口蹄疫表位疫苗的研究进展
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O型口蹄疫免疫效果抗体监测方法比较
蹄 疫 Ｅ ＩＡ试 验 结 果 样 本 － 关 数 为 ＬＳ 相
６ ，０ ％相 关 ． 度一 致 原 因可 能是 正 ０ １０ 高
向 问 接 血 试 验 结 果 判 定 存 在 人 员 主 观 偏 差 ； 或 是 不 同 的 试 剂 所 含 的抗 原 病 毒 蛋 白 不 同 出 现 所 监 测 抗 体 中 的 一 部 分 是 针
明 书 进 行 ９ 孔 酶 标 板 检 测 按 １份 样 本 ６ ０
２ 年第４）７ ０ （３ 第期 １ ２ 卷
表 １ １ Ｏ号 样 本 抗 体 效 价 范 围 １
布局。 抗体 效价 范 围从 １ １ （ 孔 ） ： ８ ３ 到最 高
１ １ ２ （０ ） 记 录 方 式 为 最 大 稀 释 倍 ： ０ ４ １孔 。 数孔 数
Ｏ型 口蹄 疫 是 世 界上 危 害最 严 重 的畜 禽传 染病 之 一 ， 感 染所 有 的偶 蹄 动 物 ． 养 殖业 构 成 严 重威 胁 ． 对 可造 成 严 重 的经 济损 失和 国 际畜产 品 贸易 的负 面影 响。 业部 将其 农
Ｅ ＩＡ试剂 盒 ， ＬＳ 均为 中 国农 业科 学 院兰 州兽 医研究 所生 产 。 １１ 试验样本 ： ．． ２ 随机从某养殖场采集牛血清６ ｆ 。 Ｏ￣ 被采样 牛 ｆ 于采样前８ｄ 分别免疫Ｏ 亚Ｉ 口蹄疫联价疫苗两次。 Ａ２ｄ 型一 型
’ 文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （０ ２ ０ － ０ ４ ０ １ ０ － ０ ０ ２ １ ）７ ０ ０ — ２ 型 口蹄 疫 液 相 阻 断 Ｅ Ｓ 试 剂 盒 、亚 Ｉ 口蹄 疫 液 相 阻 断 ＬＡ 型
关 键 词 ： 型 口蹄 疫 ； 测 方 法 ； 向 间接 血 凝 ； 相 阻 断 Ｅ ＩＡ ｏ 监 正 液 ＬＳ 文 献 标 识 码 ： Ｂ
６ ，０ ％相 关 ． 度一 致 原 因可 能是 正 ０ １０ 高
向 问 接 血 试 验 结 果 判 定 存 在 人 员 主 观 偏 差 ； 或 是 不 同 的 试 剂 所 含 的抗 原 病 毒 蛋 白 不 同 出 现 所 监 测 抗 体 中 的 一 部 分 是 针
明 书 进 行 ９ 孔 酶 标 板 检 测 按 １份 样 本 ６ ０
２ 年第４）７ ０ （３ 第期 １ ２ 卷
表 １ １ Ｏ号 样 本 抗 体 效 价 范 围 １
布局。 抗体 效价 范 围从 １ １ （ 孔 ） ： ８ ３ 到最 高
１ １ ２ （０ ） 记 录 方 式 为 最 大 稀 释 倍 ： ０ ４ １孔 。 数孔 数
Ｏ型 口蹄 疫 是 世 界上 危 害最 严 重 的畜 禽传 染病 之 一 ， 感 染所 有 的偶 蹄 动 物 ． 养 殖业 构 成 严 重威 胁 ． 对 可造 成 严 重 的经 济损 失和 国 际畜产 品 贸易 的负 面影 响。 业部 将其 农
Ｅ ＩＡ试剂 盒 ， ＬＳ 均为 中 国农 业科 学 院兰 州兽 医研究 所生 产 。 １１ 试验样本 ： ．． ２ 随机从某养殖场采集牛血清６ ｆ 。 Ｏ￣ 被采样 牛 ｆ 于采样前８ｄ 分别免疫Ｏ 亚Ｉ 口蹄疫联价疫苗两次。 Ａ２ｄ 型一 型
’ 文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （０ ２ ０ － ０ ４ ０ １ ０ － ０ ０ ２ １ ）７ ０ ０ — ２ 型 口蹄 疫 液 相 阻 断 Ｅ Ｓ 试 剂 盒 、亚 Ｉ 口蹄 疫 液 相 阻 断 ＬＡ 型
关 键 词 ： 型 口蹄 疫 ； 测 方 法 ； 向 间接 血 凝 ； 相 阻 断 Ｅ ＩＡ ｏ 监 正 液 ＬＳ 文 献 标 识 码 ： Ｂ
牛口蹄疫的诊断和防控策略
牛口蹄疫的诊断和防控策略李富忠/山东省德州市陵城区农业农村局 253500摘 要：近年来，随着牛价的节节攀升，极大的促进了牛养殖业的发展。
