鸽新城疫(ND)蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验

畜牧兽医杂志　第２９卷　第６期　２０１０年　２７　

鸽新城疫（ＮＤ）蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验　

郭慧琳，贺奋义，杨明，陈伯祥，常亮　

（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃平凉７４４０００）　

摘要：采用鸽新城疫ＮＤ—ＧＳ　０１株毒为种毒，分别研制出了尿囊液毒蜂胶佐剂灭活疫苗和四元　

材料（鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜、羊膜）混合病毒蜂胶佐剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经　

安全性检验、急性毒性试验，免疫抗体消长水平与免疫持续期对比试验，结果表明，四元材料的疫　

苗与尿囊液疫苗性能一致。　

关键词：鸽新城疫；尿囊液蜂胶佐剂灭活苗；四元材料蜂胶佐剂灭活苗　

［中图分类号］￥８５２．４　［文献标识码］Ａ　［文章编号］　１００４－６７０４（２０１０）０６－００２７－０３　

Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　Ｐｒｏｐｏｌｉｓ　Ａｄｊｕｖａｎｔ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　

Ｖａｃｃｉｎｅ　ｏｆ　Ｐｉｇｅｏｎ　Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　

ＧＵＯ　Ｈｕｉ—ｌｉｎ，ＨＥ　Ｆｅｎ—ｙｉ，ＹＡＮＧ　Ｍｉｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｂｏ—ｘｉａｎｇ，ＣＨＡＮＧ　Ｌｉａｎｇ　（Ｇａｎｓｕ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＡｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｐｉｎｇｌｉａｎｇ　Ｇａｎｓｕ　７４４０００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　ＧＳ一０ｌ　ａｓ　ｖｉｒｕｓ　ｓｅｅｄ，ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ａｌｌａｎｔｏｉｃ　ｆｌｕｉｄ　ｐｒｏｐｏｌｉｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃ—　ｃｉｎｅ　ａｎｄ　ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋ　ｅｍｂ￣ｏ　ａｌｌａｎｔｏｉｃ　ｌｉｑｕｉｄ，ａｍｎｉｏｔｉｃ　ｆｌｕｉｄ，ｃｈｉｃｋ　ｅｍｂ￣ｏ　ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ａｎｄ　ａｍｎｉｏｔｉｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｒｏｐｏｌｉｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｓａｆｔｙ　ｔｅｓｔｓ，ａｃｕｔｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｅｓｔ，ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｈｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｉｍｍｕｎｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎ—　

ｓｉｓｔｅｎｔ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅａｓｅ；ａｌｌａｎｔｏｉｃ　ｆｌｕｉｄ　ｐｒｏｐｏｌｉｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ；ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ　ｐｒｏｐｏｌｉｓ　ａｄｊｕｖａｎｔ　ｉｎａｃ—　ｔｉＶａｔｅｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　

