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斑点叉尾鮰病毒（CCV）结构蛋白的鉴定摘要：采用蔗糖密度梯度离心法分离纯化斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus，CCV），利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱（ESI-Q-TOF MS/MS）对得到的样品进行分析。
结果共鉴定了13种结构蛋白，包含1种未报道过的结构蛋白ORF22。
实验结果为进一步研究CCV结构蛋白的功能及蛋白质组学提供了参考。
关键词：斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus，CCV）；结构蛋白；蔗糖密度梯度离心；质谱Abstract：Channel catfish virus （CCV）in channel catfish ovary cells were purified through sucrose density gradient centrifugation，and then analyzed using the ESI-Q-TOF mass spectrometry technique. Totally，13 structural proteins were identified，including a novel structural protein ORF22. This study provided a good reference to further study the function of structural proteins and proteomics of the CCV.Key words：channel catfish virus（CCV）；structural proteins；sucrose density gradient centrifugation；mass spectrometry随着我国斑点叉尾鯝养殖业的不断发展，其病害也日趋严重，已成为制约鯝鱼养殖业发展的主要因素[1]。
斑点叉尾鯝病毒病（Channel catfish virus disease，CCVD）具有传染快、死亡率高等特点，其病原为斑点叉尾鯝病毒（Channel catfish virus，CCV），主要感染鱼苗和鱼种。
病毒的主要化学成分是这些
——病毒的主要化学成分是什么之详解最简单的病毒中心是核酸(DNA或RNA)，外面包被着1层有规律地排列的蛋白亚单位，称为衣壳。
构成衣壳的形态亚单位称为壳粒，由核酸和衣壳蛋白所构成的粒子称为核衣壳。
较复杂的病毒外边还有由脂质和糖蛋白构成包膜。
核壳按壳粒的排列方式不同而分为3种模式:二十面体对称，如脊髓灰质炎病毒;螺旋对称，如烟草花叶病毒;复合对称，如T偶数噬菌体。
病毒主要由遗传物质和蛋白质组成是介于生命和非生命之间的一种物质形式，由一个或多个核酸分子(DNA 或RNA)组成的基因组，其外面有一层蛋白或脂蛋白的保护性外壳。
有些病毒有囊膜和刺突，如流感病毒。
病毒是最微小的，结构最简单的一类非细胞型微生物，并且，病毒没有完整的细胞结构，只能依靠寄生在别的人或动物体内来维持生命。
病毒的形态多种多样，主要有球形，杆形和蝌蚪形。
也可根据戴维·巴尔的摩分类法(基于病毒mRNA的生成机制)分为以下几种:
1.双链DNA病毒(如腺病毒、疱疹病毒、痘病毒)
2.单链DNA病毒(如小DNA病毒)
3.双链RNA病毒(如呼肠孤病毒)
4.(+)单链RNA病毒(如微小核糖核酸病毒、披盖病毒)
5.(−)单链RNA病毒(如正黏液病毒、炮弹病毒)。
利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因宋妮;温永俊;王凤雪;武华【摘要】根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物.以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因.扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS进行诱导表达.经SDSPAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku.在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37℃,诱导5h时融合蛋白表达量最大.Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(040)009【总页数】5页(P61-65)【关键词】猪O型口蹄疫病毒;VP0、VP1、VP3基因;SUMO;高效表达【作者】宋妮;温永俊;王凤雪;武华【作者单位】中国农业科学院特产研究所,特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所,特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所,特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所,特种经济动物分子生物学国家重点实验室,吉林长春130112;华威特(北京)生物科技有限公司,北京100085【正文语种】中文【中图分类】Q786口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus，FMDV)属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属，该病毒有7个血清型:A、O、C、AsiaⅠ、SATⅠ、SATⅡ和SATⅢ，且O型FMDV是提交国际参考实验室阳性临床病理标本中最常见的FMDV。
病毒的形态和结构病毒（Virus）是一类非细胞形态的介于生命与非生命形式之间的物质。
有以下主要特征：①个体微小，可通除滤菌器，大多数必须用电镜才能看见；②仅具有一种类型的核酸，或DNA或RNA，没有含两种核酸的病毒；③专营细胞内寄生生活；④具有受体连结蛋白（receptor binding protein），与敏感细胞表面的病毒受体连结，进而感染细胞。