但由于受到诸多因素的影响，牛口蹄疫呈现出高发的趋势，严重阻碍牛养殖业的稳定发展，因此养殖场户要引起足够的重视。
基于此，本文着重对牛口蹄疫的诊断及防控对策进行了探讨分析。
关键词：牛养殖；口蹄疫；诊断；综合防控口蹄疫是牛养殖常见病，该病属于急性传染性疾病，其病原为口蹄疫病毒，该病危害性极大，传染性极强，患病牛口腔粘膜、蹄部以及乳房等并部位皮肤会出现明显的水疱及溃烂现象，养殖场户要密切留意。
1 牛口蹄疫的诊断技术分析1.1 流行病学诊断要点 在诊断牛口蹄疫的过程当中，结合该病的流行特点及病牛的临床发病症状即可做出初步的诊断。
在流行病学中，结合往年牛口蹄疫病例及牛的身体特征即可做出判断。
病理检查可以发现病牛皮肤细胞肿大现象明显，严重病牛会出现心肌细胞坏死及变性等现象。
1.2 临床症状诊断要点 患有口蹄疫的病牛，其乳房、蹄部以及口腔粘膜等部位的皮肤会出现一些水疱，似花生米般大小，随着病情的不断发展，水疱会逐渐溃破。
观察病牛的咽喉部位及支气管，也会发现有水疱，溃烂后形成结痂。
胃部呈现出血性病变。
针对一些患病的犊牛，其心包膜存在出血现象，心肌切面有大量的斑点，有的呈白色，有的呈淡黄色，似老虎花纹一般。
1.3 实验室的诊断要点 采集病牛的口腔粘膜、蹄部或者乳房部位溃烂组织或者溃烂后流出的液体进行试验检测，能够进行确诊。
在试验检测的过程当中，需要将50％甘油生理盐水溶液滴入所采集的病料中，然后使用显微镜对细胞变化进行观察，如发现存在变色现象，即可确诊为病牛患有口蹄疫。
或者可以将50％甘油生理盐水溶液和所采集的病牛的病变部位液体进行融合，通过补体结合的方式检查，即可做出准确的诊断。
2 牛口蹄疫的综合防控对策探讨2.1 制定卫生防疫制度 牛口蹄疫的危害性极大，因此养殖场户积极做好综合防控工作具有重要的现实意义。
口蹄疫的诊断及防治方法
口蹄疫的诊断及防治方法前言口蹄疫病毒(foot and mouth disease，FMDV)作为人畜共患的急性接触性传染病，在世界许多国家和地区广泛流行。
在国际贸易日趋繁荣、物资交流和旅游活动日益便捷的情况下，很多国家都有可能再度遭到口蹄疫的侵袭。
口蹄疫严重危害畜牧业的发展，给牧区造成严重的经济损失，也可使对外贸易和旅游业遭受惨重损失。
全世界每年由此造成的经济损失可达数百亿美元，口蹄疫的暴发已经影响到国际关系、国家名誉和经济发展，在某些流行过程中病毒还可发生变异，也给防控和消灭口蹄疫带来困难。
【摘要】由口蹄疫病毒引起的偶蹄兽的一种急性热性高度接触性传染病。
本病传染性极强，发病率几乎达100%，往往造成广泛流行，引起巨大的经济损失和社会影响。
了解其病毒的本质和流行规律、病源及传播方式、临床诊断的表现及防治措施等对该病的控制有现实意义。
本文对其国内外的研究做一综述，为口蹄疫的防治工作提供基础依据。
【关键词】口蹄疫流行诊断防治【正文】1.口蹄疫(FMDV)的简介口蹄疫病毒(FMDV)属微RNA病毒科口蹄疫病毒属成员，有个血清型和65个以上的亚型。
是引起多种动物发生口蹄疫的病原。
1.1病毒特性病毒颗粒呈球形，二十面体对称，无囊膜，核酸类型为单股正链RNA，核酸分子量2.4～2.8-l×106d，长2.62um，呈细丝状，有感染性，并能起而RNA作用。
病毒在胞浆内增殖。
FMDV具有四种主要多肽，即VP1、VP2、VP3、VP4。
FMDV在血清学上分为7个型，即A、O、C、SAT，(南非1型)、SAT2(南非2型)、SAT3(南非3型)和AsiaⅠ(亚洲1型)，每一型又有许多亚型。
目前7个型至少可分为65个亚型，其中A型有32个，O型有11个，C型有5个，SAT1有7个，SAT2有3个，SAT3有4个，Asia I有3个。
各型间无交叉免疫原性，在同型内的亚型间有部分交叉免疫原性。
病毒型和亚型的鉴定主要根据抗原差异，不同型之间完全没有抗原关系，可用各型标准血清来鉴定病毒型。
猪五号病研究进展
文章 编 号 ：０ ８ ０ １（０ ８ ３ ０ ２ — ３ １０ － ４ ４２０ ） — ０ ６ ０ ０
五 号 病 即猪 １蹄 疫 ， 病 是 由 １ ２ １ 该 ２ １