鸽新城疫是近年来新发现的一种由禽副粘病毒　

引起的急性、热性、高度性传染病，以腹泻和脑炎　

为主要特征。传播迅速，发病率高，可达８０％以上，　

死亡率也很高，可达９０％以上，处于孵化期的种蛋　

感染后可全部死亡。该病的发生无明显的季节性，　

但以春秋两季较多。不同日龄、不同品种的鸽均可　

感染此病，幼鸽更易感。本病主要是通过健康鸽与　

病鸽接触。经呼吸道和消化道感染。病鸽喷出的飞　

沫含有很多病毒。被病毒污染的饲料、饮水、用具、　

运动场地都可引起健康鸽感染。病毒还可以通过眼　

结膜、泄殖腔和损伤的皮肤进入鸽体内。野鸟飞禽　

是可能的传播者（在５０个鸟目中有２７个目的２５６　

种鸟可感染此病）。接触过病鸽的人和猫、狗等动　

物，可机械地带毒传播，而且人也可感染发生结膜　

炎。对人的健康和养鸽业都造成巨大的威胁。为了　

更好地预防本病的发生，我们对防制本病的蜂胶佐　

剂灭活疫苗进行了比较系统的研究。　

［收稿日期］　２０１０－０１－２６　［作者简介］　郭慧琳（１９６２一），女，甘肃天水人，本科，研究员　主要研究方向为畜禽疾病预防研究工作。　１材料和方法　

１．１病毒　

用从甘肃平凉、庆阳等发病鸽场分离，经哈尔滨兽　

医研究所鉴定纯化的ＮＤ—ＧＳ０１株毒为基础种子毒。　

１．２供试疫苗　

ＮＤ蜂胶佐剂灭活疫苗由本课题组研制。　

ＮＤ（Ｖ）含量基本一致。免疫剂量为０．５　ｍＬ／羽。　

１．３试验用鸽　

由平凉种鸽场提供的健康非免疫鸽，经ＨＩ血清　

抗体检测，均为阴性。　

１．４试验方法　

将基础种子毒用灭菌生理盐水按１：１０倍稀释，　

经尿囊腔接种９一１０日龄发育良好的鸡胚尿囊腔，　

每胚０．１　ｍＬ，石蜡封口，置３７℃温箱继续培养，选择　

４８ｈ后死亡的鸡胚，收获其尿囊液，连续盲传５代，　

当第５代鸡胚尿囊液血凝效价达７１ｏｇ２～８１ｏｇ２以　

上，做为生产种子毒。　

将生产种子毒以１：１

００倍稀释，离心，取上清　２８　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｖｏ１．２９　Ｎｏ．６　２０１０　

