常用饲用酶制剂检测方法介绍(业界精制)

食品中酶活性的测定方法与作用评价食品中的酶活性是指食品中含有的酶的活性水平。

酶是一种能够加速化学反应速率的蛋白质分子，它们在生物体内起着至关重要的作用。

在食品中，酶的活性对于食品的品质、储存和加工都有着深远的影响。

因此，准确测定食品中的酶活性，并评价其对食品的作用，对于食品工业及消费者来说都具有重要意义。

目前，常见的测定食品中酶活性的方法主要有两种，分别是酶动力学法和酶质谱分析法。

酶动力学法通过测定酶催化反应速率的变化来间接测定酶的活性。

首先，确定反应所需的底物和酶的适宜浓度，然后通过改变反应体系中底物或酶的浓度，观察反应速率的变化。

利用这种方法，可以推算出酶的催化反应速率常数和底物的最大转化速率。

最常用的是Michaelis-Menten动力学方程和Lineweaver-Burk双倒数图法。

酶动力学法可以测定食品中多种酶的活性，并通过调整酶活性来改善食品的加工性和品质。

酶质谱分析法则是通过质谱仪的技术手段直接测定酶的活性。

质谱仪是一种能够测定物质分子质量的仪器，通过将食品样品中的酶分子离子化，并根据其质量比例进行分离和测定。

这种方法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以在食品中快速、准确地确定酶的活性水平，但由于设备复杂和价格昂贵，应用较为有限。

