国家自然科学基金申请的要点与策略

国家自然科学基金申请的要点与策略1申报前的准备工作☐ 了解国家自然科学基金的资助范围和学科性质（仔细阅读指南）；☐ 认真复习参考文献，了解国内外研究现状；☐ 做一些预实验；☐ 凝练好科学问题（提出明确假说）；☐ 明确研究思路(编个好故事）。

2课题中标应该具备的基本条件☐研究课题具有重要价值（科学意义和应用前景）；☐具有特色与创新；☐申请者具有很强的研究背景（工作基础、预实验、发表SCI论文）；☐具备完成课题研究的基本条件。

3基金的评审程序☐初审：国家自然科学基金委各处负责申报书的资格审查（申请书填写、青年基金申请者的年龄、申请者和项目组成员是否超项）。

☐同行初筛：由基金委组织专家开会初筛。

☐一审：由基金委根据申报的题目和关键词挑选3-5名国内外专家函审。

☐终审：在一审基础上进行排序后,选择超出拟批准项目20%的预选项目,由基金委聘请相关专家组成专家评审组集中评审。

4申请书一审☐ 谁看标书：同行（少），大同行小外行（多），外行（少）。

☐ 标书看多长时间：几分钟，十几分钟是常态，花费大量时间看标书的评审专家很少。

☐ 看什么：有没有重要的问题，是什么问题；工作假说是什么；是否有明显的创新；是否有可能做（可行性、能力）。

5题目题目是评审专家首先接触到的内容，是申请者给评审专家建立第一印象的窗口。

题目的撰写要符合以下几个条件：☐临床问题和科学问题。

☐ 工作假说。

☐ 因果关系模型。

☐ 创新点。

COX-2甲基化与表达及与胃癌癌前病变的关系☐临床问题——癌前病变。

☐ 科学问题——癌前病变发生的原因。

☐ 工作假说——COX-2甲基化及其表达可能与癌前病变有关。

☐ 因果关系——因－甲基化，果－癌前病变。

22种新CYP209等位基因与黄酰脲降糖药物代谢的相关性研究国家卫生和计生委老年医学研究所6关键词想让什么样的专家评您的“申请书”？关键词：肺动脉高压；人肺动脉平滑肌细胞；核糖体蛋白L22分析：3个评审专家中：2个临床专家，1个基础专家关键词：人肺动脉平滑肌细胞；核糖体蛋白L22；分子机制；基因芯片分析：3个评审专家中：2个基础专家，1个临床专家7摘要☐ 假设评审专家没有足够的时间看后面的内容，也能把握整个标书的主要内容。

摘要中的重点仍是针对评审专家关心的问题。

如临床问题/科学问题是什么，工作假说是什么，研究方案和关键技术，预期目标与意义等。

☐ 400字以内：研究背景（2～3句）, 问题提出（1～2句）,前期实验提示（1～2句）,提出假说（1～2句）,研究内容（要体现研究思路、研究层次与水平）,科学意义（1～2句,要明确、具体）。

常用连接词：针对……现状，提出……假说，用……方法（手段）进行……研究，探索/证明……问题，对阐明……机制／揭示……规律有重要意义，为……奠定基础／提供……思路。

8摘要例脂肪因子apelin除了在脂肪组织合成和分泌外，还作为孤儿G蛋白偶联APJ受体的配体广泛分布在各种组织中。

迄今对apelin的功能及其与糖尿病的关系仍知之甚少。

我们的预实验结果提示apelin在肝胰岛素抵抗发生中起重要作用。

但其作用机制还有待进一步探讨。

为此，我们提出假说：apelin/APJ可能通过诱导氧化应激影响胰岛素信号通路，导致肝胰岛素抵抗的发生。

为了验证这一假说，我们将通过人肝癌细胞系HepG2、大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型，采用real time PCR、Western blot、腺病毒载体转染、RNA干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物整体水平等多方面探讨apelin在肝胰岛素抵抗发生中的重要作用，明确apelin通过诱导氧化应激对肝糖异生和糖原合成的调控机制。