一、病毒的形态和结构病毒的大小一般在10~30nm之间。
结构简单，由核酸（DNA或RNA）芯和蛋白质衣壳（capsid）所构成，称核衣壳（nucleocapsid），衣壳有保护病毒核酸不受酶消化的作用。
各种病毒所含的遗传信息量不同，少的只含有3个基因，多的可达300个不同的基因。
病毒衣壳由一至几种蛋白组成，组成病毒衣壳的亚单位称壳微粒（capsome r）。
病毒的形成不需要酶的参加，只要条件具备，核酸和蛋白质便可自我装配（self assembly）成病毒。
其装配形式有二十面体对称、螺旋对称和复合对称三种类型。
二十面体对称型的衣壳蛋白形成二十面体，核酸包在其中；螺旋对称型的衣壳蛋白与核酸呈螺旋形排列，核酸交织在其中；复合对称型为同时具有或不具有两种对称性形式的病毒（图3-21）。
图3-21 病毒衣壳的排列方式一个成熟有感染性的病毒颗粒称“病毒体”（Virion）。
电镜观察有五种形态；①球形（Sphericity）：大多数人类和动物病毒为球形，如脊髓灰质炎病毒（图3-21）、疱疹病毒及腺病毒等；②丝形（Filament）：多见于植物病毒，如烟草花叶病病毒（图3-22），人类流感病毒有时也是丝形；③弹形（Bullet-shape）：形似子弹头，如狂犬病毒、疱疹性口炎（图3-23）病毒等，其他多为植物病毒。
④砖形（Brick-shape）：如天花病毒（图3-24）、牛痘苗病毒等；⑤蝌蚪形（T adpole-shape）：由一卵圆形的头及一条细长的尾组成，如噬菌体（图3-25）。
2014年第49卷第12期’生物学通报55烟草花叶病毒的发现、揭示和生物学意义任衍钢宋玉奇白冠军卫红萍(阳泉师范高等专科学校山西阳泉045200)摘要烟草花叶病毒(TMv)研究在生命科学中具有标志性作用。
用TMV作为实验材料，发现RNA也具有遗传功能，在化学因素的作用下也能发生基因突变。
依据TMV的x射线衍射图像对TMV进行分子结构的建模工作，利用TMV的外壳蛋白基因获得了首例转基因抗病毒植株，证明了病原体能引发抗性的观点。
关键词TMV发现揭示意义中国图书分类号：Q一1文献标识码：E在科学研究中，实验材料是影响学科发展的关发现、揭示和生物学意义作简要的历史回顾。
键因素之一。
在病毒学领域的实验材料中，烟草花叶1TMV的发现和鉴定病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)具有标志性的作TMV是烟草花叶病毒属的代表种，该病毒之用。
TMV是人类最早发现、最早提纯和结晶、最早利所以能引起重视，与烟草这种当时迅速发展的经济用超速离心机和电泳设备检测。
以及最早在电子显作物有关，TMV的侵染能使烟草减产达30％一50％微镜下观测到的病毒；其RNA最早被证明携带有遗之多。
1886年，在荷兰工作的德国农业化学家麦尔传信息并具有侵染性，TMV外壳蛋白(CP)的氨基(Adolf Mayer)最早研究了导致烟草花叶病的原因。
酸排列顺序最早被测定并发现其能实现自我组装；麦尔把烟草花叶病株的汁液注射到健康烟草的叶 TMV是最早利用病毒CP被作为抗性转基因植株的脉中，健康烟草也感染了烟草花叶病，由此他认为，介导物，最早被证明编码运动蛋白(MP)的病毒。
烟草花叶病是一种植物传染病。
但不是无机物平衡TMV在病毒研究中具有重要地位，本文对TMV的失调所导致的营养病，而是一种细菌病。
1892年，40．袋鼹(Notoryctemorphia目)栖息于南澳、西澳和 5 45l、、．m 500 3‘i～i—j—j北疆沙漠，它们穴居于沙中，并将身后的隧道封住，Echymipera TATGCTATTGCATGTCGACACAGTAT—ATGATCGACCATCAAACACTACT造成一种在沙中“游泳”的表象。
㊀山东农业科学㊀２０２３ꎬ５５(１０):１４０~１４５ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ㊀ＤＯＩ:１０.１４０８３/ｊ.ｉｓｓｎ.１００１－４９４２.２０２３.１０.０１９收稿日期:２０２２－１２－２８基金项目:山东省重点研发计划项目(２０２０ＣＸＧＣ０１０８０１ꎬ２０２２ＴＺＸＤ００４１ꎬ２０２２ＣＸＰＴ０１０ꎬ２０２１ＬＺＧＣ００１)ꎻ山东省现代农业产业技术体系(ＳＤＡＩＴ－０８－０１)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程项目(ＣＸＧＣ２０２３Ｆ１０ꎬＣＸＧＣ２０２３Ａ２１ꎬＣＸＧＣ２０２３Ａ２１)ꎬ泰山学者工程项目作者简介:矫健(１９９８ )ꎬ男ꎬ山东青岛人ꎬ硕士研究生ꎬ主要从事动物病毒学与免疫学研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:１１７４６２９５６１＠ｑｑ.ｃｏｍ李建达(１９９２ )ꎬ男ꎬ山东济南人ꎬ博士ꎬ主要从事动物微生物与免疫学研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｌｊｄ４４５３＠１６３.ｃｏｍ∗同为第一作者ꎮ通信作者:于江(１９８５ )ꎬ女ꎬ山东莱州人ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ研究方向为动物病原学与免疫学ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｙｕｊｉａｎｇ＿２２１３＠１６３.ｃｏｍ吴家强(１９７５ )ꎬ男ꎬ山东诸城人ꎬ博士ꎬ研究员ꎬ研究方向为动物病原学与免疫学ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｊｉａｑｉａｎｇ２０００＠ｓｉｎａ.ｃｏｍ非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定矫健１ꎬ２ꎬ李建达２∗ꎬ韩先杰１ꎬ张琳２ꎬ张玉玉２ꎬ任素芳２ꎬ刘飞２ꎬ陈智２ꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎｋｏ２ꎬ张文娟３ꎬ于江１ꎬ２ꎬ吴家强１ꎬ２(１.青岛农业大学动物医学院ꎬ山东青岛㊀２６６１０９ꎻ２.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室/农业农村部畜禽生物组学重点实验室ꎬ山东济南㊀２５０１００ꎻ３.