液，加双抗１００ｍｇ／ｍＬ，置４￣Ｃ过夜，第２天尿囊腔接　

种９～１０日龄鸡胚，每胚０．１ｍＬ，置３７℃温箱培育。　

弃去４８　ｈ内死亡胚。分别收获４８～９６　ｈ死亡鸡胚　

的尿囊液、尿囊膜、羊水、羊膜。当血凝效价达７１ｏｇ２　

～８１ｏｇ２以上时，即为制苗用生产种毒。　

１．５病毒的灭活　

将收获的鸡胚尿囊膜（包含羊膜）反复冻融后　

研磨，按１：的比例加入灭菌的生理盐水，洗涤３次，　

离心３次，取上清液加人双抗过夜。将收获的尿囊　

液、羊水分别离心，加双抗过夜。将上述病毒液混合　

后，加入终末浓度为０．１％的甲醛，３７ｃｃ灭活１６ｈ，　

为制苗抗原基础液Ｉ备用。将收获的尿囊液离心，　

加双抗过液后，加入０．１％的甲醛，３７℃灭活１６　ｈ，　

为制苗抗原基础液Ⅱ备用。　

１．６安全性检查　

将灭活的病毒原液接种非免疫９日龄鸡胚，每　

胚０．２ｍＬ，观察７　ｄ以上，鸡胚全部存活，为灭活病　

毒液通过安全性检查。　

１．７蜂胶苗的配制　

将抗原基础液Ｉ、Ⅱ分别调整到配苗所需抗原　

量，在抗原液中加入４％的灭菌Ｔｗｅｅｎ一８０，摇匀，　

成为Ｉ、Ⅱ号制苗水相，待用。　

１．８疫苗的检验　

１．８．１无菌检验。取样分别接种于普通肉汤，厌氧　

肉肝汤及营养琼脂培养基各两管，３７℃培养９６　ｈ，　

检查细菌生长情况。　

１．８．２安全性检查。每种每批疫苗选用３５　Ｅｔ龄　

健康非免疫鸽３０只，每组ｌ０只，分别注射１．０　ｍＬ、　

１．５　ｍＬ、２．０　ｍＬ。观察注射部位有无炎性反应，疫　

苗吸收情况和临床反应，观察其两周。　

１．８．３急性毒性试验。将每种疫苗以１个使用剂　

量皮下注射１日龄乳鸽１０只。另设空白对照组，同　

条件下隔离饲养，每１～２　ｄ对乳鸽称重，观察疫苗　

对乳鸽生长的影响。　１．９疫苗对比试验　

用四元材料制成的蜂胶苗（Ｉ号苗）和尿囊液　

制成的蜂胶苗（Ⅱ号苗）分别进行同剂量下免疫效　

果对比试验。每种疫苗选用５０只非免疫健康鸽，随　

机分成三组，第一组为ｌ０只，用来作疫苗同剂量抗　

体消长水平测定，第二组为３Ｏ只用来作疫苗的免疫　

持续期测定，第三组１０只为非免疫对照组。免　

疫后每隔一段时间监测一次鸽血清中的ＮＤ抗体　

效价。　

２结果　

２．１疫苗的检验　

２．１．１　无茵检验取样分别接种于普通肉汤，厌氧　

肉肝汤及营养琼脂培养基各两管，３７℃培养９６　ｈ，　

无杂菌生长。　

２．１．２安全性检验（如表１）　

表１　蜂胶佐剂灭活疫苗对鸽的安全性试验　

由表１可知，两种疫苗注射以后。临床无不良　

反应，精神食欲良好。注射局部无异常变化，可见疫　

苗是安全的。　

２．２急性毒性试验　

通过蜂胶佐剂灭活疫苗对１日龄乳鸽的急性毒　

性试验表明，均无急性毒性作用。　

２．３疫苗对比试验　

表２两种疫苗免疫抗体消长水平的测定结果　

注：对照注射０．５　ｍＬ／只生理盐水。　

表２结果表明，两种疫苗在同剂量下免疫抗体　３０　ｄ、９０　ｄ、１８０　ｄ用强毒株２００个，剂量为ＥＬＤ５０／　

消长水平基本一致。０．１　ｍＬ强毒攻击。其保护指数均为１００％。说明这　

从表３试验结果看出，无论是四元材料蜂胶佐　两种疫苗免疫原性比较好，疫苗对ＮＤ免疫保护其　

剂灭活苗，还是尿囊液蜂胶佐剂灭活苗，于免疫后　至少为６个月。

　畜牧兽医杂志　第２９卷　第６期　２０１０年　２９　

３小结与讨论　

３．１试验表明，两种疫苗注射后，试验鸽均无不良　

反应，精神食欲良好，注射局部无异常变化，安全性　

好．对１日龄乳鸽接种１个使用剂量进行急性毒性　

试验观察，不影响鸽的生长，甚至有提高的趋势。　

３．２通过四元材料混合蜂胶苗、尿囊液毒蜂胶苗　在免疫抗体消长水平和免疫持续期的对比试验，结　

果表明差异不显著。两种疫苗均在免疫后５　ｄ抗体　

效价开始上升（平均为２．９　１ｏｇ２；２．７　ｌｏｇ２），１４　ｄ达　

到峰值（平均为１１．２　ｌｃ・ｇ２；１１．４　ｌｏｇ２），６个月仍能维　

持较高的水平（平均为６．５　ｌｏｇ２；６．６　ｌｏｇ２）。从而证　

实了四元材料混合蜂胶苗于尿囊液毒蜂胶苗在性能　

ｌｚ是一致的。　

・来稿摘登・　

猪出血性大肠杆菌病的治疗技术　

近年来常发生一种生猪以严重拉稀为症状的疾　

病，由于耐药菌株的产生，使用常规治疗方法无效，其　发病率和死亡率都很高，给养猪户造成重大经济损失。　

１病原　

本病是由出血性大肠杆菌引起的以拉稀症状为　主的一种传染病。　

２流行情况　

本病常发生在体重１０～２０　ｋｇ的仔猪，最小日　龄为１４　ｄ的断乳仔猪，最大日龄为４５日龄，发病无　

季节差别，其主要特点为突然发病，高度传染性和致　

死性，一窝猪中只要有一头发病，其它的猪都有可能　相继发病，甚至有的整窝死亡。　

３　出血性大肠杆菌病的症状、病理剖检变化　

本病表现为猪突然发病，食欲减少或停止，体温　

一般正常。主要症状为严重拉稀，病猪有强烈的口　

渴感，饮水量明显大于正常猪，粪便呈灰色的浆状，　发粘带有腥臭味，随着病程的增加，粪便开始带血，　

最早的在发病后４８　ｈ发生死亡，一般在发病后７～８　

ｄ发生死亡。　

剖检变化：主要表现为胃肠道粘膜出血，个别严　

重病例出血一直延续到直肠末端近肛门处。少数病　例见有肠系膜淋巴结坏死，其它脏器未见明显变化。　４治疗措施　

４．１对发病猪及同窝猪采取停止喂食２～３顿，在停　食期间饮５％白糖生理盐水（大半脸盆水加三两白糖　

少许食盐），饮糖盐水不限量。开食时喂１—２　ｄ米粥　

（不喂高蛋白饲料），有利病猪康复，以后逐步转入正　常饲喂。对食欲停止重病猪可采用复腔注射５％葡　

萄糖生理盐水，视猪只大小每头可注射５０～１００　ｍＬ。　４．２　对重病已食欲停止的患猪可采用腹腔注射　

１０％增效磺胺一５一甲氧嘧啶（或一６一甲氧嘧啶），　ｌ０　ｋｇ猪４～５　ｍＬ；２０　ｋｇ猪７～８　ｍＬ。同时肌肉注射　

维生素Ｂ１２１　ｍＬ，每天１次，连用３　ｄ。　４．３对能饮水的病猪可采用口服的方法治疗。处　

方：对体重１０　ｋｇ的猪，食母生１０片（５ｇ）、小苏打片　

１０片（５ｇ）、硫酸链霉素１　双氢克尿噻１片、复方维　生素Ｂ液１０　ｍＬ（约２汤匙），每天２次，连服３—４　

ｄ。混于糖盐水或米粥中饲喂。对２Ｏ　ｋｇ的猪，食母　生和小苏打用量加倍，其它药物不加量。