免疫佐剂

山东畜牧兽医2016年第37卷兽用免疫佐剂浅谈李宁王应玉（山东省威海市文登区张家产畜牧兽医工作站 264407）王亮（山东省威海市文登区畜牧兽医局）中图分类号：S851.33 文献标识码：C 文章编号：1007-1733(2016)11-0048-02免疫佐剂具有增强免疫效应的作用，与疫苗配合使用，延长免疫时间，减少免疫次数，提高免疫效果，在畜牧生产上有重要意义。

1 油乳佐剂油乳佐剂是用矿物油、乳化剂(如span-80，Tween-80)及稳定剂(如硬脂酸铝)、水按一定比例混合制备而成。

有油包水型(W/O)和水包油型(O/W)。

油乳佐剂作为储存库，抗原被包藏其中，注射体内后起到缓释作用，免疫持久。

油乳佐剂在灭活疫苗生产中用广泛。

1.1 弗氏佐剂分为弗氏不完全佐剂(FIA)和弗氏完全佐剂(FCA)。

弗氏不完全佐剂(FIA)是将矿物油(石蜡油)和乳化剂(羊毛脂、Tween-80)混合制成油包水型(W/O)佐剂，弗氏完全佐剂(FCA)是在弗氏不完全佐剂(FIA)的基础上加入灭活的分枝杆菌或卡介苗。

1.2 其它油乳佐剂 除了FCA和FIA，基于矿物油的佐剂还有白油Span佐剂、Specol佐剂、MontanideISA50、ISA 206等。

除了矿物油，其他油脂也可以制成油乳佐剂，比较常用的有植物油(如花生油)、角鲨烯和角鲨烷等。

2 矿物质类佐剂矿物质佐剂属于传统佐剂之一，主要指铝盐和钙盐佐剂，包括氢氧化铝胶、硫酸铝钾胶、磷酸铝、磷酸钙等，矿物质类佐剂能吸附和沉淀抗原，与抗原形成复合物，形成凝胶状态，注入动物体内后形成抗原储存库，缓慢释放抗原，较长时间刺激免疫系统，主要增强机体的体液免疫应答。

铝盐佐剂已有70多年的应用历史，在人用生物制品广泛应用。

3 微生物佐剂某些微生物菌体、组分、代谢产物能够活化免疫细胞，加强免疫效应，对特异性和非特异性免疫都有明显的增强作用。

3.1 微生物菌体 分枝杆菌、乳酸菌类、短小棒状杆菌、葡萄球菌、链球菌、百日咳杆菌。

中药免疫佐剂研究进展摘要：免疫佐剂能够增强机体对抗原的免疫应答反应，对提升疫苗的作用效果具有重要意义。

传统疫苗和新型疫苗在研究和实践中暴露的问题推动了免疫佐剂的研究 ,中草药及其提取物具有免疫佐剂的活性,并且以其毒副作用小、价格相对低廉有望成为未来临床应用的较佳选择，应用前景广阔。

本文综述了中药提取物、单味中药、复方中药作为免疫佐剂的研究进展, 以期增加对中药免疫佐剂及其作用机制的认识，以期加强对中药免疫佐剂作用机制的研究，提高疫苗的安全性和有效性。

关键词：中药；佐剂；免疫机理某些物质若先于抗原或与抗原一起注入人体，能非特异地增强抗原的免疫原性和机体对该抗原的特异性免疫应答，或改变免疫应答类型，此类物质称为佐剂[1]。

佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已有近百年的历史，它具有延长抗原的作用时间、增加抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬、刺激吞噬细胞对抗原的处理、增强辅助T细胞的作用、刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体、提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变等作用，特别对老年及儿童等免疫力低下人群意义重大。

中药是我国的宝贵资源，与合成药物相比，具有多效、双向调节性、不良反应少、毒副作用小和无依赖性的特点[2]。

随着中药免疫药理学研究，发现了许多免疫活性成分,包括多糖类、皂甙类、黄酮类、有机酸类、多酚类和萜类等,这些免疫活性成分具有免疫调节、抗菌抗炎、抗感染、降血糖等多种生物作用。