山东碧蓝生物科技有限公司ꎬ山东泰安㊀２７１４００)㊀㊀摘要:非洲猪瘟(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒꎬＡＳＦ)是由非洲猪瘟病毒(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓꎬＡＳＦＶ)引起的一种高度传染性病毒性疾病ꎬ发病率和死亡率高达１００％ꎬ对我国的生猪养殖业造成了毁灭性打击ꎮｐ２２蛋白为ＡＳＦＶ的结构蛋白ꎬ本研究构建了重组原核表达质粒ｐＥＴ－３２ａ－ｐ２２ꎬ将其转化至大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞表达重组ｐ２２蛋白并纯化ꎬ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定证实重组ｐ２２蛋白与ＡＳＦＶ阳性血清有良好的免疫反应性ꎮ利用重组ｐ２２蛋白免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠并通过间接ＥＬＩＳＡ方法筛选到２株能够稳定分泌ｐ２２蛋白单克隆抗体(ＭＡｂ)的杂交瘤细胞株２Ｄ６和５Ｅ７ꎮ经抗体亚型鉴定两株抗体均为ＩｇＧ１型ꎻ经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ꎬ两株抗体能够特异性识别过表达的ｐ２２蛋白ꎮ综上ꎬ本研究成功表达并纯化了ｐ２２重组蛋白ꎬ制备了ｐ２２单克隆抗体ꎬ为进一步探讨ｐ２２蛋白的结构功能及其在ＡＳＦＶ中的感染致病机制提供了基础条件ꎮ关键词:非洲猪瘟病毒ꎻｐ２２蛋白ꎻ单克隆抗体ꎻ原核表达中图分类号:Ｓ８５２.６５＋１㊀㊀文献标识号:Ａ㊀㊀文章编号:１００１－４９４２(２０２３)１０－０１４０－０６ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｐ２２ＰｒｏｔｅｉｎｏｆＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒＶｉｒｕｓＪｉａｏＪｉａｎ１ꎬ２ꎬＬｉＪｉａｎｄａ２∗ꎬＨａｎＸｉａｎｊｉｅ１ꎬＺｈａｎｇＬｉｎ２ꎬＺｈａｎｇＹｕｙｕ２ꎬＲｅｎＳｕｆａｎｇ２ꎬＬｉｕＦｅｉ２ꎬＣｈｅｎＺｈｉ２ꎬＮａｔａｌｉｉａＨｒａｂｃｈｅｎｋｏ２ꎬＺｈａｎｇＷｅｎｊｕａｎ３ꎬＹｕＪｉａｎｇ１ꎬ２ꎬＷｕＪｉａｑｉａｎｇ１ꎬ２(１.ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＱｉｎｇｄａｏ２６６１０９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ/ＳｈａｎｄｏｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ/ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＬｉｖｅｓｔｏｃｋａｎｄＰｏｕｌｔｒｙＭｕｌｔｉ￣ｏｍｉｃｓꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＲｕｒａｌＡｆｆａｉｒｓꎬＪｉｎａｎ２５０１００ꎬＣｈｉｎａꎻ３.ＳｈａｎｄｏｎｇＧｒｅｅｎＢｌｕｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｍｐａｎｙＬｉｍｉｔｅｄꎬＴａｉａｎ２７１４００ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ(ＡＳＦ)ｉｓａｈｉｇｈｌｙｃｏｎｔａｇｉｏｕｓｖｉｒａｌｄｉｓｅａｓｅｃａｕｓｅｄｂｙＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ(ＡＳＦＶ)ｗｉｔｈｔｈｅｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｕｐｔｏ１００％ꎬｗｈｉｃｈｈａｓｃａｕｓｅｄａｄｅｖａｓｔａｔｉｎｇｂｌｏｗｔｏＣｈｉｎａ ｓｐｉｇｆａｒｍｉｎｇｉｎｄｕｓｔｒｙ.Ｔｈｅｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｉｓａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｏｆＡＳＦＶ.ＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｐＥＴ￣３２ａ￣ｐ２２ｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢＬ２１(ＤＥ３)ｒｅｃｅｐｔｉｖｅｃｅｌｌｓｔｏｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｐｕｒｉｆｙｉｔ.Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｈａｄｇｏｏｄｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈＡＳＦＶｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍ.Ｂａｌｂ/ｃｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅ￣ｃｏｍｂｉｎａｎｔｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｗｏｈｙｂｒｉｄｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓ２Ｄ６ａｎｄ５Ｅ７ꎬｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄｓｅｃｒｅｔｅｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ(ＭＡｂ)ｔｏｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎꎬｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｂｙｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡ.Ｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙｓｕｂｔｙｐｅｓｏｆｔｈｅｔｗｏｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉ￣ｆｉｅｄａｓＩｇＧ１ｔｙｐｅ.Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｗｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｃｏｕｌｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙｒｅｃｏｇｎｉｚｅｔｈｅｏｖｅｒｅｘ￣ｐｒｅｓｓｅｄｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎ.Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎꎬｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙꎬａｎｄｔｈｅｐ２２ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄꎬｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄｏｎｅｏｆｔｈｅｂａｓｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｆｕｒ￣ｔｈｅｒｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎꎬａｎｄａｌｓｏｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＡＳＦＶｉｎ￣ｆｅｃｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓꎻｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎꎻＭｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙꎻＰｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ㊀㊀非洲猪瘟(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒꎬＡＳＦ)是由非洲猪瘟病毒(ＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓꎬＡＳＦＶ)引起的一种高度传染性㊁出血性疾病ꎬ临床上以高热㊁皮肤发绀㊁淋巴结及脏器广泛出血为主要特征ꎬ如肾瘀斑㊁皮肤红斑㊁肺水肿㊁弥散性血管内凝血等[１]ꎮＡＳＦＶ主要通过接触性传播ꎬ家猪和野猪都是其主要宿主ꎬ一旦侵入家猪ꎬ便可在猪群中快速传播ꎬ发病率和死亡率高达１００％[２－３]ꎬ感染性病毒在组织中能够存在较长时间ꎬ尤其是淋巴结和扁桃体[４]ꎮ此外ꎬ该病毒也是唯一已知的ＤＮＡ虫媒病毒ꎬ能够通过软蜱进行传播[５]ꎮＡＳＦ于１９２１年首次在肯尼亚报道ꎬ随后传入其他非洲国家[６]ꎮ２００７年ꎬ在格鲁吉亚发现了毒力更高的ＡＳＦＶⅡ型ꎬ并迅速传播[７]ꎮ２０１８年８月ꎬ我国沈阳首次暴发ＡＳＦꎬ随后迅速蔓延到全国所有省份[８]ꎬ对我国乃至全世界的养猪业造成了严重的经济损失ꎮＡＳＦＶ是Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ科中Ａｓｆａｒｖｉｒｕｓ属的唯一成员[９]ꎬ是一种有囊膜的双链ＤＮＡ病毒ꎮＡＳＦＶ粒子是具有多层结构的二十面体ꎬ直径约为２００ｎｍꎬ病毒粒子结构自内向外依次为类核㊁核壳㊁内囊膜㊁衣壳㊁外囊膜[１０－１１]ꎮＡＳＦＶ基因组长度约为１７０~１９４ｋｂꎬ目前已从其中鉴定出结构蛋白６８种ꎬ部分蛋白的功能尚不清楚[１２]ꎮ这些结构蛋白分布在不同的区域ꎬ在病毒黏附与入侵㊁病毒基因组复制和转录㊁病毒包装与出芽以及免疫逃避等病毒感染的不同方面发挥着重要的作用[５]ꎮ由于ＡＳＦＶ结构复杂繁冗ꎬ对其功能的了解也十分有限ꎬ到目前为止还没有完全有效的ＡＳＦＶ商业疫苗ꎬ因此鉴定病毒结构蛋白的免疫原性在探讨病毒与宿主相互作用中至关重要[１３]ꎮＡＳＦＶｐ２２蛋白由ＫＰ１７７Ｒ基因编码ꎬ分子量为２２ｋＤａꎮｐ２２最初被描述为一种早期诱导的跨膜结构蛋白ꎬ位于病毒颗粒外部ꎬ能够从病毒颗粒表面溶解释放出来[１４]ꎮ然而ꎬ进一步的研究发现ꎬｐ２２蛋白位于病毒颗粒的内膜和感染细胞的表面[１５]ꎮ目前ꎬｐ２２蛋白在ＡＳＦＶ感染致病过程中的作用仍不清楚ꎮ本研究通过大肠杆菌原核表达系统成功表达并纯化出ｐ２２重组蛋白ꎬ通过免疫Ｂａｌｂ/ｃ小鼠成功制备了其单克隆抗体(ＭＡｂ)ꎬ为进一步探究ｐ２２蛋白的生物学作用奠定基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀细胞㊁菌株㊁载体及实验动物大肠杆菌Ｔｒａｎｓ５α㊁ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司ꎻ骨髓瘤细胞ＳＰ２/０㊁ｐＥＴ－３２ａ载体均由本实验室保存ꎻＡＳＦＶ标准阳性血清购自中国兽医药品监察所ꎻＳＰＦ级５~８周龄Ｂａｌｂ/ｃ雌性小鼠购自济南朋悦试验动物繁育有限公司ꎮ１.２㊀主要试剂质粒小提试剂盒㊁胶回收试剂盒均购自天根生化科技(北京)有限公司ꎻ限制性核酸内切酶㊁Ｔ４ＤＮＡ连接酶㊁蛋白Ｍａｒｋｅｒ均购自赛默飞世尔科技公司ꎻＮｉ￣ＮＴＡＡｇａｒｏｓｅ购自德国Ｑｉａｇｅｎ公司ꎻ单抗亚型鉴定试剂盒购自美国ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ公司ꎻＥＣＬ发光液㊁羊抗鼠ＨＲＰ－ＩｇＧ㊁羊抗猪ＨＲＰ－ＩｇＧ购自Ｂｅｙｏｔｉｍｅ公司ꎮ１.３㊀ＡＳＦＶｐ２２蛋白的原核表达１.３.１㊀重组表达质粒ｐＥＴ－３２ａ－ｐ２２的构建㊀根据ＡＳＦＶｐｉｇ/ＨＬＪ/２０１８株基因序列(ＧｅｎＢａｎｋＮｏ.ＭＫ３３３１８０.