蹄 疫 病 毒 所 引 起 的 一 种 急 性 发 热 和
寒 冷 时 多 发 ， 夏 季 往 往 自然 平 息 。 等 偶 到 猪
传 染性 极 强 ， 传播 迅速 ， 染 和 发 病 率很 高 ． 引起 仔 猪 大量 死 亡 。 由 于 治 疗所 引 感 可
落 ， 猪 卧 地 不 能 站 立 。 泡 充 满 清 朗 病 水 或 微 浊 的浆 液 性 液 体 ， 泡 很 快 破 溃 ． 水
露 出 边 缘 整 齐 的 暗红 色 糜 烂 面 ．如 无
豆 粒 大 水 泡 内的 病 毒 量 足 以致 使 １万 头 猪 疫 苗 来预 防 ０
发 病 。 外 ， 猪 的 尿 、 、 、 出 的气 、 另 病 粪 乳 呼 唾 五 号 病 病 毒 属 微 Ｒ Ａ病 毒 科 ， Ｎ 五 清 型 。 据 权 威 部 门病 毒分 离 检 测 ， 根 危
液、 、 、 肉 毛 内脏 、 液 等 以及 污 染 的猪 舍 、 号 病 病 毒 属 ， 态 呈 球 状 ． 有 ７ 血 精 形 共 个
患 的急 性 、 性 、 触 性 传 染 病 。 自然 直 接 性 和 间 接 性 传 播 ； 类 、 热 接 鸟 鼠类 、 虫 等 应 用 最 广 的为 五 号 病灭 活 苗 。 昆 发 病 的 动 物 常 限 于偶 蹄 兽 ， 如 黄 牛 、 野 生 动 物 也 能机 械性 地 传 播 本 病 。据 报 道 ５１１ 疫 苗 免疫 ：１ 种 猪 ： 猪 ２ 免 ．． （） 仔 次 水牛 、 牛 、 、 牦 猪 绵羊 、 羊 、 驼 等 ， 山 骆
猪口蹄疫临床症状及综合防治
接种疫苗是目前控制猪口蹄疫最有效的方法遥对健康猪 群，每年免疫接种2~3次。对疫情地区可进行紧急免疫接种， 增加接种量。接种一定时间后进行抗体水平检测，若低于70% 需进行二次接种。 7.3加强消毒与隔离
日常饲养管理过程中需定期对注射器内外进行严格的杀菌 消毒。养殖人员在进入猪舍前需进行杀菌消毒。养殖场进岀车 辆及人员应及时且严格的开展消毒工作。一旦发现病猪或疑似 病猪需立即进行隔离治疗。 7.4猪口蹄疫的治疗
第一，猪口蹄疫病主要感染猪、牛、羊、骆驼、野猪、大 象、羚羊等偶蹄动物，对单体动物感染性低。第二，病猪及潜 伏期感染猪是最主要的传染源，发病初期传染性最高。患病猪 的血液、粪便、尿液、乳汁、唾液、水疱液等均携带病毒，即 使治愈后的病猪仍可长时间携带病毒， 因此， 该病常具有复发 特点。健康猪群通过接触被污染的饲料、饮水、石槽、水槽等 均可感染该病毒。另外，不同种动物间也可进行相互感染。第 三， 猪口蹄疫在发病初期传染性最强， 主要通过呼吸道、 消化 道、黏膜、粪便、尿液、唾液、乳汁等直接或间接传播叫 4.2流行特点
口蹄疫病毒具有较强的抵抗力，在5益环境下可存活较长 时间。超低温环境下甚至可以保存几年。另外，该病毒对高温 和紫外线敏感。35益以上的高温可杀死该病毒，且环境温度越 高，病毒存活时间越短。因此，该病在夏季炎热气候下发病率 低。其次，该病毒对酸碱非常敏感。猪肉产品进行酸、碱处理
可有效杀死病毒。因此，养殖场内多用氢氧化钠、氢氧化钾、 碳酸钙或甲醛溶液作为消毒剂进行杀菌消毒。 2发病机理
日常饲养过程中可在饲料中加入阿莫西林、激生肽、葡萄 糖粉等进行疾病预防。对于感染的病猪可采用本草进行肌肉注 射，每日一次，连续注射3d遥若病情严重还可注射口蹄痘毒脑 心康，连续注射3d遥 8结语
综上所述，猪口蹄疫并具有强传染性，可严重影响生猪健 康及生长，对我国养猪业造成巨大的经济损失。因此，广大养 殖人员需增强日常饲养工作，加强防疫意识。一旦发现疫情， 及时上报有关部门，并做到“早发现，早隔离，早治疗”，减 少经济损失，促进我国生猪养殖的健康可持续发展。
日常饲养管理过程中需定期对注射器内外进行严格的杀菌 消毒。养殖人员在进入猪舍前需进行杀菌消毒。养殖场进岀车 辆及人员应及时且严格的开展消毒工作。一旦发现病猪或疑似 病猪需立即进行隔离治疗。 7.4猪口蹄疫的治疗