1佐剂种类、作用机制佐剂自应用以来，在来源、组成与类别上不断增加，对多种传染病的预防接种起到了至关重要的作用。

目前应用较为广泛的佐剂有铝盐佐剂、油乳佐剂、弗氏佐剂、细胞因子类佐剂、表面活性佐剂等，但这些佐剂具有安全、廉价、免疫性强等优点的同时又存在着一定的局限性，如细胞因子是目前研究最热门最有应用前景的核酸疫苗佐剂，具有多效性、多源性、高效性、快速反应性等特点，但目前应用于临床的细胞因子类佐剂较少，表面活性类佐剂无毒性、无免疫原性，可在体内降解，不引起组织损伤，但稳定性较差，作为表面活性类佐剂中的一种，脂质体在制备过程中要求有一定的技术性，并且费用比其它免疫佐剂高。

新型佐剂的主要种类
新型佐剂是指用于增强疫苗免疫效果的辅助物质。

目前主要的新型佐剂种类包括以下几种：
1. 脂质体佐剂：脂质体是一种由脂质构成的微小颗粒，可以帮助将疫苗有效成分包裹在内，并提高疫苗在体内的稳定性和抗原递呈性，进而增强免疫反应。

2. 病毒样颗粒佐剂：通过将无活性病毒颗粒添加到疫苗中作为佐剂，可以模拟真实病毒感染的情况，进一步激活免疫系统，提高疫苗的免疫效果。

3. 蛋白质亚单位佐剂：将疫苗中的抗原蛋白分离出来，作为佐剂单独使用，可通过激活特定的免疫反应途径来增强疫苗的免疫效果。

4. 结合佐剂：将多种佐剂组合使用，可以通过不同途径和机制增强疫苗的免疫效果，例如脂质体与病毒样颗粒的结合。

这些新型佐剂的研究和应用，旨在提高疫苗的免疫效力和稳定性，进一步加强人类对疾病的防控能力。

但需要指出的是，具体使用哪种佐剂取决于疫苗类型、目标免疫群体和疾病特征等因素，并需要经过严格的临床试验和监管审批。

佐剂概念佐剂（Adjuvant）是指能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质，应用时可与抗原同时或预先注射与机体。

佐剂本身可以有免疫原性，也可以没有免疫原性。

良好佐剂的条件1)增加抗原的表面积，并改变抗原的活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性。

2)佐剂与抗原混合能延长抗原在局部组织的存留时间，减低抗原的分解速度，使抗原缓慢释放至淋巴系统中，持续刺激机体产生高滴度的抗体。

3)佐剂可以直接或间接激活免疫活性细胞并使之增生，从而增强了体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。

4)良好的佐剂应具有无毒性或副作用低的特点。

佐剂的种类佐剂一般包括以下几类：1)无机佐剂：如氢氧化铝、明矾等2)生物性佐剂：如结核分枝杆菌、卡介苗、小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰阴性杆菌内毒素、霍乱毒素的B亚单位、胞壁酰二肽和细胞因子等3)人工合成佐剂：如双链多聚肌甘酸：胞苷酸（Poly I:C）、双链多聚腺苷酸：尿苷酸（PolyA:U）4)油机：如弗氏完全佐剂、花生油乳剂等5)纳米佐剂佐剂的两大类一种本身具有免疫原性，如百日咳杆菌、抗酸杆菌（结核分枝杆菌）以及革兰阴性杆菌等另一种本身无免疫原性，如氢氧化铝、磷酸钙、矿物油乳剂、表面活性剂等。

目前应用最多的是弗氏佐剂（Freund Adjuvant）弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。