本研究将从apelin这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定基础，为2型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。

9立项依据说明要做什么？为什么要做？☐研究现状评述(国际研究现状、国内研究现状)。

☐ 分析别人工作中存在的问题，从而凝练并提出问题，阐述重要性，解决及意义。

☐抓住关键点，说明自己的前期工作(在前期工作中发现了什么)。

☐由已有的研究引出假设。

☐ 研究思路叙述。

☐ 可能意义的分析。

☐ 小结... (重点用黑体字)。

☐ 参考文献（20～30条左右） ：权威、新（近3年内，最好是当年的）、有自引。

例：miR-152和miR-200s在炎性因子诱导肝胰岛素抵抗发生中的作用及其机制研究☐ 胰岛素抵抗是2型糖尿病及其并发症发病机制中的重要环节。

☐ 炎症是导致胰岛素抵抗发生的重要因素。

☐ 微小RNA可能在胰岛素抵抗和2型糖尿病发生中起重要作用。

☐ 基于已取得的预实验结果提出假说。

☐研究思路和科学意义。

☐ 小结。

10研究目标总体要求：范围合适;重点突出;关键问题选择准确注意：小题大做、深做;不要大题小做、浅做。

例本课题将通过小鼠肝细胞系NCTC1469、小鼠原代肝细胞和小鼠胰岛素抵抗模型，采用生物信息学、real time PCR、Western blot、腺病毒载体转染、RNA干扰等手段，从分子、细胞、组织以及动物水平等层次围绕以下目标进行研究：☐ 明确miR-152和miR-200s在炎性因子诱导的肝胰岛素抵抗发生中的作用；☐ 探讨miR-152调控miR-200s的机制；☐ 确定miR-152和miR-200s与胰岛素信号相关的下游靶基因；揭示miR-152和miR-200s影响胰岛素信号通路导致肝胰岛素抵抗发生的机制。

本研究将从microRNA这个新视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定基础，为2型糖尿病及其并发症的防治提供新的思路。

11研究内容研究内容：为完成本课题（论证假说）从不同方向（角度、层次）研究（紧扣目标,层次分明,突出重点、逻辑性强）。

例1.分析db/db胰岛素抵抗小鼠血清中炎性因子TNF-α和IL-6水平与肝脏中miR-152和miR-200s表达的关系；2.检测肝细胞在TNF-α和IL-6诱导胰岛素抵抗状态下miR-152和miR-200s的表达变化；3.观察miR-152和miR-200s水平变化对胰岛素抵抗的影响；4.确定miR-200s与胰岛素信号相关的下游靶基因；5.明确miR-200s下游靶基因FOG2和PTEN参与炎性因子诱导的胰岛素抵抗；6.探讨miR-152调控miR-200s的机制；7.在C57BL/6J小鼠胰岛素抵抗模型中验证miR-152通过调控miR-200s影响胰岛素信号通路导致肝胰岛素抵抗发生的作用机制。

