HPLC_TOF_MS检测补肾强身胶囊中西地那非和他达那非

附件1保健食品中75种非法添加化学药物的检测BJS 2017101 范围本方法规定了保健食品中利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸钠盐、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N—单去甲基西布曲明、N,N—双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸的液相色谱—串联质谱检测方法。

本方法适用于片剂、口服液、硬胶囊和软胶囊保健食品中的利血平、格列喹酮、羟基豪莫西地那非、硫代艾地那非、格列苯脲、格列美脲、豪莫西地那非、伐地那非、西地那非、那红地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、瑞格列奈、红地那非、格列吡嗪、洛伐他汀羟酸、尼莫地平、辛伐他汀、氨氯地平、洛伐他汀、美伐他汀、氨基他达拉非、他达拉非、佐匹克隆、尼索地平、脱羟基洛伐他丁、哌唑嗪、非洛地平、格列波脲、尼群地平、罗格列酮、吡咯列酮、罗通定、醋氯芬酸、硝苯地平、三唑仑、青藤碱、呋塞米、咪达唑仑、格列齐特、劳拉西泮、酚酞、二氧丙嗪、氯硝西泮、阿普唑仑、扎来普隆、氯氮卓、氢氯噻嗪、艾司唑仑、奥沙西泮、地西泮、硝西泮、西布曲明、文拉法辛、氯苯那敏、氯美扎酮、甲苯磺丁脲、阿替洛尔、N—单去甲基西布曲明、N,N—双去甲基西布曲明、沙丁胺醇、司可巴比妥、褪黑素、芬氟拉明、苯巴比妥、可乐定、异戊巴比妥、卡托普利、苯乙双胍、巴比妥、麻黄碱、丁二胍、氨甲环酸、二甲双胍和烟酸共75种非法添加物质的检测，同样适用于片剂、口服液、硬胶囊、软胶囊类声称具有保健功效的食品中上述75种物质的检测.2 原理试样经甲醇提取后，采用液相色谱-串联质谱仪检测。

20XX年补肾强身胶囊稳定性试验方案为了进一步确认销售的补肾强身胶囊能够在标示的贮存条件下，产品有效期内符合质量标准的各项要求，按照有关规定进行在温度25℃±2℃、相对湿度60%±5%条件下24个月的长期稳定性考察。

1产品的包装、规格、生产批量、考察批次数：(1)包装：铝箔和PVC硬片包装(2)规格:每粒装0.3g(3)生产批量:IOoO万粒(4)考察批次：①包装规格为12粒/板X2板/袋X1袋/盒的每年考察一批次。

②包装规格为12粒/板X3板/袋X2袋/盒的每年考察一批次。

③包装规格为12粒/板X4板/盒的每年考察一批次。

④包装规格为12粒/板X8板/盒的每年考察一批次。

⑤包装规格为12粒/板X14板/盒的每年考察一批次。

2.产品介绍：补肾强身胶囊执行标准为部颁标准中药成方制剂第四册WS3-B-0751-91；批准文号为国药准字ZXXXXXXXXXX；包装形式为PVC硬片和铝箔包装，贮存条件为密封；有效期为24个月。

3.相关的稳定性检验方法：包装容器的密封性一目测、感观；性状一目测；外观--目测；崩解时限一一崩解时限检查法；4.检验方法依据：(1)部颁标准中药成方制剂第四册第87页补肾强身胶囊。

(2)《中国药典》(2023版)四部“胶囊剂”通则。

5.合格标准：根据部颁标准中药成方制剂第四册补肾强身胶囊项下质量标准进行包装容器的密封性、性状、外观、崩解时限的检查，结果符合内控标准规定。

6.容器密封系统的描述：补肾强身胶囊所用包装规格12粒/板X2板/袋X1袋/盒、12粒/板X3板/袋X2袋/盒、12粒/板X4板/盒、12粒/板X8板/盒、12粒/板X14板/盒为药用包装PVC硬片和铝箔包装，包装严密防潮，能保证产品质量。

7.试验间隔时间（测试时间点）：每批样品自贮存开始时（0月）检测一次，随后每3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月分别检测一次。

8,贮存条件：密封，在温度25±2℃,相对湿度60%±5%的条件下放置。

LC-MS/MS测定保健食品中非法添加四种新型他达拉非衍生物王子龙1，梁卜文1，董培智1，刘文博1，王珂2，项新华3，*（1.山西省食品药品检验所，太原 030031；2.山西中医药大学，晋中 030619；3.中国食品药品检定研究院，北京 102629）摘要：目的：建立缓解体力疲劳类保健食品中非法添加四种新型他达拉非衍生物的检测方法并考察其可行性。

