全蛋白提取组织裂解液配方
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Western-Blot 全蛋白提取组织裂解液配方1.储备液
1.110% Triton X-100
Triton X-100 10ml
蒸馏水90ml
混合后37℃-40℃水浴中2-3hr,使其充分混匀
1.210% 去氧胆酸纳
去氧胆酸纳1g
蒸馏水10ml
避光保存
1.3200mmol/L PMSF(苯甲基磺酰氯)
PMSF 174.2mg
异丙醇5ml
分装,-20℃保存
1.4100mmol/L EDTA
EDTA 372.24mg
蒸馏水10ml
1.51mg/mL亮抑酶肽(Leupeptin)
亮抑酶肽2mg
蒸馏水2ml
分装,-20℃保存
1.61mg/mL 抑蛋白酶肽(Aprotinin)
抑蛋白酶肽2mg
蒸馏水2ml
分装,-20℃保存
1.71mg/mL 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)
胃蛋白酶抑制剂2mg
甲醇2ml
分装,-20℃保存
2.工作液
2.1Tris-base (50mmol/L,pH 7.4):
Tris-base 605mg
NaCl 900mg
蒸馏水75ml
用HCl调整pH值为7.4
2.210% Triton X-100 10mL
2.310% 去氧胆酸纳 2.5mL
2.4100mmol/L EDTA 1mL
2.5用前加入:
1mg/mL亮抑酶肽100μl
1mg/mL 抑蛋白酶肽100μl
1mg/mL 胃蛋白酶抑制剂100μl
200mmol/L PMSF 500μl
各成分的终浓度
Tris-base 50mmol/L,pH 7.4
Triton X-100 1%
去氧胆酸纳0.25%
NaCl 150mmol/L
EDTA 1 mmol/L
亮抑酶肽1μg/mL
抑蛋白酶肽1μg/mL
胃蛋白酶抑制剂1μg/mL
PMSF 1mmol/L