12拟解决的关键问题完成本研究在理论上和技术上的“瓶颈”,应简述对策。

例1.Apelin在肝胰岛素抵抗发生中起何种作用? 是诱导还是抑制胰岛素抵抗？这是本项目拟解决的关键科学问题之一。

本项目将采用RNA干扰手段沉默APJ受体，通过肝癌细胞系HepG2以及大鼠肝原代细胞和大鼠胰岛素抵抗模型的研究明确Apelin在肝胰岛素抵抗发生中的作用。

2.Apelin是否通过诱导氧化应激调控肝糖异生和糖原合成? 这是拟解决的关键科学问题之二。

本项目将采用各种抑制剂、激动剂以及RNA干扰沉默NOX3，探讨Apelin如何诱导氧化应激的产生，验证Apelin调控肝糖异生和糖原合成的机制。

3.在大鼠模型中如何有效抑制肝脏中NOX3和APJ的表达? 这是拟解决的关键技术问题。

本项目将静脉注射携带NOX3-siRNA或APJ-siRNA的腺病毒载体，我们在以往的研究中已用此法成功地抑制肝脏中基因的表达。

13可行性分析☐ 该申请在理论上是否可行。

☐ 实验设计是否合理。

☐ 研究方法和研究方案的可行性：已掌握的研究方法；材料来源；实验条件；前期工作基础；项目组人员结构。

☐ 可行性分析除了对本单位的研究实力进行恰当的分析外，最好找一家比自己单位强的合作伙伴，把他们的软硬件条件也加进去，现在的项目越来越看重多单位合作。

14例1☐ 研究基础扎实：前期我们在淋巴增殖性疾病的发病机制、生物学特性及预后相关因素方面做了大量工作，为实施本课题奠定了良好的基础，包括…… 。

☐ 研究目标切实：本课题研究目标的选择建立在我们前期研究成果和对国内外大量文献分析和推理的基础上，具有充分的立论依据，确保了研究目标切实可行。

☐ 临床标本充足：……。

☐ 技术平台与硬件设施完善：已具备了良好的分子生物学和细胞生物学技术平台,例如：……; 也具有先进完善的仪器设备,主要有……。

☐团队结构合理：课题申请者……; 课题组成员结构合理,涵盖了本课题所需的各学科的人才。

该团队长期从事……的研究，具有较深厚的研究背景；同时熟练掌握各种实验技术的操作方法。

☐ 国际合作与交流：与英国……和德国……建立并保持长期学术交流和合作关系,共同开展……。

国家卫生和计生委老年医学研究所15例2☐ 充分的立论依据……☐ 坚实的研究基础……☐ 合理的实验设计……☐ 可靠的预实验结果……☐ 成熟的技术条件……☐ 结构合理的创新团队……16项目的特色与创新特色与创新即在本项目研究领域中申请者与国内外同行所不同的，包括:☐ 学术思想（理论）的创新；☐ 技术方法的创新；☐ 研究新模式。

例☐ 新基因KL92是本申请人前期工作中识别的一个功能基因，目前为止，尚未见国内外有解析KL92基因功能的研究报道。

因此，本项目属于源头创新，所研究的对象和所挖掘的任何信息都将具有突破性的价值。

☐ 研究KL92在肝糖异生过程中的功能和机制目前未见任何报道，本项目有望揭示新的作用机制。

☐ 本项目的实验设计中具有系统性的创新特色，从细胞系、原代细胞、组织和动物整体水平等多方面进行实验设计，拟挖掘KL92和肝糖异生的关系，并以PGC1/FOXO1为靶点，探索其可能机制。

17项目的特色与创新例2☐ 本课题是结合国内外关于miR-152和miR-200家族最新研究结果和db/db小鼠肝脏 microRNA 芯片分析结果的提示，结合我们课题组的前期研究结果，凝练出科学问题并提出了自己的假说。

因此本课题具有理论上的创新；☐ 近几年国内外学者的研究侧重放在miR-152和miR-200家族在肿瘤发生中的作用，而关于miR-152和miR-200家族在胰岛素抵抗发生中作用的研究鲜有报道。

本课题以预实验结果作为立项依据，将首次明确miR-152和miR-200s在炎症因子诱导肝胰岛素抵抗发生中起重要作用； ☐ 本课题首次观察到miR-152对miR-200s的调控作用，进一步从miR-152及其下游靶基因甲基化酶DNMT-1对miR-200s表达及其甲基化水平的影响探讨miR-152对miR-200s的调控机制。

因此，本课题具有很强的创新性；☐ 本课题的实验设计中具有系统性的创新特色，从细胞系、原代细胞、组织和动物整体水平等多方面进行实验设计，拟挖掘miR-152和miR-200s与胰岛素信号调节的关系，探索其可能机制。