无论使用何种方法进行酶活性的测定，评价酶在食品中的作用都是至关重要的。

首先，酶活性的测定可以评价食品的新鲜度。

以水果为例，水果中的酶在成熟过程中发挥着重要的作用。

通过测定水果中的酶活性，可以了解水果的成熟程度和品质。

当果实成熟时，酶的活性会降低，从而导致果肉变软、变甜。

相反，当果实过度成熟或腐烂时，酶活性将会增加，导致果肉褐变和气味恶化。

因此，通过监测酶活性可以及时评估水果的新鲜度，对于确定最佳食用时机具有重要意义。

其次，酶活性的测定可以评价食品的加工品质。

食品加工过程中，酶常常被用于提高食品的口感和质感。

以面包为例，加入面团中的面包酵母能够产生酶来催化面团中的淀粉转化为糖，从而使面包更加松软和香甜。

猪群饲养中的饲料质量检测方法引言：猪群的饲料质量对于猪的生长和健康起着至关重要的作用。

因此，为了保证猪的生长和养殖效益，合理的饲料质量检测方法至关重要。

本文将介绍几种常用的猪群饲养中的饲料质量检测方法。

一、理化指标检测理化指标检测是目前最常见的一种饲料质量检测方法之一。

通过对饲料样品的理化指标进行检测，可以直观地了解饲料的营养成分、含水量、微量元素等情况，从而判断饲料的品质。

1. 水分含量检测水分含量是饲料中最基本的理化指标之一，也是了解饲料中水分状况的重要指标。

常用的水分含量检测方法有烘箱法、光波法、滴定法等。

其中，烘箱法是最常用的水分含量检测方法之一，通过将饲料样品放入烘箱中加热，待样品中的水分蒸发殆尽后，称取样品的质量差值来计算水分含量。

2. 粗蛋白含量检测粗蛋白是饲料中重要的营养成分之一，对于猪的生长发育具有重要意义。

粗蛋白含量的检测方法有凯杰氏蛋白测定仪法、乳酸消解法等。

其中，凯杰氏蛋白测定仪法是最常用的粗蛋白含量检测方法之一，通过将饲料样品与一定的试剂混合反应，然后利用光度计检测反应液的吸收值，进而计算出粗蛋白的含量。

3. 钙、磷含量检测钙和磷是猪生长过程中必不可少的微量元素，对于猪的骨骼生长和牙齿健康起着重要作用。

钙、磷含量的检测方法有酸溶剂法、石蜡法等。

其中，酸溶剂法是最常用的检测方法之一，通过将饲料样品与硫酸、盐酸等试剂混合反应，然后通过滴定法测定酸溶液的酸度，然后根据一定的计算公式来计算钙、磷的含量。

二、显微镜检测显微镜检测是一种常用的饲料质量检测方法之一。

通过观察饲料样品的显微结构，可以了解饲料的纤维含量、颗粒度等情况，从而判断饲料的质量。

1. 纤维含量检测纤维是饲料中的一种重要成分，对于猪的消化吸收起着重要作用。

纤维含量的检测方法有酸洗法、酶解法等。

其中，酶解法是最常用的纤维含量检测方法之一，通过利用化学方法将饲料样品中的纤维分解成可溶性和不可溶性纤维，然后通过一系列的过滤、洗涤等步骤，最后用显微镜观察并计算纤维含量。

饲料中植酸酶活性检测方法的比较与研究植酸酶是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶。

植酸酶具有特殊的空间结构，能够依次分离植酸分子中的磷，将植酸（盐）降解为肌醇和无机磷，同时释放出与植酸（盐）结合的其它营养物质。

由于植酸酶可将底物植酸钠水解，生成正磷酸和肌醇衍生物，并在酸性溶液中与钒钼酸铵生成黄色的复合物，因此，在波长 415 nm 下进行比色，可测定植酸酶活性。

目前已形成国标GB/T 18634—2009《饲用植酸酶活性的测定分光光度法》。

但是，饲料中植酸酶活性的测定却存在以下问题：①由于植酸酶在饲料中的添加量较低，现有方法不能将饲料中的植酸酶完全浸提出来；②饲料中存在大量物质可在酸性条件下与钒钼酸铵发生显色反应，干扰 415 nm 波长下的比色反应，从而影响酶活测定。

本实验旨在研究现有饲料中植酸酶测定方法的优势与缺陷，并寻找有效的检测途径。

1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器1.1.1 仪器分析天平；恒温水浴锅；分光光度计；磁力搅拌器；涡流式混合器；酸度计；离心机：转速为4 000 r/min以上；超声波溶解器；回旋式振荡器；透析袋（截留分子量 1 万、10 万和 30~100 万）；超滤离心柱（YM-30，密理博公司生产）。

1.1.2 试剂植酸酶：市售商品，酶活 5 000 U/g，酶活定义参照GB-T 18634—2009。

饲料：市售商品蛋鸡料，原配方中不含植酸酶。

磷酸二氢钾（KH2PO4）基准物。

乙酸缓冲液（1），c (CH3COONa) =0.25 mol/l：称取20.52 g 无水乙酸钠于 1 000 ml 烧杯中，加入 900 ml水搅拌溶解，用冰乙酸调节pH 值至（5.50±0.01），再转移至 1 000 ml 容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放 2 个月内有效。

乙酸缓冲液（2），c(CHCOONa) =0.25 mol/l：称取20.52 g 无水乙酸钠，0.5 g 曲拉通 X-100 （Triton X- 100），0.5 g 牛血清白蛋白（BSA）于 1 000 ml 烧杯中，加入900 ml 水搅拌溶解，用冰乙酸调节 pH 值至（5.50±0.01），再转移至 1 000 ml 容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度；室温下存放 2 个月内有效。

、酶活测定方法还原法酶与底物在特定的条件下反应,酶可以促使底物释放出还原性的基团。

在此反应体系中添加化学试剂,酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。

通过在特定的波长下比色,即可求出还原产物的含量,从而计算出酶活力的大小。

色原底物法通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合,合成人工底物。

该底物与酶发生反应后,生色基团可被释放出来,用分光光度法即可测定颜色的深浅,在与已知标准酶所做的曲线比较后,即可求出待测酶的活力。

粘度法该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶的活力。

木聚糖和β-葡聚糖溶液通常情况下可形成极高的粘度,当酶作用于粘性底物时木聚糖和β-葡聚糖会被切割成较小的分子使其粘度大为降低。

基于Poiseuille定律我们知道,只要测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度,便可计算特性粘数,并以此来判断酶的活力。