第一，猪口蹄疫病主要感染猪、牛、羊、骆驼、野猪、大 象、羚羊等偶蹄动物，对单体动物感染性低。第二，病猪及潜 伏期感染猪是最主要的传染源，发病初期传染性最高。患病猪 的血液、粪便、尿液、乳汁、唾液、水疱液等均携带病毒，即 使治愈后的病猪仍可长时间携带病毒， 因此， 该病常具有复发 特点。健康猪群通过接触被污染的饲料、饮水、石槽、水槽等 均可感染该病毒。另外，不同种动物间也可进行相互感染。第 三， 猪口蹄疫在发病初期传染性最强， 主要通过呼吸道、 消化 道、黏膜、粪便、尿液、唾液、乳汁等直接或间接传播叫 4.2流行特点
口蹄疫病毒具有较强的抵抗力，在5益环境下可存活较长 时间。超低温环境下甚至可以保存几年。另外，该病毒对高温 和紫外线敏感。35益以上的高温可杀死该病毒，且环境温度越 高，病毒存活时间越短。因此，该病在夏季炎热气候下发病率 低。其次，该病毒对酸碱非常敏感。猪肉产品进行酸、碱处理
可有效杀死病毒。因此，养殖场内多用氢氧化钠、氢氧化钾、 碳酸钙或甲醛溶液作为消毒剂进行杀菌消毒。 2发病机理
日常饲养过程中可在饲料中加入阿莫西林、激生肽、葡萄 糖粉等进行疾病预防。对于感染的病猪可采用本草进行肌肉注 射，每日一次，连续注射3d遥若病情严重还可注射口蹄痘毒脑 心康，连续注射3d遥 8结语
综上所述，猪口蹄疫并具有强传染性，可严重影响生猪健 康及生长，对我国养猪业造成巨大的经济损失。因此，广大养 殖人员需增强日常饲养工作，加强防疫意识。一旦发现疫情， 及时上报有关部门，并做到“早发现，早隔离，早治疗”，减 少经济损失，促进我国生猪养殖的健康可持续发展。
抗原表位研究方法进展_宋帅
动物医学进展,2010,31(12):87-91Pr ogress in Veterinary Medicine抗原表位研究方法进展宋 帅,李春玲*,贾爱卿,杨冬霞,李 淼(广东省农业科学院兽医研究所 广东省兽医公共卫生实验室,广东广州510640)收稿日期:2010-05-18基金项目:广东省农业攻关项目(2007A020300005-11)作者简介:宋 帅(1982-),男,河南汝州人,研究实习员,硕士,主要从事动物疫病及综合防控技术研究。
*通讯作者摘 要:抗原表位是抗原分子中的主要功能单位,能有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫。
随着免疫学和生物信息学技术的不断发展,用于研究T 细胞表位和B 细胞表位的方法得到了很大的提高。
论文中概述了近几年用于研究T 细胞表位的预测方法和鉴定方法,以及在B 细胞表位研究中所用的表位肽扫描技术、蛋白质/切割0法、噬菌体展示技术、X -衍射与核磁共振、表位预测方法等技术,并对每种研究方法进行了比较,为从事抗原表位研究的人员提供参考,从而更有利于表位肽疫苗的研制和诊断方法的建立。
关键词:T 细胞表位;B 细胞表位;预测;鉴定中图分类号:S852.4文献标识码:A文章编号:1007-5038(2010)12-0087-05抗原表位又称抗原决定簇,是指抗原分子表面具有特殊结构和免疫活性的化学基团,具有刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能够被其识别的一个免疫活性区。
根据抗原表位特异性免疫应答的程度,可将抗原表位分为免疫优势表位、亚优势表位和隐性表位。
根据与抗原受体结合细胞的不同,分为B 细胞抗原表位和T 细胞抗原表位;其中B 细胞抗原表位则往往为亲水性肽段,一般位于抗原三维大分子的氨基酸长链折叠处[1],而T 细胞抗原表位往往仅为埋藏在蛋白质空间结构内部的疏水性肽段[2]。
根据表位对机体的影响,可分为保护性表位(免疫位)、致病性表位(变应位)和耐受性表位(耐受位)。
按抗原表位结构的不同分为连续性抗原表位和非连续性抗原表位,前者又称线型表位,是由肽链上顺序连续的氨基酸组成,后者又称构象型表位,是由那些空间邻近但顺序上不连续的氨基酸组成。
口蹄疫病毒VP1蛋白可溶性表达标签筛选
