆ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ，ｓｍｏｏｔｈ　ｂｒａｎｃｈｅｓ，ａｎｄ　ｌｏｎｇ　ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｉｌａｔｅｄ　ｅｎｄ　ｆｅｅｔ　ｔｈａｔ　ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｗａｌｌ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　ｖｅｓｓｅｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｃａｊａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉＳ　ｍｕｃｈ　ｓｕｐｅｒｉｏｒ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｏｌｄ　Ｃａｊａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｖｉｓｕａｌｉｚｉｎｇ　ｆｉｂｒｏｕｓ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ３　Ｆｉｂｒｏｕｓ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅ；　Ｃａｊ　ａｌ　ｍｅｔｈｏｄ；　Ｃａｔ；　Ｒａｔ；　Ｇｕｉｎｅａ　ｐｉｇ　

显示神经胶质细胞传统制作方法是用Ｃａｊａｌ金　升汞染色法［】］，在显示神经细胞和神经胶质细胞胞　

体和突起的整体结构方面，此法优于其它任何借助　

金属浸染技术和方法，但传统的Ｃａｊａｌ金升汞法的　制片存在费时长，结果不稳定，重复性差并且一旦　

过染则背景很深，从而影响结果的观察和分析。为　了探索一种稳定、有效的神经组织纤维性星形胶质　

细胞染色方法，我们针对传统的Ｃａｊａｌ金升汞法进　行了改良，即从切片、固定、浸染、制作方法等方　

面进行了探索，经过反复实践，我们发现改良法简　化了操作步骤，缩短了制片时间，全部过程一个月　

内可完成，而且染色均匀，背景清晰，无沉淀产　生，结果稳定，染色效果明显优于传统的Ｃａｊａｌ金　

升汞法。　

［收稿日期］２００９—１２—１０　［修回日期］２０１０—０４～０１　［作者简介］杨壮来，男（１９５３年），汉族，副教授。　＊通讯作者（Ｔｏ　ｗｈｏｍ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｄｄｒｅｓｓｅｄ）　材料和方法　

１．取材　

将幼年猫、家兔、大鼠用乙醚麻醉后，取大脑　

中央脑回，用双面刀片切成厚３－５ｒａｍ的组织块，　分成两组进入固定液。　

２．固定　将组织块分成两组固定Ⅲ，一组进入传统Ｃａ—　

ｊａｌ固定液，在２５℃左右的环境中固定２—１５天，传　

统Ｃａｊａｌ固定液的配制每份含　：甲醛１５ｍｌ、蒸馏　

水８５ｍｉ，溴化铵２ｇ。另一组进入改良Ｃａｊａｌ固定　

液，在２５℃的环境中固定１５天，改良Ｃａｊａｌ固定　

液每份含：中性甲醛（用碳酸钙中和使ｐＨ保持为　

７）１５ｍｌ、蒸馏水８５ｍｉ、溴化铵４ｇ。　

３．制片　

传统法：（ｉ）固定后的组织块蒸馏水漂洗；（２）冰　

冻切片机切片，厚１０－１２／￣ｍ；（３）

继续进入重新配制　第３期　杨壮来等．改良的Ｃａｊａｌ金升汞染色法显示纤维性星形胶质细胞　２８１　

的Ｃａｊａｌ固定液中再次浸泡１－２ｈ，经蒸馏水速洗　后；（４）入传统Ｃａｊａｌ金升汞染液，在３７℃恒温下浸　

染３—８ｈ。传统Ｃａｊａｌ金升汞染液配制每份中含：升　汞（氯化汞）０．５ｇ、蒸馏水５０ｍｌ、１　氯化金水溶　液ｌＯｍｌ。配法是先将升汞溶入蒸馏水中加温溶解，　

待稍冷后再加进氯化汞充分混合后备用。（５）经５　硫化硫酸钠溶液浸泡３－５ｒａｉｎ，自来水洗涤数次，　

再经蒸馏水洗，（６）在０．５　明胶水溶液中用玻璃　钩捞于载玻片上，凉干，二甲苯透明中性树胶封　片　。　改良法：（１）固定后的组织块经蒸馏水漂洗两　

次；（２）冰冻切片机切片，厚２０—２５／ｚｍ；（３）继续进入　改良Ｃａｊａｌ固定液再次浸泡１－２ｈ，经蒸馏水漂洗；　

（４）进入改良Ｃａｊａｌ金升汞染液，在３７℃恒温下浸染　３ｈ，肉眼观察切片成浅紫红色为宜，改良Ｃａｊａｌ金　

升汞染液配制每份中含：升汞（氯化汞）０．５ｇ、蒸　馏水５０ｍｌ、１　氯化金水溶液２０ｍｌ。配法是先将　

升汞溶人蒸馏水中加温溶解，待稍冷后再加进氯化　汞充分混合后备用；（５）经２．５　硫化硫酸钠醇溶液　（用３０　ｏ／６浓度酒精配制）定影３－５ｒａｉｎ，自来水多次　

冲洗，再经蒸馏水洗；（６）在０．５　明胶水溶液中　

用玻璃钩捞于载玻片上，晾干，二甲苯透明中性树　胶封片。　

结　果　

两种方法染色的猫大脑切片中，均染成浅紫红　色，纤维性星形胶质细胞多见于白质中，在传统的　

Ｃａｊａｌ金升汞染色的切片上，纤维性星形胶质细胞　胞体和突起不清晰，尤其是长突起不完整，胞体与　

突起轮廓较模糊，且背景较深，含有较多非特异性　沉淀颗粒（图１），用改良Ｃａｊａｌ金升汞法染色，切　

片上纤维性星形胶质细胞轮廓清晰，胞体和突起完　整，小突起的细节显示更为理想，分枝光滑，其中　

有较长突起末端膨大的脚板终止于小血管壁上，而　且背景较浅，非特异性沉淀颗粒极少（图２、３）。　在家兔、大鼠、豚鼠的大脑的切片上，两种方法对　

神经元的染色效果具有上述相同的差异。　

讨　论　

在神经组织学实践教学中，需要制作大量的组　

织学教学切片，在临床神经系统疾病的研究中，也　经常需要应用简便、稳定的组织学切片、染色方法　

显示神经胶质细胞的形态及病理变化，如震颤性麻　痹（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ病）、舞蹈病，精神病及严重影响老　年人健康的老年痴呆（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ　ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）　等这些疾病的发病与脑组织细胞的病理变化有着极　为重要的关系　］，都有赖于提供高质量切片来进行　