高压液相色谱法酶与其底物在特定的条件下充分反应后,在一定的色谱条件下从反应体系中提取溶液进行色谱分析,认真记录保留时间和色谱图,测量各个样的峰高和半峰高,计算出酶促反应生成物的含量,从而换算出酶活力的数值。

免疫学方法常用于酶活性分析的免疫学方法包括:免疫电泳法、免疫凝胶扩散法。

这两种方法都是根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应,通过待测酶和标准酶的比较,最终确定酶活力。

免疫学方法检侧度非常灵敏,可检侧出经过极度稀释后样品中的酶蛋白,但其缺点是不同厂家生产的酶产品需要有不同特定的抗体发生反应。

琼脂凝胶扩散法将酶作用的底物与琼脂混合熔融后,倒入培养皿中或载波片上制成琼脂平板。

用打孔器在琼脂平面上打出一个约4-5mm半径的小孔。

在点加酶样并培养24h以后,用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区,利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。

蛋白酶活力测定法本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。

1 福林法1.1 试剂及溶液: 以下试剂都为分析纯1.1.1 福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。

一、脲酶测定(比色法)1.方法原理脲酶广泛存在于土壤中，它能酶促尿素分解生成氨、二氧化碳和水。

测定脲酶的方法很多，包括比色法、扩散法、电极法等，其中比色法最为常用。

现介绍苯酚一次氯酸钠比色法，该方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚次氯酸钠作用(在碱性溶液中及在亚硝基铁氰化钠催化剂作用下)生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

2.试剂配制（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。

（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。

称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。

使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。

（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，溶液稳定。

（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。

（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。

3.操作步骤取5g风干土置于50mL三角瓶中，加1mL甲苯。

15min后加10mL10％尿素溶液和20mLpH=6.7柠檬酸盐缓冲液。

摇匀，37℃恒温箱中培养24h。

过滤，取1mL滤液注入50mL 容量瓶中，然后按配制标准曲线显色方法进行比色测定（为了消除土壤中原有的尿素而引起的误差，每一土壤需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。

