生物人教版选修1专题2课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学课件(共19张PPT)

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(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板(píngbǎn)上 菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌株数是(涂布平板 (píngbǎn)时所用稀释液的体积为0.2 mL)____________。
(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量 ________，因为___________________________________。
理解(lǐjiě) 知识点一
第
教材新知 知识点二
1
课
部 分 (b ù fen)
专 题
2
题 (kèt
í) 2
把握热点 考向
应用创新 演练
考向一
考向二
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第二页，共35页。
第三页，共35页。
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1.测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平 板法和显微镜直接计数法。
2．稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目， 但统计结果往往比活菌数目低。
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[例1] 下表是培养分解(fēnjiě)尿素的细菌的培养基配方， 请回答下面的问题：
编号
成分
含量
①
KH2PO4
1.4 g
②
Na2HPO4
2.1 g
③
MgSO4·7H2O
0.2 g
④
葡萄糖
10
琼脂
15.0 g
将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL
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(2)实验室中目的菌株的筛选：
①原理：人为提供有利于 目的(生m长ùd(sì)hēngzhǎng)的条件
(包括营养、温度、pH等)，同时抑制菌(yì株zhì)或其他微生物的生长

5.测定细胞总氮量或总碳量
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中 的菌落数？
答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁 栏的公式进行计算。
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
富集一些。
检测：酚酞的灵敏度不
如酚红，因此建
议最好使用酚红，
否则效果不明显。
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
培养基 类型
日期 第一天 第二天
平板细菌数（土壤稀释度）
选择性培养基
（涂布接种）
（未涂布接种）
牛肉膏蛋白胨 培养基
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
本课题知识小结:
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12
两稀释度 菌数之比
1.6 2.2
-
菌落总数 个/g或个/ml
16400 38000 27100 513000
270 30500
报告方式 个/g或个/ml 16000或1.6×104 38000或3.3×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104
102
103
104
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106
107
104
105
106
107
104
105
106
107

➢统计菌落
显微镜直接计数法
这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板， 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量
每毫升原液所含细菌数 ＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数
缺点：不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数
间接计数法（活菌计数法）
原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所 形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的， 即一个菌落代表原先的一个单细胞
1966年美国微生物学家鲁克在黄石国家公园的热泉 中发现一种耐热细菌Taq；并从该细菌体内分离出了耐 高泉中温的DNA聚合酶
对微生物的筛选有何启示？ 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境 的要求，到相应的环境中去寻找。
为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？ 原因：热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数 微生物只有Taq细菌被筛选出来
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要 有说服力，对照的设置是必不可少的
知识点3．实验操作
➢土壤取样
“微生物的天然培养基” 大约70%—90%是细菌
数量最大、种类最多
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样 先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先 准备好的信封中。
注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
说明设置重复组的重要性：在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服 力与准确性。
计数原则：一般选择菌落数在30—300的平板上进行
计数（50个左右为最佳）
统计的菌落往往比活菌的实际数目低
➢设置对照
实验室中微生物的筛选原理

思考讨论
2、统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是 低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上 观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用 菌落数而不是活菌数来表示。
二、实验设计
（一）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好 的信封中。
缺点：
1mm
不能区分死菌与活菌
（二）统计菌落数目 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法
平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；
思考讨论
1、为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活 菌的数目？ 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过 统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有 多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数 在30~300的平板进行计数。
三、操作提示
（一）无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好 的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。
3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。 （二）做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 （三）规划时间
取平均值233
3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，
在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统
计结果，正确的是( D )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取
平均值238
C．涂布了三个平板，统计菌落数是21、212和256，
取平均值163