方法：筛选出具有相同结构的四种新型他达拉非衍生物，建立液相色谱法初筛与定量（以富士C18-4.6×250mm-5µm为色谱柱，以乙腈-0.1%三氟乙酸水为流动相梯度洗脱，并于230nm波长下采集信号，以DAD光谱图初步定性、外标法定量）和液质联用法确证（以含0.1%乙酸的0.02mol/L乙酸铵溶液-乙腈-甲醇（45∶25∶30）为流动相等度洗脱，选择电喷雾电离源ESI+扫描，通过比较样品与对照品的分子离子峰、二级碎片离子峰进行确证）的检测方法，并在常见的饮料、酒剂、片剂、胶囊、咖啡、软胶囊和口服液7种基质中对标准曲线相关系数、线性范围、重复性、回收率、定量限、检出限等方法学参数进行考察。

结果：四种新型他达拉非衍生物质量浓度在0～80μg/mL内与峰面积有良好的线性关系，对7种不同基质分别进行三个浓度水平的准确度评价，平均回收率均在90%～105%之间。

结论：该方法具有快速、准确、高灵敏度等优点，可作为测定保健食品中非法添加四种新型他达拉非衍生物的有效方法。

关键词：保健食品；他达拉非衍生物；新型非法添加化合物；方法建立中图分类号：TS218/TS202.3 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）01-0064-08doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.01.011LC-MS/MS determination of four novel Tadalafil derivativesillegally added in food supplementsWANG Zi-long，LIANG Bu-wen1，DONG Pei-zhi1，LIU Wen-bo1，WANG Ke2，XIANG Xing-hua3，*（1. Shanxi Institute for Food and Drug Control，Taiyuan 030031；2. Shanxi University of Traditional Chinese Medicine，Jinzhong 030619；3. China Food and Drug Testing Institute，Beijing 102629）Abstract：Objective：To establish a determination method of four novel Tadalafil derivatives illegally added to foods supplements for fight fatigue and its feasible. Method：Four same structure Tadalafil derivatives were selected and liquid chromatography was used in the early screening stage. Quantitative detection was performed by Fuji C18-收稿日期：2020-05-22项目基金：山西省重点研发计划项目（201903D321011）。

高效液相色谱串联质谱法检测西地那非血浆浓度目的：建立高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中西地那非的浓度。

方法：以西地那非-d8为内标，血浆经甲醇沉淀蛋白后，采用Titank-C18色谱柱分离，流速0.5 mL/min；以选择反应检测（SRM）方式进行检测。

结果：西地那非的线性范围为4.00ng/mL~1000 ng/mL，提取回收率和内标平均提取回收率分别为82.32%～84.75%和99.69%，日内和日间准确度精密度均＜15%。

结论：本法操作简便、快速、灵敏，重现性好，适应于西地那非人体内血药浓度的测定及其药代动力学和生物等效性研究。

关键词：西地那非；高效液相色谱串联质谱法；含量测定西地那非是一种5型磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂，PDE5在阴茎海绵体中高度表达。

当性刺激引起局部一氧化氮（NO）释放时，一氧化氮激活鸟苷酸环化酶，导致环磷酸鸟苷（cGMP）水平增高，使海绵体平滑肌松弛，血液流入而使阴茎勃起。

西地那非对人海绵体无直接松弛作用，通过选择性抑制PDE5，升高环磷酸鸟苷（cGMP）水平高而导致阴茎海绵体平滑肌松弛，从而对阴茎血流水平进行调控。

西地那非临床上用于治疗勃起功能障碍（ED），能安全有效的改善各种ED患者的勃起功能[1]。

西地那非口服后吸收迅速，10～40min起效，绝对生物利用度约为40%。

空腹口服30～120min后达血药浓度峰值（Cmax），餐后口服90～180min达Cmax。

本文建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中西地那非的浓度，采用甲醇蛋白沉淀法，简单，快速，稳定，可同时满足临床药代动力学及生物等效性研究中大批量样品分析的要求。

1.仪器与对照品Thermo TSQ Altis 三重四级杆质谱仪；Vanquish UHPLC超高效液相。

枸橼酸西地那非来源：中国食品药品检定研究院，批号：420012-202003；西地那非-d8来源：TLC，批号：1390-029A2。

1.方法1.液相色谱-质谱条件1.色谱条件：色谱柱为Titank C18 5μm 50x2.1mm；流动相5mM乙酸铵溶液（A）和乙腈溶液（B）；流速0.5mL/min；梯度洗脱程序为0minA：B（80:20）→2.5minA：B（90:10）→3.4minA：B（90:10）→3.5minA：B（80:20）→3.5min A：B（80:20）(stop)，0.8min质谱切入，3min质谱切出；柱温35℃；进样量2L。