）。

标准曲线配制：分别取0、l、3、5、7、9、11、13mL氮工作液，移于50mL容量瓶中，然后加蒸馏水至20mL。

再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液。

随加随摇匀。

20min 后显色，定容。

lh内在分光光度计上于波长578nm处比色。

根据吸光值与氮溶液浓度绘制标准曲线。

酶制剂的介绍 生物工程生产的微生物植酸酶，可以降解植酸盐，释放可利用的磷、钙、能量和蛋白质等，释放的磷、钙和其他养分的数量，在推荐水平下呈线性增加。植酸酶添加水平超过500FTU/kg的添加量时，养分的释放会持续提高，但单位植酸酶的释放量趋于下降。因此超推荐水平添加植酸酶，在经济上是不合算的。β-葡聚糖酶和戊聚糖酶能有效地降解饲料中某些原料所含有的β-葡聚糖和戊聚糖。这2种水溶性非淀粉多糖是抗营养因子。这些抗营养因子能结合大量的水分，使消化道流体的粘度增加。降低营养底物与消化道内源酶的作用，致使营养成分的有效性下降。β-葡聚糖酶和戊聚糖酶添加在玉米-豆粕型含抗营养因子较少的日粮中，对动物的生产性能改善作用不明显；添加在黑麦、大麦、小麦为主的日粮中和含非常规饲料原料较多的日粮中，对动物的生产性能改善作用较大。同一添加量随日粮中非常规饲料含量的增加，改善作用更趋明显；同一日粮随酶的添加量的增加，改善作用也更趋明显，但单位酶的改善作用效果下降。无论何种饲料原料，超量添加β-葡聚糖酶和戊聚糖酶经济上也都是不合算的。总之，配制最低成本日粮和计算效益时，应将酶制剂纳入配方成本计算。 单胃动物应用酶制剂效果明显，草食动物效果不明显。因此草食动物饲料中可不考虑添加酶制剂。工业酶活检测方法规定的检测温度、pH不一定是动物体内酶发挥作用的环境温度和pH。如工业用木聚糖酶活检测温度规定为50℃和pH为5.3，而动物体温为40℃左右，酶在体内起催化作用的部位－－小肠pH为6.0左右。因此，如用现行工业酶的测定方法检测饲用酶，就可能影响不同品牌饲用酶制剂酶活的横向比较。即用工业酶检测方法检测具有最大酶活的产品，不一定在畜禽消化道内具有最大酶活。 植物由于生长地域、季节、气候等的影响，生产酶制剂的产、质量都不稳定。动物产生的酶主要从屠宰牲畜的腺体中提取，来源有限；只有微生物生产的酶，可满足任何规模的需求，产率高、质量稳定。微生物酶制剂既可取代性能相同的动、植物主要酶制剂种类，又能生产出在100℃起催化作用的高 温-淀粉酶和在pH10～12起作用的洗涤剂蛋白酶等品种。20世纪40年代，微生物酶制剂工业迅速发展起来。现在酶制剂的生产是以深层发酵为主，以半固体发酵为辅，菌株产酶的能力也有很大的提高。60～70年代发展起来的固定化酶和固定化细胞技术使酶可反复使用和连续反应进行，其应用的范围也更加扩大。目前，除食品、轻纺工业外，微生物酶制剂还用于日用化学、化工、制药、饲料、造纸、建材、生物化学、临床分析等方面，成为发酵工业的重要部门。

配合饲料中酶植酸酶的加工及检测由于植酸酶使用量约占商品酶制剂用量的20%，所以有关植酸酶热稳定性的研究报道相当多（Bedford和Schulze，1998）。

之所以如此受到关注，可能是由于许多植物性的饲料原料中均含有植酸，由于植酸的存在使得磷和其他营养素难以吸收利用（Cheryan，1980；Eeckhout和dePaepe，1994；Ravindran等，1995）。

然而，单胃动物体内的内源性植酸酶缺乏活性或活性很低（Pallauf和Rimbach，1997）。

更为复杂的是，同一植酸来源的植物还含有相当数量的植酸酶，并且磷消化的营养性问题与因磷在土壤中的富积而引起的环境污染问题相互交织。

磷污染已成为集约化畜禽产区生产的限制因素。

植酸酶的来源广泛，其特性也各不相同。

Liu等（1998）综述了1998年之前的文献。

结果表明，来自细菌、真菌、酵母和植物的植酸酶的最适活性温度为45～77摄氏度，其差异高达32摄氏度。

Dvorakova等（1997）描述了从黑曲霉（Aspergillus niger）中分离到的植酸酶特性。

该植酸酶在25～65摄氏度的温度范围内具有活性，其最适温度为55摄氏度；其在60摄氏度下培养10分钟可使最初活性丧失5%，而在80摄氏度下培养10分钟可使最初活性丧失80%。

作为寻找耐热性酶类的部分工作，Wyss等（1998）对从烟曲霉（A. fumigatus）和黑曲霉（A. nige）中分离到的纯化植酸酶的热变性进行了研究。

这两种来源的植酸酶在低至55摄氏度时就会发生变性。

然而，在温度提高到90摄氏度时，来自烟曲霉（A. fumigatus）的植酸酶再次折叠成一种活性构型，但来自黑曲霉（A. nige）的植酸酶不会发生这种变化。

无疑，某些耐热性的植酸酶类在不久的将来将投入商业使用。

溶液中的酶遇热失活，并不表明饲料中的酶遇热也失活，这是因为饲料中的酶与饲料基质存在互作。

实际上，饲料原料在短时间内能够保护酶免受蒸汽或高温的破坏（Chesson，1993）。