口蹄疫病毒VP1蛋白可溶性表达标签筛选舒静超;李赛赛;申欢欢;郭豫杰【摘要】为了提高口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达,根据A型口蹄疫病毒核酸序列设计并合成了口蹄疫病毒VP1片段,将其克隆到pET21b(+)载体上,设计1对通用引物扩增10个融合标签Gri-fin、GST、NusA、SUMO、Thioredoxin、ProteinG、γ-crystallin、ArsC、PpiB、MBP,并分别将扩增的融合标签与VP1连接构建重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG诱导其表达.SDS-PAGE结果表明,MBP、Grifin和GST能够促进口蹄疫病毒VP1蛋白的可溶性表达,其中MBP与VP1融合表达蛋白可溶部分占60％;Western blot鉴定分析结果显示,小鼠抗His标签单克隆抗体能识别表达的重组蛋白.表明成功表达了具有免疫学活性的融合蛋白MBP-VP1.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2016(045)009【总页数】6页(P114-119)【关键词】口蹄疫病毒;VP1蛋白;可溶性;融合标签【作者】舒静超;李赛赛;申欢欢;郭豫杰【作者单位】河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州450002;河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州450002;河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州450002;河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S855.3口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等，发病率极高，传播速度极快，易造成严重的经济损失，世界动物卫生组织将其列为A类传染病之首，我国农业部也将其划定为一类动物传染病[1]。
口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒科(Picomaviridae)、口蹄疫病毒属(Aphthovirus)，有7个血清型，包括A型、O型、C型、Asia l型、SAT 1型、SAT 2型和SAT 3型等血清型，其中O型、A型口蹄疫在世界范围内分布广泛，近年来A型口蹄疫的流行范围和暴发频率呈现扩大和增强的趋势。
猪五号病研究进展
１ 流 行 特 点 ２ 传 播 途 径
疫吸附试验。 不但可监测出病原型号 ， 还
町与 猪水疱 病 、 猪水疱 性 口炎 相区别 。
５ 综 合 预 防
病 猪 和 带 毒 猪 是 主 要 的直 接传 染 源 ，
尤 以在 发 病 初 期 的 病 畜 最 危 险 。 猪 的 １ 病 个 ５１ 五 号 病 的 根 本 防 治 措 施 是 使 用 ． 豆 粒 大 水 泡 内 的病 毒 量 足 以 致使 １ 万 头 猪 ０ 发 病 。 外 ， 猪 的尿 、 、 、 出 的气 、 另 病 粪 乳 呼 唾 液、 、 、 肉 毛 内脏 、 液 等 以及 污 染 的猪 舍 、 精
五 号病 俗 名 “ 口疮 ” “ 癀 ” 是 传 染 源 。 复猪 带 毒 １ 月左 右 。本病 主要 、蹄 ， 康 个
由 五 号 病 毒 感 染 引 起 的偶 蹄 动 物 共 通 过 消 化 道 、 吸 道 、 伤 的皮 肤 粘 膜 进行 特 效 的 治 疗方 法 。 产 中 以预 防 为主 ： 呼 损 生
验 室 诊 断 ４ 实 验 室 诊 断
五 号 病 即 猪 口蹄 疫 ， 病 是 由 ｎ 该
寒冷时多发 ， 到夏 季往 往 自然 平 息 。 等偶 猪
蹄 疫 病 毒 所 引 起 的 一 种 急 性 发 热 和 蹄 动 物 对 本 病 敏 感 ， 蹄动 物 不发 病 。 病 单 本
取 病 猪 水疱 皮 或 水 疱 液 采用 补 体
