全蛋白提取组织裂解液配方

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Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液

1.110% Triton X-100

Triton X-100 10ml

蒸馏水90ml

混合后37℃-40℃水浴中2-3hr,使其充分混匀

1.210% 去氧胆酸纳

去氧胆酸纳1g

蒸馏水10ml

避光保存

1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)

PMSF 174.2mg

异丙醇5ml

分装,-20℃保存

1.4100mmol/L EDTA

EDTA 372.24mg

蒸馏水10ml

1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)

亮抑酶肽2mg

蒸馏水2ml

分装,-20℃保存

1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)

抑蛋白酶肽2mg

蒸馏水2ml

分装,-20℃保存

1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)

胃蛋白酶抑制剂2mg

甲醇2ml

分装,-20℃保存

2.工作液

2.1Tris-base (50mmol/L,pH 7.4):

Tris-base 605mg

NaCl 900mg

蒸馏水75ml

用HCl调整pH值为7.4

2.210% Triton X-100 10mL

2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL

2.4100mmol/L EDTA 1mL

2.5用前加入:

1mg/mL亮抑酶肽100μl

1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl

1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl

200mmol/L PMSF 500μl

各成分的终浓度

Tris-base 50mmol/L,pH 7.4

Triton X-100 1%

去氧胆酸纳0.25%

NaCl 150mmol/L

EDTA 1 mmol/L

亮抑酶肽1μg/mL

抑蛋白酶肽1μg/mL

胃蛋白酶抑制剂1μg/mL

PMSF 1mmol/L