不完全弗氏佐剂是液体石蜡和羊毛脂混合而成，组分比为1~5:1，可根据需要而定，通常为2:1将加卡介苗或死的结核分枝杆菌加入不完全佐剂中（最终浓度为2~20mg/ml），即为完全弗氏佐剂。

弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂的成分成分完全佐剂不完全佐剂石蜡油6份+ +无水羊毛脂+ +杀死的分枝杆菌3-5mg + -磷酸缓冲溶液10份+ +操作演示在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。

佐剂和抗原体积比为1:1。

佐剂与抗原乳化方法1)研磨法2)注射器混合法（操作）佐剂的免疫生物学作用1)增强抗原免疫原性：使无或微弱免疫原性的物质变成持久或强的免疫原，延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，佐剂可延长抗原在体内滞留时间，避免频繁注射，有利于高亲和力抗体的产生。

佐剂安全性和免疫效果评估
佐剂的安全性和免疫效果评估是用来评估佐剂在疫苗接种过程中或单独使用时的安全性和免疫效果的方法和指标。

安全性评估主要包括以下内容：
1. 毒理学评估：评估佐剂对动物或体外细胞的毒性和致畸作用。

2. 安全性试验：对于佐剂进行临床试验，评估佐剂对人体安全性的影响。

3. 免疫原性评估：评估佐剂对免疫系统的刺激作用，是否会导致过敏反应或免疫异常。

免疫效果评估主要包括以下内容：
1. 免疫原性评估：评估佐剂对疫苗免疫原性的影响，例如是否增强抗原的免疫原性、提高抗体水平、激活免疫细胞等。

2. 免疫保护效果评估：评估佐剂对疫苗保护效果的影响，例如是否提高疫苗免疫保护率、延长疫苗免疫效果持续时间等。

3. 免疫记忆效果评估：评估佐剂对疫苗免疫记忆效果的影响，例如是否提高疫苗的免疫记忆能力。

这些评估方法和指标可以通过动物实验、体外实验和临床试验等途径进行评估。

评估结果可以帮助科学家和医药研发机构判断佐剂的安全性和免疫效果，并作为疫苗研发和临床应用的参考依据。

74兽医常用免疫佐剂的研究概况与发展趋势杜娟(天津市动物园300000)摘要:免疫佐剂是指可调节免疫系统的药剂,可通过非特异性方式,改变或强化集体的特异性免疫应答,是兽用疫苗研究领域的热点。

基于此,文章以兽医常用免疫佐剂为研究对象,分析其研究现状与未来发展趋势,深化对免疫佐剂的认识,推动免疫佐剂的进一步发展。

关键词:免疫佐剂;油乳剂;兽医临床基于免疫佐剂在免疫系统中的独特作用,相关研究不断深入,免疫佐剂的类型逐渐增多。

在兽医临床实践中,免疫佐剂的合理选择是保障免疫佐剂作用发挥的关键。

就此,关于多种免疫佐剂的研究状况分析,可在丰富学术界研究的同时,为兽医临床实践提供指导,兼备理论与实践意义。

1兽医常用免疫佐剂的研究概况1.1油乳剂研究状况油乳剂在兽医临床中应用广泛,具有强化抗原免疫原性、延长抗原刺激时间、提升免疫应答水平等作用。

常见的油乳剂包括FCA和FIA等矿物油佐剂、角鲨烷和植物油等非矿油制成的佐剂。

第一,矿油佐剂。

矿油佐剂中最常见的为FCA和FIA,大量研究表明,在免疫佐剂中,FCA的活性较强。

骆东将小鼠为实验对象,对其注射FCA,发现FCA具有致癌作用。

为降低FCA毒性,研究学者向FCA原料中添加分枝杆菌片段,如MDP、蜡质D 等,生成FIA,在保障活性的基础上,减少毒性带来的副作用,拓展矿油佐剂在兽医临床的应用。

