医学免疫学实验指导
（供医学、药学各专业使用）
主编：刘彦平
编委：邵嘉会陆东明李萍高翔
青海大学医学院病原生物学与免疫学教研室
2008年10月
医学免疫学是医学院校必设的基础课程之一，按教学大纲要求医学免疫学的实验课时占总学时的1/3左右，说明该学科具有理论与实践紧密结合的特点及实验教学在学科中的重要性。本课程设置要求学生不仅要掌握基础理论、基本知识，而且要学习和掌握各项基本技能。据此，我们编写出《医学免疫学实验指导》一书，力求规范实验教学，从整体提高教学水平和教学质量。
本书结合教学工作实际，共编写14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，并附有一定量的思考题。本书依教学进程安排实验次序，可帮助学生巩固基础理论知识，培养学生基本技能，提高教学效果。
免疫学和免疫学技术的发展日新月异，医学教育的改革不断向纵深发展，限于编者的学术及认识水平，本书难免存在缺点和不足。为此，希望广大师生对本书提出宝贵意见，以便及时加以改进。
编者
2008年10月
实验室规则 (4)
实验一显微镜的结构与使用 (4)
实验二白细胞的吞噬及溶菌酶试验 (7)
一、小吞噬试验(中性粒细胞吞噬功能试验) (8)
二、大吞噬试验 (8)
三、溶菌酶测定 (9)
实验三巨噬细胞（白细胞）移动抑制试验 (9)
实验四硝基四氮唑蓝（NBT）还原试验 (11)
实验五凝集反应 (12)
一、玻片凝集试验 (12)
二、人类ABO 血型鉴定试验（玻片法） (13)
三、试管凝集反应 (14)
四、间接凝集试验 (15)
五、间接乳胶凝集抑制试验 (16)
实验六沉淀反应 (17)
一、琼脂扩散试验 (18)
二、免疫电泳 (20)
三、火箭免疫电泳 (20)
四、对流免疫电泳 (22)
实验七补体的溶细胞作用 (23)
实验八补体结合试验 (24)
一、溶血素单位滴定 (24)
二、补体单位滴定 (24)
实验九血清补体活性测定 (27)
实验十淋巴细胞转换试验 (29)
实验十一玫瑰花环形成试验 (31)
实验十二变态反应试验 (32)
一、豚鼠过敏试验 (33)
二、皮肤超敏反应 (33)
实验十三免疫浊度试验 (34)
实验十四循环免疫复合物的检测 (35)
实验十五免疫标记技术 (37)
一、酶联免疫吸附试验 (37)
二、酶免疫组化技术 (38)
三、酶标免疫定量测定 (40)
四、免疫荧光技术 (41)
五、斑点金免疫渗滤试验 (43)
六、斑点免疫层析试验 (44)
实验室规则
实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段，为
保证实验效果，同时避免病原微生物的实验室内传染，保障实验操作者的安全，特制定如下规则：
一、学生在实验课前，应认真预习所要进行实验的内容，明确实验目的，了解实验原理，熟悉所要使用的仪器、药品的性质及操作程序，如有疑问，应事先请教指导教师。
二、尽量不带个人生活、学习用品入实验室，必须要带的物品如书本、文具应放在远离实验操作的指定位置。
三、进入实验室应穿白大衣，离开时将白大衣脱下并反折叠带走，在实验室内应保持安静，遵守秩序，不得大声喧哗，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。
四、实验室内禁止吸烟、进食及饮水，严禁用嘴吸移液及湿润标签，尽量不要用手触摸头面部及身体其他暴露部位。
五、如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情况，应及时报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。
六、实验中所被污染过的器材、物品及其他盛过有菌物的容器、应用完后立即投入已准备的消毒剂（如来苏尔、氯胺液）中，不可随意仍放。
七、注意观察分析实验结果，独立思考解决实验中所遇到的问题，要严格按操作程序进行实验。
八、要爱护公共财物，节约水电及试剂材料，不得将实验物品私自带出实验室。如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。
九、实验结束后，应清理实验用品，实验废弃物（包括实验动物尸体）应收入或倒入指定的地方和容器内。每一同学均应服从卫生值日安排，认真负责地做好清洁卫生。
十、离开实验室前，应用84消毒液将双手浸泡5—10分钟，然后用清水洗净。最后离开的同学应注意关水、关电、关窗、关门。如有借用的物品和仪器要及时归还。
实验一显微镜的结构与使用
【实验目的】
1.熟悉光学显微镜的结构和成像原理。
2.掌握普通光镜的使用方法，尤其是油镜的正确使用。
3.了解暗视野、相差显微镜的原理和使用方法。
【实验用品】
1.器材：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
2.标本：细菌革兰染色玻片标本、普通变形杆菌24h 内培养液、啤酒酵母新鲜培养的活标本。
【内容和方法】
一、普通光学显微镜的结构和使用方法
微生物是肉眼看不见而必须借助于光学或电子显微镜将其放大数百乃至数万倍才能观察到的微小生物，因此显微镜是认识和研究微生物最重要和最基本的工具之一。因此，掌握其使用方法是进行微生物研究的基本技能。
1.普通光镜的基本结构
普通光镜无论其外观形状如何，它都由两大部分组成，即机械装置部分和光学系统部分。机械部分包括镜座、镜臂、载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘以及升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头、调节物象焦距、搁置和移动标本。光学系统包括反光镜、聚光器、物镜和目镜。它的作用是收集光源并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像映与眼帘，是肉眼本不能分辨的物体得以清楚观察（图1-1）。
光学系统是光学显微镜的核心部分，而物镜又是其中最重要的部件。一般的光镜配有3-4个物镜，有10倍的低倍镜、40倍的高倍镜和100倍的油浸镜（有的配有一个4倍的物镜头）。标本的放大主要靠物镜。为了使用方便，常用红、黄、蓝、白的色圈分别标记物镜倍数。另外，在镜头上还刻有一些符号和数值，低倍镜上刻有10/0.25、160，10指放大倍数，0.25指镜口率（N.A ），160表示镜筒长度（mm ）。高倍镜刻有40/0.65和160/0.17，40为放大倍数，0.65指镜口率，160表示镜筒长度，0.17则表示使用时所要求盖玻片的厚度。油镜上刻有100/1.25和160/0.17
，该数值也表示放大倍数、镜口率、镜筒长度、盖玻片厚图1-1 光学显微镜的结构