其 特 征 是猪 口腔 粘 膜 、 部 、 房 等 处 蹄 乳 皮 肤 发 生 水疱 和 溃 烂 。不 管 大 小 猪 均 可发 病 ，但 以哺 乳 仔 猪 死 亡 率 最 高 常 常发 生 心 肌 炎急 性 死 亡 。本 病 传 染 速 度 迅 猛 ， 能 在 短 时 问 内 大 面 积 流行 ， 常 给 养 殖 业 带 来非 常 严 重 的后 果 。
疫吸附试验。 不但可监测出病原型号 ， 还
町与 猪水疱 病 、 猪水疱 性 口炎 相区别 。
５ 综 合 预 防
病 猪 和 带 毒 猪 是 主 要 的直 接传 染 源 ，
尤 以在 发 病 初 期 的 病 畜 最 危 险 。 猪 的 １ 病 个 ５１ 五 号 病 的 根 本 防 治 措 施 是 使 用 ． 豆 粒 大 水 泡 内 的病 毒 量 足 以 致使 １ 万 头 猪 ０ 发 病 。 外 ， 猪 的尿 、 、 、 出 的气 、 另 病 粪 乳 呼 唾 液、 、 、 肉 毛 内脏 、 液 等 以及 污 染 的猪 舍 、 精
五 号病 俗 名 “ 口疮 ” “ 癀 ” 是 传 染 源 。 复猪 带 毒 １ 月左 右 。本病 主要 、蹄 ， 康 个
由 五 号 病 毒 感 染 引 起 的偶 蹄 动 物 共 通 过 消 化 道 、 吸 道 、 伤 的皮 肤 粘 膜 进行 特 效 的 治 疗方 法 。 产 中 以预 防 为主 ： 呼 损 生
验 室 诊 断 ４ 实 验 室 诊 断
五 号 病 即 猪 口蹄 疫 ， 病 是 由 ｎ 该
寒冷时多发 ， 到夏 季往 往 自然 平 息 。 等偶 猪
蹄 疫 病 毒 所 引 起 的 一 种 急 性 发 热 和 蹄 动 物 对 本 病 敏 感 ， 蹄动 物 不发 病 。 病 单 本
取 病 猪 水疱 皮 或 水 疱 液 采用 补 体
其 特 征 是猪 口腔 粘 膜 、 部 、 房 等 处 蹄 乳 皮 肤 发 生 水疱 和 溃 烂 。不 管 大 小 猪 均 可发 病 ，但 以哺 乳 仔 猪 死 亡 率 最 高 常 常发 生 心 肌 炎急 性 死 亡 。本 病 传 染 速 度 迅 猛 ， 能 在 短 时 问 内 大 面 积 流行 ， 常 给 养 殖 业 带 来非 常 严 重 的后 果 。
口蹄疫灭活疫苗146S含量检测方法概述
口蹄疫灭活疫苗146S含量检测方法概述董金杰;王凡;陈苗苗;牟克斌;王超英;刘萍【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2017(038)010【总页数】2页(P78-79)【作者】董金杰;王凡;陈苗苗;牟克斌;王超英;刘萍【作者单位】中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州;中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州;中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046;中国农业科学院兰州兽医研究所兰州;中农威特生物科技股份有限公司兰州 730046【正文语种】中文【中图分类】S852.4+3口蹄疫(Food and Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Food and Mouth Disease Virus，FMDV)引起的偶蹄类动物的急性、热性、接触性、烈性传染病。
世界范围内预防口蹄疫发生的有效方法是疫苗免疫，疫苗生产过程中，各环节过程控制至关重要，其中准确定量完整的口蹄疫病毒粒子(146S)尤为关键，因为146S 抗原的含量直接决定了口蹄疫灭活疫苗的质量，所以准确，快速，敏感的定量方法势在必行，本文对146S含量检测主要方法的研究进展做一综述。
主要有蔗糖密度梯度离心法和氯化铯密度梯度离心法两种，其中蔗糖密度梯度离心法应用较为广泛。
1.1 蔗糖密度梯度离心法（1）该方法最早由Barteling等于1974年建，是采用10%～25%的蔗糖梯度，45000r/min离心30min，测定各部分在254nm处的吸光值，根据峰面积计算146S含量。