在兽医生物制品中,将轻质矿物油白油和Span混合而成的白油Span佐剂,使用较为广泛。

第二,非矿油佐剂。

Woodhour将佐剂-65为研究对象,该矿油佐剂原料为花生油、Arlacel A及单硬脂酸铝。

学生使用佐剂-65进行长期动物实验,发现只有注射部位出现反应,动物并未出现病变或突变。

通过对比试验,Woodhour认为佐剂-65的活性偏低,不如FA。

1.2非油乳剂研究状况第一,铝盐佐剂,在兽用疫苗和人用疫苗中应用广泛,具有诱导体液免疫应答的作用,可提升抗体水平,且安全性较高,无毒性。

佐剂的研究进展“Adjuvant”,即佐剂,最早来源于希腊语“adjuvare”,也就是帮助的意思[1]。

随着DNA重组疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗不断涌现,免疫佐剂研究越来越受到人们的关注.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识.佐剂的概念及发展简史佐剂（Adjuvants）是先于抗原或与抗原同时应用，能非特异性地改变或增强机体对抗原的特异性免疫应答，能增强相应抗原的免疫原性或改变免疫反应类型，而本身并无抗原性的物质，又称免疫佐剂或抗原佐剂。

佐剂被用来增强疫苗的免疫反应已有近80年的历史，1925年，法国兽医免疫学家Ranmon发现疫苗中某些物质的佐剂作用，1926年Glenny证明明矾具有佐剂作用，1951年Freund研制成弗氏佐剂。

目前我国对蜂胶佐剂、油乳佐剂、核酸佐剂、细胞因子佐剂等新型佐剂的研究也有迅速发展。

1免疫佐剂的功能佐剂可选择性地改变免疫应答的类型，产生体液和\或细胞免疫。

如：弗氏完全佐剂（FCA）是细胞免疫的强刺激剂，也能刺激体液免疫；弗氏不完全佐剂（FIA）仅能刺激体液免疫。

改变体液抗体的种类IgG 亚类和抗体的亲和性，如壳聚糖、氧化甘露聚糖。

佐剂还可改变抗原的构型，使疫苗诱导T辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞(CHL)反应。

如免疫刺激复合物。

佐剂可改变免疫反应为MHCⅠ型或MHCⅡ型。

如：白细胞介素4（IL-4）能上调MHCⅠ类抗原,IL-1可诱导MHCⅡ类反应。

佐剂还能改变T辅助细胞(Th1和Th2)的免疫反应。

FCA可诱导Th1型细胞因子，IL-18、IL-12也可强烈诱导Th1型细胞因子产生;FIA则是典型的只诱导Th2型细胞因子。

2免疫佐剂的分类目前,经动物实验证实有佐剂作用的物质多达百种以上,按佐剂作用可将其分为2类:①贮存型佐剂,即能以吸附成其他方式粘着抗原物质,注入机体后,可使抗原存留在一定的接种部位,并逐渐往周围释放,以延长抗原的作用时间,如铝佐剂。

核酸疫苗的免疫学原理及植物多糖作为核酸疫苗佐剂的可行性分析核酸疫苗不仅引起体液免疫反应,而且诱导高水平的细胞免疫应答, 尤其是细胞免疫T淋巴细胞反应,被认为在病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。

核酸疫苗作为近年来发展起来的一项新的生物技术, 已经成为疫苗研究领域的热点之一, 并获得了迅速的发展。

实验结果表明,核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗, 也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。

通过介绍近年来核酸疫苗在病毒、细菌、寄生虫等感染性疾病的预防和治疗等领域的研究进展情况, 表明随着分子生物技术的不断发展, 核酸疫苗的进一步研究和实践为改善人类和动物健康显示出新的希望。

而本文将从核酸疫苗的免疫学原理以及植物多糖作为核酸疫苗佐剂的可行性分析两个方面对核酸疫苗的简单情况及应用进行介绍。

一、核酸疫苗的免疫学原理核酸疫苗又称基因疫苗或 DNA 疫苗,包括DNA 疫苗和 RNA 疫苗, 是指把外源基因克隆到真核质粒表达载体上, 然后将重组的质粒 DNA 直接注射到动物体内, 使外源基因通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白, 激活机体的免疫系统, 引发免疫反应。