脑神经细胞、神经胶质细胞形态结构方面的研究。　１．传统Ｃａｊａｌ金升汞法显示纤维性显形胶质细　

胞仍为常用方法，但其染色结果不稳定。易出现背　

景着色过深，形成较多的非特性沉淀。传统的Ｃａ—　ｊａｌ金升汞法中组织块在Ｃａｊａｌ固定液中经过长时间　

（１５天以上）固定，其中甲醛易破坏组织内的嗜金　物质，导致胶质细胞胞体浅染结构不清晰，若组织　

块固定时间过短（２－５天）则神经纤维着色不良，　

在传统Ｃａｊａｌ金升汞法的基础上进行改良，将固定　时间定为１５天，将原Ｃａｊａｌ固定液中的溴化铵２克　

改为４克，其目的是增强组织块着色吸附力。　２．将传统方法中切片厚度１Ｏ一１２ｋｔｍ改为２Ｏ一　

２５／２ｍ，将浸人Ｃａｊａｌ金升汞染液的时间；在２５℃　

恒温中６－８小时改为在３７℃恒温中２—３ｈ，切片浸　染成紫红色为止。有效地克服了在制片过程中组织　

脆裂和背景着色过深及非特异性沉淀现象。　３．为使组织切片能牢固粘附在玻片上，不发　

生剥离和脆裂，可采用０．５　明胶水溶液粘片，使　

其自然干片。　４．应用改良Ｃａｊａｌ金升汞法对神经胶质细胞染　

色时其固定液和染色液的配制均需加热，以促进试　

剂完全溶解。升汞的纯度要高，以分析纯为好，配　制时需加热溶解，但在与其它试剂混合前必须完全　

冷却，否则易发生浑浊，产生沉淀，从而使固定液　或染液失效【４］。组织块固定时应置于３７℃环境中　

以提高浸渍效果，从而缩短固定时间。经过Ｃａｊａｌ　

金升汞染液浸染的组织切片，若长时间在乙醇中浸　

泡可导致汞盐沉淀分解，影响切片质量。　由此可见，与传统Ｃａｊａｌ金升汞法比较，改良　

Ｃａｊａｌ金升汞法染色效果稳定，重复性好，切片背　景较浅，纤维性星形胶质细胞胞体明显；突起连　

续、清晰，较长突起与血管壁关系明显，因此更适　

于制作大量的组织教学切片，也更适于神经系统疾　病与神经胶质细胞形态结构变化关系的研究。　

参　考　文　献　

［１］陈佛痴．组织学实验技术．长春：白求恩医科大学出版　

社，１９８０，１０２—１０４　［２］胡登昆，杨森．组织学特殊染色技术实践．西安：陕西　师范大学出版社，１９８９，１９９—２０１　［３］鞠躬．神经生物学．北京：人民卫生出版社，２００４，

小胶质细胞活化指标

胶质细胞是中枢神经系统中的主要细胞类型，包括星形胶质细胞和微胶质细胞。这些细胞在维持神经系统的正常功能方面起着重要的作用。小胶质细胞活化指标是评估胶质细胞活化程度的一种指标，它可以反映神经系统的炎症状态和损伤程度。本文将介绍小胶质细胞活化指标的意义、常见的评估方法以及其在各种疾病中的应用。

小胶质细胞活化指标的意义

小胶质细胞活化指标是评估神经系统炎症和损伤程度的重要指标之一。胶质细胞活化主要指的是星形胶质细胞和微胶质细胞的形态和功能的改变。当神经系统受到损伤或炎症刺激时，胶质细胞会发生活化，其形态会发生变化，细胞体积增大，胶质纤维增多，并释放出一系列的炎症介质和细胞因子。这些活化的胶质细胞能够参与炎症反应、神经保护和修复过程，但过度的活化也会导致神经系统的炎症损伤。

小胶质细胞活化指标的评估方法

常用的评估小胶质细胞活化的方法主要包括免疫组化染色、分子生物学技术和神经影像学等。免疫组化染色是一种常用的方法，通过检测胶质细胞标志物的表达水平来评估胶质细胞的活化程度。常见的标志物包括GFAP（胶质纤维酸性蛋白）和IBA1（离子化钙结合蛋白）。分子生物学技术可以通过检测相关基因的表达水平来评估小胶质细胞活化程度。神经影像学技术，如磁共振成像（MRI）和正电子发射计算机断层扫描（PET），可以通过观察脑部的变化来评估胶质细胞的活化程度。

小胶质细胞活化指标在疾病中的应用

小胶质细胞活化指标在多种神经系统疾病中具有重要的应用价值。例如，阿尔茨海默病是一种与年龄相关的神经退行性疾病，研究发现阿尔茨海默病患者大脑中的胶质细胞活化程度显著增加。小胶质细胞活化指标可以作为阿尔茨海默病的早期诊断标志物，并为早期干预提供依据。此外，小胶质细胞活化指标还在中风、帕金森病、脑损伤和脊髓损伤等疾病中得到广泛应用。

结语

小胶质细胞活化指标是评估神经系统炎症和损伤程度的重要指标之一。通过评估小胶质细胞的形态和功能的改变，可以了解神经系统的炎症状态和损伤程度。目前，免疫组化染色、分子生物学技术和神经影像学等方法被广泛应用于小胶质细胞活化指标的评估。小胶质细胞活化指标在多种神经系统疾病中具有重要的应用价值，可以作为早期诊断和治疗的参考指标。随着研究的深入和技术的进步，小胶质细胞活化指标的应用前景将更加广阔。我们期待未来能够更好地理解小胶质细胞活化的机制，并开发出更准确、可靠的评估方法，为神经系统疾病的诊断和治疗提供更好的指导。

载脂蛋白E对EAE星形胶质细胞的影响

杨程程;韦俊杰;唐玉兰;郑明华;韦云飞

【期刊名称】《中风与神经疾病杂志》

【年(卷),期】2015(32)1

【摘要】目的探索载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠病灶星形胶质细胞的影响.方法采用MOG35-55诱导apoE基因敲除的C57BL/6小鼠(apoE-/-EAE组)及野生型C57BL/6小鼠(普通EAE组),建立EAE模型.取免疫后35 d的EAE小鼠的大脑及脊髓切片,行HE染色,免疫组织化学染色法观察各组小鼠水通道蛋白4(AQP4)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 apoE-/-EAE组和普通EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP的表达量均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P＜

0.05);apoE-/-EAE组大脑和脊髓AQP4、GFAP表达量均高于普通EAE组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 EAE中存在星形胶质细胞水肿、增生,apoE缺乏可以加重这一病变.