１)的ＫＰ１７７Ｒ基因序列进行引物设１４１㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀矫健ꎬ等:非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定计ꎬ正向引物(ｐ２２－Ｆ)序列:５ᶄ－ＣＴＣＧＡＧＴＴＡＴ￣ＧＣＧＴＧＴＴＴＡＴＧＡＴＴＡＣ－３ᶄ(包含ＸｈｏⅠ酶切位点)ꎬ反向引物(ｐ２２￣Ｒ)序列:５ᶄ－ＧＧＡＴＣ￣ＣＡＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＣＣＧＣＣＧＡ－３ᶄ(包含ＢａｍＨⅠ酶切位点)ꎬ由生工生物工程(上海)股份有限公司合成ꎮ以合成的密码子优化后的ｐ２２基因序列为模板ꎬ使用引物扩增目的基因片段ꎬＰＣＲ反应程序为９５ħꎬ５ｍｉｎꎻ９４ħꎬ４５ｓꎬ５８ħꎬ４５ｓꎬ７２ħꎬ４５ｓꎬ３２个循环ꎻ７２ħꎬ１０ｍｉｎꎻ４ħ结束ꎮ将扩增产物进行１％的琼脂糖凝胶电泳并纯化回收ꎬ用Ｔ４ＤＮＡ连接酶分别将ＫＰ１７７Ｒ基因与ｐＥＴ－３２ａ载体连接ꎬ将连接产物转化到感受态细胞Ｔｒａｎｓ５α中ꎮ挑取单克隆摇菌ꎬ菌液经ＰＣＲ鉴定为阳性后ꎬ送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序ꎮ测序成功后将阳性重组质粒命名为ｐＥＴ－３２ａ－ｐ２２ꎮ１.３.２㊀ＡＳＦＶｐ２２重组蛋白的表达和纯化㊀将阳性重组质粒ｐＥＴ－３２ａ－ｐ２２转化至大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞ꎬ挑取单克隆至ＬＢ培养基中３７ħ培养过夜ꎬ取１ｍＬ菌液接种至氨苄青霉素(ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎꎬＡｍｐ)抗性的１００ｍＬＬＢ液体培养基中ꎬ３７ħ㊁２２０ｒ/ｍｉｎ摇床培养至ＯＤ６００值达到０.６~０.８时ꎬ添加终浓度为１ｍｍｏｌ/Ｌ的ＩＰＴＧ诱导目的蛋白表达ꎬ诱导４ｈ后ꎬ收集菌体沉淀ꎬ使用裂解液(３００ｍｍｏｌ/ＬＮａＣｌꎬ５０ｍｍｏｌ/ＬＮａＨ２ＰＯ４ꎬｐＨ＝７.４)重悬菌体ꎬ进行超声破碎ꎬ４ħ㊁４０００ｒ/ｍｉｎ离心ꎬ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定后使用０.４５μｍ滤膜过滤ꎬ与蛋白纯化填料４ħ过夜结合ꎮ采用亲和层析的方式纯化ꎬ收集洗脱产物ꎬ用于ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定ꎬ使用超滤管将有单一目的蛋白条带的洗脱产物浓缩并置换到ＰＢＳ中ꎬ－８０ħ保存ꎮ１.３.３㊀ＡＳＦＶｐ２２重组蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定㊀重组ｐ２２蛋白纯化后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳ꎬ随后转移到ＰＶＤＦ膜上ꎬ经５％脱脂奶粉封闭后ꎬ以ＡＳＦＶ标准阳性血清(１ʒ１０００)作为一抗孵育２ｈꎮ清洗后ꎬ加入ＨＲＰ标记的羊抗猪ＩｇＧ二抗(１ʒ８０００)孵育１ｈꎬ进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ꎮ１.４㊀ＡＳＦＶｐ２２单克隆抗体的制备１.４.１㊀Ｂａｌｂ/ｃ小鼠的免疫及血清效价的测定㊀纯化后的重组ｐ２２蛋白与等体积弗氏完全佐剂乳化后ꎬ对４只５~８周龄Ｂａｌｂ/ｃ小鼠进行背部多点皮下注射ꎬ免疫剂量为１００μｇ/只ꎬ每１４ｄ免疫一次ꎬ共免疫３次ꎮ最后一次免疫７ｄ后从小鼠尾静脉取少量血ꎬ分离血清ꎬ通过间接ＥＬＩＳＡ方法检测血清中的抗体效价ꎮ将纯化的ｐ２２重组蛋白以２ｇ/ｍＬ的浓度包被到聚苯乙烯９６孔反应板(１００μＬ/孔)ꎬ４ħ放置过夜ꎻ次日用ＰＢＳＴ洗板３次后进行封闭(ｌ５０μＬ/孔封闭液)ꎬ室温放置０.５ｈꎻ用样品稀释液将小鼠血清按１ʒ２０００ꎬ１ʒ４０００ꎬ１ʒ８０００ꎬ１ʒ１６０００ꎬ１ʒ３２０００ꎬ１ʒ６４０００ꎬ１ʒ１２８０００ 进行倍比稀释ꎬ洗板３次后加入稀释好的血清并设置空白血清做阴性对照(１００μＬ/孔)ꎬ室温孵育１ｈꎻ洗板３次后加入ＨＲＰ标记的鼠二抗(１ʒ５０００ꎬ１００μＬ/孔)ꎬ３７ħ孵育４０ｍｉｎꎻＰＢＳＴ洗板５次并拍干ꎬ加入ＴＭＢ(１００μＬ/孔)ꎬ室温避光显色１０~１５ｍｉｎꎻ加入终止液(５０μＬ/孔)ꎬ用酶标仪测定４５０ｎｍ处各孔的吸光值ꎮ１.４.２㊀细胞融合及亚克隆筛选㊀按照标准流程取免疫后的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞ＳＰ２/０融合ꎬ通过间接ＥＬＩＳＡ方法检测筛选阳性杂交瘤细胞ꎬ使用有限稀释法对单克隆阳性孔进行３次亚克隆ꎮ筛选出稳定表达ｐ２２的阳性孔ꎬ进行扩大培养ꎮ１.４.３㊀腹水制备㊀将阳性杂交瘤细胞扩大培养并注射至Ｂａｌｂ/ｃ小鼠的腹腔(经弗氏不完全佐剂乳化)ꎬ７~１０ｄ后观察小鼠腹部隆起状况ꎬ并及时抽取腹水ꎮ１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ收集上清ꎬ－７０ħ冻存备用ꎮ１.５㊀ＡＳＦＶｐ２２单克隆抗体的鉴定１.５.１㊀单克隆抗体效价鉴定㊀将进行不同比例稀释后的腹水作为一抗ꎬＨＲＰ标记的羊抗鼠ＩｇＧ作为二抗ꎬ用重组ｐ２２蛋白建立的间接ＥＬＩＳＡ方法进行效价的测定(方法同１.４.１)ꎮ１.５.２㊀单克隆抗体亚型鉴定㊀用小鼠抗体亚型鉴定试剂盒对杂交瘤细胞制备的腹水抗体进行亚型测定ꎮ准备好包被有重组ｐ２２蛋白的板条(５０ｎｇ/孔)ꎬ每个克隆收集６００μＬ腹水上清ꎬ分别滴加到６个对应的酶标孔中(１００μＬ/孔)ꎬ３７ħ孵育１ｈꎻＰＢＳＴ洗板３次ꎬ将稀释好的分型二抗抗ＩｇＭ㊁ＩｇＡ㊁ＩｇＧ１㊁ＩｇＧ２ａ㊁ＩｇＧ２ｂ㊁ＩｇＧ３的抗体加入６个孔中ꎬ３７ħ孵育１ｈꎻＰＢＳＴ洗板３次ꎬ加入ＴＭＢ显色ꎬ有信号反应的孔对应的鉴定二抗亚型即为２４１山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀该抗体的亚型ꎮ１.５.