核酸疫苗由外源抗原编码基因和作为真核表达载体的质粒构成。

表达载体依靠特有的病毒启动子外源基因在动物细胞内高水平表达。

通常认为,DNA 疫苗进入真核细胞, 仅有少量被细胞所摄取,其中少量进入细胞核后, 在载体上的启动子调控下, 转录出抗原基因 mRNA。

后者进入胞浆而转译出相应的抗原蛋白[9]。

抗原呈几种方式呈递到免疫系统: (1)细胞内经加工后与 MHCI 分子结合呈递到细胞表面, 刺激细胞毒性 T 淋巴细胞;(2)细胞中释放出来与 B 细胞受体结合, 刺激 B 细胞;(3)放出的蛋白质被抗原呈递细胞所吸收、降解, 然后与 MHCII 分子结合后刺激辅助性 T 细胞。

最终引发了免疫系统的响应。

免疫系统的响应程度与不同的免疫部位、细胞的表达程度和是否增加免疫调节基因有关。

疫苗佐剂成分疫苗佐剂是指将疫苗中的抗原与其他物质混合，以增强疫苗的免疫原性和稳定性的一种辅助剂。

疫苗佐剂的成分包括了多种物质，下面将逐一进行介绍。

1. 铝盐类佐剂铝盐类佐剂是最常见的疫苗佐剂之一，其主要成分是铝盐，如氢氧化铝、磷酸铝等。

铝盐类佐剂可以增强疫苗的免疫原性，促使免疫细胞对抗原的吸收和处理，从而增强免疫效果。

此外，铝盐还可以增加疫苗的稳定性和保存期限。

2. 油水佐剂油水佐剂是一种将油和水混合的佐剂，常用的油包水佐剂有弗洛姆油（Freund's adjuvant）和水合铝氢氧化石蜡（alum-precipitated water-in-oil emulsion）。

油水佐剂能够增强疫苗免疫原性，通过形成油滴微粒，延长抗原在注射部位的滞留时间，从而刺激更强的免疫反应。

3. 糖佐剂糖佐剂是指将疫苗抗原与糖类物质混合的佐剂。

糖佐剂可以增强免疫反应，促进抗原与免疫细胞的相互作用，从而提高疫苗的免疫效果。

常用的糖佐剂有牛黄、蔗糖等。

4. 脂质佐剂脂质佐剂是一种将脂质类物质与疫苗抗原混合的佐剂。

脂质佐剂可以增强疫苗的免疫原性，通过与免疫细胞相互作用，促进抗原的摄取和处理，从而增强免疫反应。

常见的脂质佐剂有磷脂体、脂质体等。

5. 蛋白质佐剂蛋白质佐剂是将蛋白质与疫苗抗原混合的一种佐剂。

蛋白质佐剂可以增强疫苗的免疫原性，通过与免疫细胞相互作用，促进抗原的摄取和处理，从而增强免疫反应。

常见的蛋白质佐剂有牛血清白蛋白、鸡蛋清蛋白等。

6. 多糖佐剂多糖佐剂是将多糖类物质与疫苗抗原混合的一种佐剂。

多糖佐剂可以增强疫苗的免疫原性，通过与免疫细胞相互作用，促进抗原的摄取和处理，从而增强免疫反应。

常见的多糖佐剂有海藻酸盐、聚谷氨酸等。

7. 细胞佐剂细胞佐剂是将免疫细胞与疫苗抗原混合的一种佐剂。

细胞佐剂可以增强疫苗的免疫原性，通过免疫细胞的摄取和处理，刺激更强的免疫反应。

常见的细胞佐剂有树脂颗粒、硅胶微球等。

总结起来，疫苗佐剂的成分多种多样，包括铝盐类佐剂、油水佐剂、糖佐剂、脂质佐剂、蛋白质佐剂、多糖佐剂和细胞佐剂等。

QuickAntibody系列免疫佐剂使用说明规格：1ml保存温度：2~8ºC产品描述QuickAntibody系列免疫佐剂包括四种具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂，分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体以及兔子多克隆抗体，与常规使用的弗氏佐剂相比，具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等多方面优点。