【总页数】4页(P33-36)

【作者】杨程程;韦俊杰;唐玉兰;郑明华;韦云飞

【作者单位】广西医科大学第一附属医院神经内科,广西南宁530021;广西壮族自治区人民医院神经内科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院神经内科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院神经内科,广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院神经内科,广西南宁530021

【正文语种】中文【中图分类】R744

【相关文献】

1.载脂蛋白E拟肽对EAE小鼠的髓鞘和轴突损伤的影响 [J], 韦俊杰;郑明华;梁培霄;陶敏;唐玉兰

2.载脂蛋白E缺乏对小鼠星形胶质细胞损伤的影响 [J], 蒙晓珍;韦俊杰;唐玉兰;杨程程;龚靖;孙淑君

神经组织染色方法的研究概况

顾兵1，金建波2，李华南2，王烁宇2

【摘要】摘要:神经组织染色是研究神经退行性疾病所必需的一项关键的实验技术。但是，由于染色步骤的复杂和外界因素的干扰，时常导致染色结果的不稳定。该文就目前国内外建立的神经组织染色方法，包括尼氏染色、神经元染色、神经胶质细胞染色、髓鞘染色、突触染色和神经纤维染色的原理、优缺点及其应用作一概述，以便指导研究者选用合适的染色方法。

【期刊名称】中国药理学通报

【年(卷),期】2011(027)010

【总页数】4

【关键词】关键词:神经组织;染色方法;尼氏染色;铜银染色;FJ染色;髓鞘染色

神经退行性疾病(neurodegenerative diseases)是由大脑或脊髓的神经元或其髓鞘的丧失所致，随着时间的推移而恶化，以导致功能障碍［1］。采用常规染色技术，如HE染色，疾病的某些特殊病理变化难以完全准确的显现，而借助一些特殊染色可对某一特定结构改变进行选择性的浸染。但是，由于后者染色步骤过于复杂，流程相对繁琐，受外界因素的干扰比较大，经常导致染色结果的不稳定，进而难以反映病理改变。目前，系统介绍神经组织染色技术进展的文献甚少，使得神经病理学研究人员，尤其是初学者，难以领会各种染色方法的精髓。根据浸染组织的不同，将神经组织染色分为尼氏染色、神经元染色、神经胶质细胞染色、髓鞘染色、突触染色和神经纤维染色6种。本文就发展成熟的神经组织染色方法原理、优缺点及其病理学应用作一综述，并简述其在神经退行性疾病研究中的应用，旨在指导研究者选用合适的染色方法。

1 尼氏染色(Nissl staining)

尼氏染色方法是德国病理学家Nissl于1892年创立，其主要根据是神经元胞体内含有大量嗜碱性的尼氏小体。当组织与某些碱性染料(甲粉紫、甲苯胺蓝、硫堇、焦油紫等)作用时，细胞中的尼氏体能够选择性与其结合而着色。Lindroos［2］对尼氏染色方法进行了改良，并应用于颅脑组织切片的病理研究。改良后的方法大大缩短了染色时间，且胞内细胞核，尼氏体均能清晰可见。虽然尼氏染色法既可清晰辨别尼氏体以及胞核、核仁［3］，又很容易区分轴突和树突，但该法仅应用于脑，脊髓等尼氏体较为丰富的组织。尼氏体受染后呈块状(形如虎斑)或颗粒状，核周围尼氏体颗粒较大，近边缘处较小而细长。在神经元受损时，尼氏体的数量可减少甚至消失，因此根据形状大小和数量差异，可判别神经损伤程度。Simon等［4］报道促红细胞生成素对猪缺血/再灌注损伤的治疗作用。经尼氏染色、HE染色和TUNEL免疫组化染色证实，脊髓胸段神经元损伤以及凋亡得到缓解。Pinzon等［5］分别采用动物行为学和尼氏染色评价二甲胺四环素对脊髓挫伤大鼠的神经保护作用。施用二甲胺四环素后，大鼠BBB评分和组织病理学均有改善。缺点是组织未干燥完全，易发生严重皱缩。其次，切片之后易使组织破裂，影响观察。