３㊀Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定单克隆抗体的免疫原性㊀纯化的重组ｐ２２蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳后ꎬ转移至ＰＶＤＦ膜上ꎬ使用５％脱脂奶粉封闭２ｈꎻＰＢＳＴ洗膜后ꎬ加入单克隆抗体(１ʒ１０００)ꎬ４ħ孵育过夜ꎻ清洗后ꎬ加入ＨＲＰ标记的羊抗鼠ＩｇＧ二抗孵育１ｈꎬ充分清洗后使用ＥＣＬ发光液进行曝光ꎬ观察结果ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀重组表达质粒ｐＥＴ３２ａ－ｐ２２的构建用ｐ２２－Ｆ/ｐ２２－Ｒ引物对优化的ｐ２２基因进行扩增ꎬ结果显示ꎬＰＣＲ扩增后的ｐ２２基因片段约为４４７ｂｐꎬ大小符合预期(图１)ꎮ通过酶切酶连将ｐ２２扩增产物连接到ｐＥＴ－３２ａ质粒中ꎮ经测序分析后ꎬ基因测序结果完全正确ꎮ２.２㊀重组ｐ２２蛋白的表达和纯化ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果显示ꎬ与未诱导组相比ꎬ诱导组可见与预期大小一致的３７ｋＤａ融合蛋白ꎬ经超声破碎后可溶性分析发现ꎬ重组ｐ２２蛋白条带出现在超声后上清中ꎬ表明重组ｐ２２蛋白为可溶性表达(图２Ａ)ꎮ进一步大量诱导ｐ２２重组蛋白的表达ꎬ并与ＨｉｓＮｉ－ＮＴＡＡｇａｒｏｓｅ亲和层析柱结合ꎬ使用不同浓度梯度的咪唑洗脱液洗脱蛋白ꎬ收集洗脱液ꎬ随后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定ꎮ结果显示ꎬ使用高浓度洗脱液时ꎬ在３７ｋＤａ处出现单一条带(图２Ｂ)ꎬ纯化后纯度大于９５％ꎮ１:ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００ꎻ２:阴性对照ꎻ３:目的基因ＰＣＲ产物ꎮ图１㊀ｐ２２基因ＰＣＲ扩增目的片段２.３㊀重组ｐ２２蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定对重组ｐ２２蛋白进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定ꎬ通过Ｈｉｓ标签抗体孵育后ꎬ在３７ｋＤａ处检测到嵌合Ｈｉｓ标签的ｐ２２蛋白ꎻ而使用ＡＳＦＶ阳性血清孵育后ꎬ发现重组ｐ２２蛋白能够与ＡＳＦＶ阳性血清发生特异性结合(图２Ｃ)ꎬ表明该抗原具有良好免疫原性ꎮＡ:１.预染蛋白质分子质量标准ꎬ２~５.诱导组ꎬ超声破碎后上清ꎬ超声破碎后沉淀ꎬ未诱导组ꎻＢ:１.预染蛋白质分子质量标准ꎬ２.超声破碎后上清ꎬ３.流穿液ꎬ４~９.２０㊁４０㊁５０㊁１００㊁１００㊁２００ｍｍｏｌ/Ｌ咪唑洗脱液ꎻＣ:１㊁３.预染蛋白质分子质量标准ꎬ２.Ｈｉｓ抗体孵育重组ｐ２２蛋白ꎬ４.阳性猪血清孵育重组ｐ２２蛋白ꎮ图２㊀重组ｐ２２蛋白的表达(Ａ)㊁纯化(Ｂ)及鉴定(Ｃ)２.４㊀单克隆抗体的制备及鉴定２.４.１㊀血清效价的测定㊀三免７ｄ后通过间接ＥＬＩＳＡ方法检测接种小鼠血清效价ꎬ测得１㊁２㊁３号小鼠的血清效价为１ʒ１２８０００ꎬ４㊁５号小鼠的血清效价为１ʒ６４０００(图３Ａ)ꎮ选取１㊁２㊁３号小鼠进行加强免疫ꎮ２.４.２㊀单克隆抗体效价测定㊀在骨髓瘤细胞和脾细胞融合后ꎬ进行融合筛选ꎬ对筛选的阳性孔进行３次亚克隆后ꎬ经间接ＥＬＩＳＡ方法检测ꎬ最终筛选到了两株能够稳定分泌重组ｐ２２ＭＡｂ的杂交瘤细胞株ꎬ通过小鼠腹腔注射两种杂交瘤细胞株ꎬ制备了小鼠腹水ꎬ通过间接ＥＬＩＳＡ方法测定腹水的效价分别为１ʒ５１２０００和１ʒ２５６０００(图３Ｂ)ꎬ将获得的单克隆抗体命名为２Ｄ６和５Ｅ７ꎮ３４１㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀矫健ꎬ等:非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定图３㊀小鼠血清效价(Ａ)及单克隆抗体效价(Ｂ)的测定２.４.３㊀单克隆抗体亚型鉴定㊀采用美国ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ公司的单抗亚型鉴定试剂盒分别对ｐ２２ＭＡｂ２Ｄ６和５Ｅ７的亚型进行检测ꎬ结果显示两种ＭＡｂ的亚型均为ＩｇＧ１(表１)ꎮ㊀㊀表１㊀单克隆抗体亚型鉴定细胞株编号亚型轻链类型２Ｄ６ＩｇＧ１Ｋａｐｐａ５Ｅ７ＩｇＧ１Ｋａｐｐａ２.４.４㊀单克隆抗体的免疫反应鉴定㊀为了鉴定ＭＡｂ２Ｄ６和５Ｅ７的免疫反应性ꎬ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测了其对外源性ｐ２２蛋白的反应性ꎮ结果显示ꎬ两株ＭＡｂ均能够在３７ｋＤａ处与ｐ２２蛋白发生特异性反应(图４)ꎮ１:预染蛋白质分子质量标准ꎻ２:重组ｐ２２蛋白ꎮ图４㊀单克隆抗体２Ｄ６(Ａ)和５Ｅ７(Ｂ)的免疫反应鉴定３㊀讨论与结论自２０１８年ＡＳＦ传入中国并迅速传播以来ꎬＡＳＦ对生猪生产造成了重大的经济威胁ꎬ目前ꎬ在中国传播的ＡＳＦＶ类型主要为一种高毒力的基因型Ⅱ毒株[１６]ꎬ基因型Ⅰ毒株也有报道[１７]ꎮＡＳＦＶ在环境中具有高传染性和稳定性ꎬ可通过与受感染的猪或其产品直接接触或通过软蜱进行传播[１８]ꎮ直到目前ꎬ仍然没有针对ＡＳＦＶ的有效商业疫苗ꎬ使得非洲猪瘟的预防㊁控制和治疗变得十分艰难[１９]ꎬ因此ꎬ筛选ＡＳＦ免疫原性蛋白ꎬ鉴定免疫相关基因ꎬ将有助于ＡＳＦ疫苗的开发ꎮ另外ꎬ需要对ＡＳＦＶ的结构功能等基础研究进行攻克ꎬ以期为ＡＳＦ疫苗或诊断试剂的研发提供更多理论依据ꎮ相关研究表明ꎬ鉴定最具抗原性的病毒蛋白对改进血清学诊断试验具有重要作用ꎬ在ＡＳＦＶ血清诊断试验中使用重组蛋白作为抗原来源可避免操纵活病毒的潜在风险[２０]ꎮｐ２２蛋白为ＡＳＦＶ的结构蛋白ꎬ根据序列分析比较ꎬ东欧等地区ＡＳＦＶ分离株中的ｐ２２序列保守ꎬ证明ｐ２２蛋白是抗原稳定的ꎬ因此适合用作开发新的血清诊断试验的工具[２１]ꎮ目前对于ｐ２２蛋白的功能研究尚不完善ꎬ其生物学功能仍待阐明ꎮ原核表达系统具有操作简单㊁表达量高的特点ꎬ本研究中所用的原核表达载体ｐＥＴ－３２ａ可在ＢＬ２１(ＤＥ３)细菌中高度表达ꎬ并且可以在裂解物的上清液中检测到大量目标蛋白ꎬ大大简化了纯化过程ꎬ同时避免了由包涵体的变性和复性可能引起的活性损失[２２]ꎮ虽然从构象结构上看ꎬ原核表达与真核表达的抗原会有差异ꎬ但不会影响抗原的线性表位[２３]ꎬ因此ꎬ使用原核表达系统制备单克隆抗体仍可继续进行线性表位的筛选ꎬ为ＡＳＦＶ结构功能的研究提供生物学材料ꎮ单克隆抗体(ＭＡｂ)是诊断病毒感染的关键试剂ꎮ与多克隆抗体相比ꎬＭＡｂ在现代免疫诊断的应用中表现出特异性强㊁灵敏度高等优势ꎬ在疾病预防㊁诊断㊁治疗和流行病学调查等研究中发挥了巨大作用ꎮ张冯禧等[２４]通过原核表达系统获４４１山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第５５卷㊀得ＡＳＦＶｐ３０重组蛋白并制备了ＭＡｂꎬ效价为１ʒ１０２４００ꎬ表明该蛋白有良好的免疫原性ꎮ齐艳丽等[２５]通过原核表达系统表达纯化了ＡＳＦＶｐ５４重组蛋白并制备了ＭＡｂꎬ抗体ＥＬＩＳＡ效价均高于１ʒ２５６００且特异性良好ꎮ本研究通过大肠杆菌表达系统成功表达并纯化出一种可溶性重组蛋白ｐ２２ꎬ并制备了两株针对该蛋白的ＭＡｂꎮ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ共同分析ꎬ重组蛋白大小约为３７ｋＤａꎬ将纯化的重组蛋白做免疫原免疫小鼠ꎬ得到抗体的ＥＬＩＳＡ效价不低于１ʒ２５６０００ꎬ说明制备的ＭＡｂ具有良好的免疫原性ꎬ为ｐ２２蛋白的结构功能等基础研究以及ＡＳＦＶ免疫类诊断试剂产品的开发提供了重要的生物材料ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[１]㊀ＺｈｕＸꎬＦａｎＢꎬＺｈｏｕＪꎬｅｔａｌ.Ａｈｉｇｈ￣ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｍｅｔｈｏｄｔｏａｎ￣ａｌｙｚｅｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｏｆＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｉｎｖｉｔｒｏ[Ｊ].ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０２１ꎬ８:７１９－８５９.[２]㊀王清华ꎬ任炜杰ꎬ包静月ꎬ等.我国首例非洲猪瘟的确诊[Ｊ].中国动物检疫ꎬ２０１８ꎬ３５(９):１－４.[３]㊀吴萌萌ꎬ张栋良ꎬ孙彩虹ꎬ等.非洲猪瘟研究进展[Ｊ].畜牧兽医杂志ꎬ２０２２ꎬ４１(１):４３－４７.[４]㊀ＷｉｌｋｉｎｓｏｎＰＪꎬＷａｒｄｌｅｙＲＣꎬＷｉｌｌｉａｍｓＳＭ.ＳｔｕｄｉｅｓｉｎｐｉｇｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ(Ｍａｌｔａ/７８)[Ｃ]ʊＥｘ￣ｐｅｒｔＣｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎｏｎＡｆｒｉｃａｎＳｗｉｎｅＦｅｖｅｒＲｅｓｅａｒｃｈꎬ１９８３:７４－８４.[５]㊀ＤｉｘｏｎＬＫꎬＣｈａｐｍａｎＤＡＧꎬＮｅｔｈｅｒｔｏｎＣＬꎬｅｔａｌ.Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｇｅｎｏｍｉｃｓ[Ｊ].ＶｉｒｕｓＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１３ꎬ１７３(１):３－１４.[６]㊀Ｇａｖｉｅｒ￣ＷｉｄéｎＤꎬＳｔåｈｌＫꎬＤｉｘｏｎＬ.ＮｏｈａｓｔｙｓｏｌｕｔｉｏｎｓｆｏｒＡｆｒｉ￣ｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０２０ꎬ３６７(６４７８):６２２－６２４. [７]㊀ＤｉｘｏｎＬＫꎬＳｕｎＨꎬＲｏｂｅｒｔｓＨ.Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒ[Ｊ].Ａｎｔｉｖｉ￣ｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２０１９ꎬ１６５:３４－４１.[８]㊀ＧｅＳꎬＬｉＪꎬＦａｎＸꎬｅｔａｌ.ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓꎬＣｈｉｎａꎬ２０１８[Ｊ].ＥｍｅｒｇｉｎｇＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａ￣ｓｅｓꎬ２０１８ꎬ２４(１１):２１３１－２１３３.[９]㊀ＡｌｏｎｓｏＣꎬＢｏｒｃａＭꎬＤｉｘｏｎＬꎬｅｔａｌ.ＣｏｎｓｏｒｔｉｕｍꎬＩＲＩＣＴＶｖｉ￣ｒｕｓｔａｘｏｎｏｍｙｐｒｏｆｉｌｅ:Ａｓｆａｒｖｉｒｉｄａｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＶｉ￣ｒｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ９９:６１３－６１４.[１０]ＷａｎｇＧꎬＸｉｅＭꎬＷｕＷꎬｅｔａｌ.Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｖｅｒ￣ｓｉｔｉｅｓｏｆＡＳＦＶｐｒｏｔｅｉｎｓ[Ｊ].Ｖｉｒｕｓｅｓꎬ２０２１ꎬ１３(１１):２１２４. [１１]ＷａｎｇＮꎬＺｈａｏＤꎬＷａｎｇＪꎬｅｔａｌ.ＡｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅｏｆＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓａｎｄｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｖｉｒａｌａｓｓｅｍｂｌｙ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ２０１９ꎬ３６６(６４６５):６４０－６４４.[１２]郭怡德ꎬ李冰ꎬ蔡汝健ꎬ等.非洲猪瘟病毒蛋白功能研究进展[Ｊ].动物医学进展ꎬ２０２０ꎬ４１(１０):９６－１０１. [１３]ＤíａｚＣꎬＳａｌáｔＪꎬＫｏｌａｒ㊅ｏｖáＤＢꎬｅｔａｌ.Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏ￣ｇｅｎｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｎｔｉｇｅｎｓｂａｓｅｄｏｎｐ２２ｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅ￣ｓｅａｒｃｈꎬ２０２２ꎬ６６(３):２９７－３０４.[１４]ＣａｍａｃｈｏＡꎬＶｉñｕｅｌａＥ.