基因工程原理练习题及其答案

. Word文档 基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1． 基因工程是_________年代发展起来的遗传学的一个分支学科。 2． 基因工程的两个基本特点是： (1)____________，(2)___________。 3． 基因克隆中三个基本要点是：___________；_________和__________。 4．碱裂解提取溶液I中的葡萄糖的作用________________、_______________、______________________________。 5．同一质粒不同构型在电泳过程中迁移速率为 。 6．部分酶切可采取的措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。 7．第一个分离的限制性内切核酸酶是___________；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是_____________。 8．限制性内切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的来源不同，但识别的序列都是_________，它们属于_____________。 9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_____________切割DNA聚合酶I得到的分子量为76kDa的大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________的活性。 10．为了防止DNA的自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。 11．EGTA是____________离子螯合剂。 12．测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶，它只有_____________酶的活性，而没有_______酶的活性。 13．切口移位(nick translation)法标记DNA的基本原理在于利用_________的_______和______的作用。 14．欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用_________或_______________。 15．反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有____________的作用，可以将DNA- RNA杂种双链中的___________水解掉。 16．基因工程中有3种主要类型的载体： _______________、_____________、______________。 17．就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 18．琼脂糖凝胶的分辨力与胶浓度的关系是 。 19．如果改变反应条件就会影响酶的专一性和切割效率，称为________________。 20．影响限制性内切酶活性的因素________________、________________、________________、________________。 21．连接反应的实用温度为________________。 22．pUCl8质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 ，Amp 抗性基因则是来自 。 23．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是 ； 二是 。 24． 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是 和 。 25． 黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、COS位点序列来自 ，最大的克隆片段达到 kb。 26． 野生型的噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。 27．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是 ，而来自噬菌体的主要结构是 。 28．噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基 . Word文档 因组的 的范围内。 29． 在分离DNA时要使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是 。 30． 用乙醇沉淀DNA时，通常要在DNA溶液中加人单价的阳离子，如NaCl和NaAc， 其目的是 。 31． 引物在基因工程中至少有4个方面的用途：(1) (2) (3) (4) 。 32．Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的PCR反应产物不是平末端，而是有一个突出 碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆PCR产物的 。 33．在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在 。 34．乙醇沉淀DNA的原理是 。 35． 假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件： (1)________________________________ (2)_____________________________ (3)_________________________________。 36． 受体细胞的感受态是___________________________________。 37． DNA重组连接的方法大致分为四种：(1)_____________(2)_______________ (3)___________________________(4)___________________________。 38． 将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个___________，各种此类质 粒的集合体称之为构建了一个_________________。 39．将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个____________，源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个_________________。 40．只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成，用___________可以将这段DNA 进行百万倍的扩增。 41．人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。 42．目前，在重组体的筛选中，已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。 大致可以分为： (1)_______________(2)_______________(3)___________________ (4)____________________________等。 43．PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法，它适合于___________________________。 44． 核酸杂交探针可分为两大类： DNA探针和RNA探针。其中DNA探针又分为__________ 探针和__________________探针。 45．RNaseH的活性为________________________________________________ 。 46．第一个用于基因克隆的天然质粒 。 47．噬菌粒载体的包装需要________________的帮助下才能完成。 48．cDNA文库的特点： 、 、 、 。 49．用________________处理大肠杆菌，能增加膜的通透性。 50．在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性的DNA探针杂交。 51．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有____________和_______的活性。 52．根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_______________ (2)________________________(3)______________________。 53．Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别： (1)_______________________________________________________________________ (2)_______________________________________________________________________。 54．外源基因导入植物细胞的方法有： 。

答案 . Word文档 1．70 2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达 3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择 4．增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械力（震荡）的作用而降解。 5．超螺旋大于线性大于开环。 6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 7．EcoK；EcoRl 8．GGCC；异源同工酶 9． 枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶 10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团 11． Ca2+ 12． 5'-3'合成； 3'-5'外切 13． DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶 14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平 15．核酸水解酶H；RNA 16． 质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体 17． 复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA的插入 18． 正比 19， 星号（*）活性 20． DNA的纯度、 DNA的甲基化程度 、 温度、缓冲液(Buffer) 21. 4~16 C 22． pBR322和M13；pMBl；转座子 23． 它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽 24． 没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记 25．质粒；噬菌体； 45 26． (1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记 27．复制区； IG区 28．75％～105％ 29． 螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性 30． 中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力 31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析 32．T—载体 33．第二链合成时形成的发夹环• 34．乙醇使DNA分子脱水 35．(1)保持正确的可读框 (2)能够使其转录的启动子 (3)具有翻译的起始和终止信号 36．接受外源DNA的生理状态 37．(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法 38． 基因组DNA克隆； 基因组DNA文库 39．cDNA克隆；cDNA文库 40．聚合酶链式反应(PCR) 41．0C；42C 42．(1)遗传学方法； (2)物理筛选法； (3)核酸杂交法； (4)表达产物分析法 43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选 44．基因组DNA；cDNA 45．5’3’或3’5’方向特异地水解RNA-DNA杂交双链中的RNA链 46．pSC101