但病毒液中146S含量太少时，不能直接检测，需要用PEG-6000对样品进行浓缩。
最近几年，很多研究人员对此方法进行了改进。
董金杰等(2010)将灭活的FMDV经超滤浓缩后分别加于15%～45%和15%～55%的蔗糖梯度顶部，35000/min，超速离心2.5h后，用紫外分光检测仪检测各区带在259nm处的吸光值，绘制吸收峰图谱，并计算峰的面积从而得到146S抗原的含量。
口蹄疫基础知识
这一研究成果的取得，为我 国人类和畜禽其他重大疫病病 原的分子流行病学研究起着推 动作用。
同时也显示了基础研究对经 济建设产生的巨大作用。
口蹄疫的危害
仅用一个疫病的发病率、死亡率来计算经 济损失，则低估了口蹄疫的危害性。 1997年台湾口蹄疫的发生，给了我们一个 大概的基数。 台湾每年猪肉出口合同额15亿美圆； 大陆猪的出栏率是台湾的40倍； 如果按4倍计算仅猪肉一项（出口）就达 60亿美圆； 改革开放20年仅因口蹄疫一个病，我国 少收入10 000多亿元。
坚持贯彻“预防为主，防重于治” 的方针，以及“早、快、严、小”的 灭病原则。
坚持强制免疫、强制封锁、强制扑 杀、强制消毒、强制检疫等综合措施。
按照“国际动物卫生法典”
对口蹄疫的控制分为：
1.非免疫无口蹄疫国家（地区）；
2.免疫无口蹄疫国家（地区）；
3.口蹄疫感染国家（地区）。
非免疫无口蹄疫国家必须具 备：
我国口蹄疫疫情分析及其
发生特点
患病动物的种类有下列变化规律： 50年代以感染牛羊为主，猪发 病的比例不足1%； 60年代病猪的比例上升为 5%~10%； 80年代病猪占总发病数的90%； 1985年后口蹄疫的发生以猪为 主，牛的口蹄疫仅占5%。
从资料显示：
自1964年开始，猪口蹄疫的比 例上升。80、90年代猪发病的比 例高达90%以上。
5.猪口蹄疫病毒与牛弱毒疫苗 株的亲本——牛源口蹄疫病毒 的VP-1基因核苷酸序列的同源 性则较低。
基于上述结论说明：我国特 有的，已经流行了30多年，造 成亿万元损失的猪口蹄疫发生 的原因，就是由我们自己研制， 并从1964年正式批准使用的牛 口蹄疫弱毒疫苗而引起的。
这一结果同时还揭示了：
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种 急性 、 性 、 度 接 触 性 传 染 病 ， 国 际 兽 疫 局 列 为头 号 热 高 被
步 。 一般 来 说 ， 各 分 离 株 中 高 度 保 守 的 序 列 ． 别 是 中 和 在 特 表位 ， 疫 苗 的 研 制 中 具 有 重 要 的 参 考 价 值 。有 关 Ｆ Ｖ 在 ＭＤ
起 培 养 ， 选 单 抗 突 变 株 ， 对 其 进 行 血 清学 特 性 检测 ， 筛 并 即
结构上 ， 目前 所 确 定 的抗 原 位 点在 不 同型 的病 毒 各 不 相 同 。 自 １７ ８ ９年 Ｌ ｅｆｒ 现 该 病 以来 ， 们 为 控 制该 病 做 了 ｏｆ 发 ｅ 人
不 懈 努 力 。疫 苗 接 种 是 特 异 性 预 防 Ｆ ＭＤ 的 可 靠 和 有 效 手 段 ， 全 有 效 的疫 苗 是 成 功 地 预 防 、 制 乃 至 最 终 消 灭 Ｆ 安 控 ＭＤ
的先决条件。Ｆ ＭＤ 弱 毒 疫 苗 和 灭 活疫 苗 等 常 规 疫 苗 都 具 有
良好 的 免 疫 原 性 ， 预 防 和 控 制 Ｆ 在 ＭＤ 的 过 程 中 发 挥 着 重 要
作 用 。 ， 由于 存 在 病 毒 毒 力 返 强 、 毒 灭 活 不 彻 底 、 病 毒 但 病 活
逃逸 疫 苗 加 工 厂 等 不 安 全 因 素 ， 及 不 能 产 生 交 叉 保 护 、 以 无
近 年 来 ， 着 免 疫 学 理 论 、 因工 程 、 白质 工程 的 飞 速 随 基 蛋 发 展 和 固相 合 成 肽 技 术 、 物 物 理 技 术 、 疫 检 测 技 术 以 及 生 免 计 算 机 技 术 的广 泛 应 用 ， 得 蛋 白 质 抗 原 表 位 的 研 究 方 法 也 使
