食品实习报告
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第 1 页 共 1 页 食源微生物危害实验室观摩 6月24日上午,我们在N8418进行了本次实习动员大会,之后,我们跟随席老师来到她的实验室,进行了食源微生物危害的实验室观摩。 实习过程中老师主要给我们展示并操作了这几个主要仪器并对它们的检测原理进行了详细的讲解,分别是实时定量PCR、脉冲场电泳原理、凝胶成像系统、电穿孔仪、酶标仪和核酸蛋白测定仪、紫外分光光度计的原理。 在实习过程中,我学到了PCR技术原理,PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至 93℃ 左右一定时间后,使模板 DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至 55℃ 左右,引物与模板 DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复循环变性——退火——延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”。 接着,老师又给我们讲解了脉冲场电泳的原理。脉冲场凝胶电泳与常规电泳的不同之处在于,常规的电泳采用的是单一的均匀电场, DNA分子经凝胶的分子筛作用由负极移向正极。而脉冲场凝胶电泳采用了两个交变电场,即两个电场交替地开启和关闭,使DNA分子的电泳方向交替改变,使得DNA分子在“爬行”过程中,因为电场方向的变化,DNA分子以一种扭曲的状态运动,达到分离的目的。 其次老师讲了凝胶成像系统的原理,该系统包括了密封暗箱,摄像头,白光和UV 光源,带琥珀型滤片的滤片环,UV 保护档板。它还包括了从图象采集到分析打印一体的Quantity One® 1-D 分析软件,以及无安装数量限制的QuantityOne® Basic 软件。 最后,老师讲解了电穿孔仪的原理,电穿孔技术是一种有效地将外源分子导入多种细胞的方法。通过一个高强度的电场作用,瞬时提高细胞膜的通透性,周围介质中的外源分子可被吸收。这种技术可以用来向原核和真核细胞内导入核苷酸、DNA、RNA、蛋白质、糖类、染料和病毒颗粒。与其他的物理学、化学和病毒方法比较,电穿孔是一种更为有效的方法。 最后,老师又向大家讲解了一些实验室的注意事项等。听完老师的讲解后,相信我在今后的实验中会少犯一些错误,更好的进行实验。 第 2 页 共 2 页
酱油中铵盐的测定 1. 原理 铵盐在弱碱性溶液中加热蒸馏,使氨游离蒸出,被硼酸溶液吸收,然后用盐酸标准溶液滴定,计算出铵盐的含量。 2. 试剂 (1)氧化镁 (2)2%硼酸 (3)混合指示剂0.2%甲基红乙醇溶液1份与0.2%溴甲酚绿乙醇溶液5份混合 (4)0.05M盐酸标准溶液 3. 仪器 250ml蒸馏装置 4. 操作方法 准确量取酱油2ml,置于250ml蒸馏瓶中,加水约110-120ml,氧化镁约1克。接好蒸馏装置,并使冷凝管尖端插入接受瓶内的液面以下,瓶内预先放有2%硼酸溶液10ml及混合指示剂3滴,加热蒸馏。 收集馏出溶液约100ml,用少量水洗涤冷凝管尖端,停止蒸馏,用0.05M盐酸标准溶液滴定至灰红色为止。记录0.05M盐酸液的毫升数。 5. 计算
V× N×0.017 铵盐(以氨计%)= ×100 W
式中 V—滴定样液消耗盐酸标准液的量(mL)
N—盐酸标准液的浓度(mol/L) W—样品重量(克) 0.017—1mol/L盐酸标准溶液1ml相当的氨量 6.结果 式中N=0.05mol/L ,W=2ml。空白实验中V=0.2mL.按照以上公式计算得出下表: 酱油编号 名称 氨基酸态氮含量(g/100ml) 等级 V(mL) 铵盐含量(%) 1 加加面条鲜酱油 ≥0.7 一级 4.15 0.167900 第 3 页 共 3 页
2 加加红烧酱油 ≥0.4 三级 2.32 0.090100 3 加加草菇老抽 ≥0.7 一级 3.20 0.127500 4 加加珍鲜老抽 ≥0.55 二级 2.55 0.099875 5 加加特制酱油 ≥0.7 一级 3.50 0.140250 6 加加烹调酱油 ≥0.4 三级 1.84 0.069700 7 加加老抽王酱油 ≥0.4 三级 2.29 0.088825
8 海天儿童酱油(铁强化) ≥0.8 一级 5.49 0.022483
9 海天铁强化草菇老抽 ≥0.7 一级 5.38 0.221050 35 李锦记锦珍生抽 ≥0.40 一级 4.23 0.175525 36 李锦记草菇老抽 ≥0.70 三级 2.93 0.116025