重要提示1、QuickAntibody只需两针免疫，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。

2、QuickAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量，从而可大大节省总抗原用量。

推荐使用的抗原用量为（1）免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5~50μg（通常为小鼠5~20μg，兔子20~50μg）；（2）免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1~10μg（通常为小鼠1~5μg，兔子5~10μg）。

3、QuickAntibody抗体产生快，抗体滴度高，抗体亲合力高，无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备，标准免疫程序只需要在三周内进行两针免疫，通常在第五周即可获得ELISA滴度（Cutoff值为0.1000）高达1:10000~1:10000000的高亲合力抗体水平。

4、QuickAntibody不破坏抗原天然构象，从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体，这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

5、QuickAntibody是一类水溶性佐剂，使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程，抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。

6、QuickAntibody使用肌肉免疫途径，与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫或脾内免疫相比，极大地方便了使用。

7、QuickAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。

常规多克隆抗体制备多使用兔子，不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢，而且由于技术要求较高而往往需要委托专门单位制备。

免疫佐剂研究进展摘要：随着疫苗研究的飞速发展，如重组DNA疫苗、合成肽段疫苗等，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注。

佐剂可以导致快速而强烈的免疫反应。

分析了常用佐剂的应用及其各自的优缺点，并综述了两种新型的免疫佐剂的研究进展。

关键词：免疫；佐剂；疫苗早在70年前，免疫佐剂就被广泛地应用于生产和研究。

佐剂与特异性免疫原本无关，但可非特异性地通过物理的或化学的方式与特异性免疫反应物质结合，从而诱发机体产生长期、高效的特异性免疫反应，提高机体保护能力，同时能减少抗原的用量，节约成本。

随着疫苗研究的不断深入，特别是分子生物学技术的迅速发展，研制出的新型基因工程疫苗纯度高、特异性强，但分子小，免疫原性相对较差，难以产生有效的免疫应答，需要佐剂来增强其免疫原性或宿主对抗原的保护性应答。

本文就常用佐剂以及最近深入研究、比较的两种免疫佐剂的研究进展进行了综述。

1 常用免疫佐剂1.1 铝盐佐剂铝盐是一种含有Al3+的无机盐，主要有Al(OH)3、AlPO4等。

铝盐佐剂的应用非常广泛，是现在唯一被FDA批准的人、兽均可应用的佐剂。

铝盐与抗原结合形成抗原贮存库，使抗原得以缓慢稳定地释放。

铝盐的应用已有八十年的历史，实践证明是一种有效的诱导免疫反应的佐剂，而且氢氧化铝成本低廉，使用方便、无毒，是胞外繁殖的细菌及寄生虫抗原的良好免疫佐剂。

但它也存在明显的缺陷，主要的不足之处是铝盐佐剂仅能诱导、激发体液免疫，对由胞内病毒如人免疫缺陷病毒(HIV)、丙型肝炎病毒(HCV)、单纯疱疹病毒(HSV)等引起的病毒性疾病无法产生有效的细胞免疫[1]。

1.2 氟氏佐剂氟氏佐剂分为氟氏完全佐剂(FCA)和氟氏不完全佐剂(FIA)两种。

FCA是在FIA的基础上加一定量灭活的分枝杆菌而成的，是Th1亚型细胞强有力的激活剂。

FCA既能刺激体液免疫，还是细胞免疫的强刺激剂。

FIA则仅刺激体液免疫。

但弗氏佐剂在使用中可引起慢性肉芽肿和经久不愈的溃疡，造成严重的组织损伤。