要依赖于单克 隆抗 体 的检测 分 析 ， 利 用制 备 的一组 Ｆ — 即 Ｍ Ｄ 中和性单抗 ， 测 定 了其 中和性 能 以后 ， 其与 Ｆ Ｖ Ｖ 在 将 ＭＤ
一
亚 型 ， 型 之 间 无 交 叉 保 护 反应 ， 抗 原结 构 十 分 复 杂 ， 在 各 其 存
广 泛 的 抗 原变 异 。 Ｆ Ｄ 的 抗 原 位 点 多 位 于 衣 壳 蛋 白 的环 Ｍ Ｖ
结 构 蛋 白 以及 非 结 构 蛋 白 上 抗 原 位 点 或 表 位 的 结 构 及 其 基 因定位 ， 于阐明 Ｆ 对 ＭＤ 的 结 构 、 能 及 Ｆ Ｖ 功 ＭＤ 基 因 工 程 疫 苗 的 研 制 至 关 重 要 。 许 多 年 来 ， ＭＤ 抗 原 表 位 的 研 究 主 Ｆ Ｖ
Ａ 类 传 染 病 。该 病 传 播 途 径 多 、 播 速 度 快 ， 多 次 在 世 界 传 曾
发生大流行。 口蹄 疫 病 毒 （ ｏ ｔ ｎ － ｕｈＤｉ ａｅＶｉ ｓ Ｆ Ｖ） Ｆ ｏ－ ｄＭｏ ｔ ｓ ｓ ｒ ， ＭＤ 属 ａ ｅ ｕ 于小 Ｒ ＮＡ 病 毒 科 ． ＭＤ 属 ， 病 毒 有 七 个 血 清 型 ， 别 为 Ｆ Ｖ 该 分 ０、 Ｃ Ａｓ Ｉ、 Ａ 、 ＡＴ 、 ＡＴ ， 种 血 清 型 包 括 多 个 Ａ、 、 ｉ Ｓ Ｔ１ Ｓ ２ Ｓ ３ 每 ａ
维普资讯
５０ ７
Ｃｈｉ ｓ ｒ ａ ｏ ｓ ｓ ｎｅ ｅ Ｊ ｏｕ ｎ ｌｏｆ Ｚｏ ｎｏ ｅ
中 国 人 兽 共 患 病 学 报
２ ８， ２４ （ ００ ６）
文 章 编 号 ：０２ ６ ４ ２ ０ ）６ ５６ ４ １ ０ —２ ９ （ ０ ８ ０ —０ ６ —０
得 到 了相 应 的发 展 和 完 善 ， 现 了 一 些 适 应 于 蛋 白质 抗 原 表 发
法 区 别 免 疫 动 物 和 自然 感 染 动 物 等 问 题 ， 使 人 们 不 断 寻 求 促
一
种更加安全 、 效 、 谱 的 Ｆ 有 广 ＭＤ疫 苗 。近 年 来 ，随 着 生 物
技 术 在 兽 医生 物 制 品 领 域 应 用 的不 断 深 化 和 发 展 ． 苗 制 造 疫 技 术 和 免 疫 学 技 术 得 到 迅 猛 发 展 ， ＭＤ 基 因 工 程 疫 苗 如 亚 Ｆ
采 用 中和 试 验 测 定 单 抗 突 变 株 和 单 抗 的反 应 性 能 ， 苷 酸 序 核 列 测 定 确 定 抗 原 位 点 ． 成 肽 技 术 验 证 抗 原 位 点 。 通 过 此 合
法 ， 庆 阁 等 （ ９ ７年 ） Ｂ ｔｈ ｉ 等 （ ９７年 ） Ｍａｅ 谢 １８ 、 ｕｃ ａ ｈＧ ａ １９ 、 ｔｕ等 （９ １年 ）Ｔｈ ｍａ 等 （９ ８年 ） ａ ｔ （ ９ ９年 ） Ｓｉ 等 １９ 、 ｏ ｓ １８ 、Ｂ ｘ 等 １８ 、 ａｚ （９ １年 ） 别 确 定 了 Ｆ １９ 分 ＭＤＶ 型 、 ｉ Ｉ型 、 型 、 Ｏ亚 ０ Ａｓ ａ Ｃ Ａ１ 型 、 ２亚 型 以 及 Ａ５亚 型 的主 要 抗 原 位 点 。 Ａ１
口蹄 疫 表 位 疫 苗 的研 究 进 展
张 中 旺 ， 永 光 张
中 图分 类 号 ： ５ １ 文 献 标 识 码 ： Ｒ１ Ｂ
口蹄 疫 （ ｏ ｔ ｎ － ｕｈＤ ｓａｅ Ｆ Ｆ ｏ－ ｄＭｏ ｔ ｉ ｓ， ＭＤ） 偶 蹄 动 物 的 ａ ｅ 是
一
别 的 特 异 性 多 肽 ， 此 表 位 的 鉴 定 是 构 建 表 位 疫 苗 的 第 一 因
位 研 究 的实 验 检测 和 理 论 预 测 方 法 。如 根 据 蛋 白质 一 级 结 构 预 测 法 、 学 “ 割 ” 或 酶 法 、 探 针 扫 描 技 术 （ 叠 合 成 化 切 法 肽 交 多 肽 的方 法 ） 噬菌 体 展 示 技 术 、 — ａ 、 ＡｇＦ ｂ复 合 物 的 ｘ射 线 衍 射和核磁共振 （ ＮＭＲ 分 析 等 。其 中很 多 方法 已 用 于 Ｆ ） ＭＤＶ 抗 原 表位 的研 究 ， ：云 涛 。 等 根 据 蛋 白质 一 级结 构 预测 法 如 综合评价 了 Ｆ ＭＤＶ结 构 蛋 白 的 Ｂ细 胞 抗 原 表 位 ；ｔ ｈ ｉ Ｓｒ ｍａ ｒ ｏ ｅ