建模数据如下: Calibration Results Table - 铵盐 Index Spectrum Title Actual Calculated Diff. x Path
1 1-1-b 0.1679 0.1686 0.0007 2 1-2-a 0.0901 0.089 -0.0011 3 1-3-b 0.1275 0.1263 -0.0012 4 1-4-b 0.0999 0.0998 -0.0001 5 1-5-b 0.1403 0.1389 -0.0013 6 1-6-b 0.0697 0.0682 -0.0015 7 1-7-b 0.0888 0.0882 -0.0006 8 1-8-b 0.0225 0.0238 0.0013 9 1-9-b 0.2211 0.2271 0.0061 35 1-35-b 0.1755 0.1743 -0.0013 36 1-36-b 0.116 0.1157 -0.0004 第 4 页 共 4 页
与安2相比较:y = 0.3159x + 0.104,R2 = 0.1878 与安3相比较:y = 0.4125x + 0.0801,R2 = 0.2632 与安4相比较:y = 0.0094x + 0.1448,R2 = 0.0001 由上图可知,四个班之间的数据差距较大,存在一定的差异,由于各个班的滴定终点的判断不同,做实验的时间也不相同,同时还存在一定的系统误差,所以产生较大的误差。 7.总结与分析 本次实验是这次实习中我们做的第一个实验,酱油中铵盐的测定,一进实验室,我就看到了实验台上摆满了酱油,我们组的实验台上是一到九组,多是加加品牌的,也有海天的,后来又分了35和36两个,都是李锦记的酱油。 本次实验是利用蒸馏的方法,使氨游离蒸出,被硼酸溶液吸收,然后用盐酸标准溶液滴定,根据消耗的盐酸的量来计算铵盐的含量,检测其是否符合标准。其实铵盐是酱油中不好的指标,总氨基肽氮的含量要小于等于30%。实验中利用的是比较简单的蒸馏,只是接收瓶要先加入硼酸和指示剂,显酒红色,并且装置中冷凝管尖端插入接受瓶内的液面以下,因为氮是以氨气的形式蒸馏出来的,如果不在液面以下,就不能完全的被吸收液吸收,造成结果偏小。 实验最终得出的数据经计算处理后,是比较合理的,再结合总酸含量和氨基氮的含量进行比较,是在安全限量允许范围内的。 在实验过程中,我们组的仪器里的冷凝管的倾斜度比较小,接收瓶放置不在升降台上,只有把接收瓶卡住才能使冷凝管尖端插入接受瓶内的液面以下,仪器
本班与其他班铵盐含量实测值的比较00.050.10.150.20.250.30.35
00.10.20.30.4本班值
其他班安2数据安3数据安4数据线性 (安2数据)线性 (安3数据)线性 (安4数据) 第 5 页 共 5 页
放置的很危险,一旦失去平衡接收瓶就会倒了,所以要一直看着仪器,以免仪器失去平衡。进行滴定的时候也要特别小心,注意颜色的变化,颜色是从蓝色变为暗红色,很容易滴过,所以要仔细的滴定,不能走神,边滴边摇。这次的实验不仅让我更加熟悉了蒸馏和滴定的操作,也让我掌握了测定酱油中铵盐的方法,这将更利于我今后的学习和实习。 第 6 页 共 6 页 酱油中总酸的测定及氨基氮的测定 一、酱油总酸的测定 1.原理 用标准氢氧化钠溶液滴定酱油中多种有机酸,从其消耗量计算出酸度,以乳酸来表示其含量反应如下: RCOOH+NaOH→RCOONa+H2O 用酚酞作指示剂,滴定至溶液呈现浅红色,30s不褪色为终点。根据所消耗标准碱溶液的浓度和体积,计算样品中酸的质量分数(%)。 2.试剂 (1)1%酚酞乙醇溶液 (2)0.05mol/L氢氧化钠标准溶液 3.操作方法 准确称取酱油样品5ml ,置于100ml烧杯中,加入50ml水用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至pH=8.2,记录所消耗氢氧化钠的毫升数。另取水50ml做空白滴定。 酱油总酸
式中 C—氢氧化钠标准溶液浓度(mol/L) V1—滴定样品耗用氢氧化钠的量 V0 滴定空白耗用氢氧化钠的量(mL) V样—样品测定时的+取用量(ml) K—换算为适当酸的系数。乳酸0.090
二、甲醛滴定法测定氨基氮含量 1.原理 氨基酸含有酸性的COOH基,也含有碱性的NH2基,它们相互作用使氨基酸成为中性的内盐,不能直接用碱液滴定它的羧基。当加入甲醛时,NH3基与甲醛结合,其碱性消失,使COOH基显示出酸性,可用氢氧化钠标准溶液滴定—NH+3
基上的H+,从而求出氨基氮含量。
2.试剂 (1)1%酚酞乙醇溶液 (2)0.05mol/L氢氧化钠标准溶液
100100/01样VKVVCmLg