Ｐｒｏｔｅｉｎｐ２２ｏｆＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉ￣ｒｕｓ:ａｎｅａｒｌｙｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｔｈａｔｉｓｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｍｅｍｂｒａｎｅｏｆｉｎｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｖｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９１ꎬ１８１(１):２５１－２５７.[１５]ＡｌｅｊｏＡꎬＭａｔａｍｏｒｏｓＴꎬＧｕｅｒｒａＭꎬｅｔａｌ.ＡｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｔｌａｓｏｆｔｈｅＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｐａｒｔｉｃｌｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２０１８ꎬ９２(２３):ＤＯＩ:１０.１１２８/ｊｖｉ.０１２９３－１８.[１６]ＭｏｎｔｅａｇｕｄｏＰＬꎬＬａｃａｓｔａＡꎬＬóｐｅｚＥꎬｅｔａｌ.ＢＡ７１ΔＣＤ２:ａｎｅｗｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｉｖｅａｔｔｅｎｕａｔｅｄＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｗｉｔｈｃｒｏｓｓ￣ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｃａｐａｂｉｌｉｔｉｅｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ９１(２１):ＤＯＩ:１０.１１２８/ｊｖｉ.０１０５８－１７.[１７]ＳｕｎＥꎬＨｕａｎｇＬꎬＺｈａｎｇＸꎬｅｔａｌ.ＧｅｎｏｔｙｐｅＩＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅ￣ｖｅｒｖｉｒｕｓｅｓｅｍｅｒｇｅｄｉｎｄｏｍｅｓｔｉｃｐｉｇｓｉｎＣｈｉｎａａｎｄｃａｕｓｅｄｃｈｒｏ￣ｎｉｃｉｎｆｅｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＥｍｅｒｇｉｎｇＭｉｃｒｏｂｅｓ＆Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓꎬ２０２１ꎬ１０(１):２１８３－２１９３.[１８]ＲｅｖｉｌｌａＹꎬＰｅｒｅｚ￣ＮｕｎｅｚＤꎬＲｉｃｈｔＪＡ.Ａｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉ￣ｒｕｓｂｉｏｌｏｇｙａｎｄｖａｃｃｉｎｅａｐｐｒｏａｃｈｅｓ[Ｊ].ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＶｉｒｕｓＲｅ￣ｓｅａｒｃｈꎬ２０１８ꎬ１００:４１－７４.[１９]ＷｕＫꎬＬｉｕＪꎬＷａｎｇＬꎬｅｔａｌ.ＣｕｒｒｅｎｔｓｔａｔｅｏｆｇｌｏｂａｌＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖａｃｃｉｎｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｕｎｄｅｒｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅａｎｄｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｏｆＡＳＦｉｎＣｈｉｎａ[Ｊ].Ｖａｃｃｉｎｅｓꎬ２０２０ꎬ８(３):５３１.[２０]ＧａｌｌａｒｄｏＣꎬＢｌａｎｃｏＥꎬＲｏｄｒíｇｕｅｚＪＭꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｐｒｏｐｅｒ￣ｔｉｅｓａｎｄｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｐｒｏｔｅｉｎｐｐ６２ｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉ￣ｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ４４(３):９５０－９５６.[２１]ＶｌａｓｏｖａＮＮꎬＫａｚａｋｏｖａＡＳꎬＶａｒｅｎｔｓｏｖａＡＡꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐａｒａ￣ｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｇｅｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇｏｕｔｅｒｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆＡｆｒｉ￣ｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｉｓｏｌａｔｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅｇｉｏｎｓｏｆＲｕｓｓｉａｎＦｅｄｅｒａｔｉｏｎａｎｄＡｒｍｅｎｉａ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０１２ꎬ１(１):１－１１.[２２]ＸｕＬꎬＣａｏＣꎬＹａｎｇＺꎬｅｔａｌ.ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｉｔｅｉｎｔｈｅＡｆｒｉｃａｎｓｗｉｎｅｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓｐ５４ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔｓｐｒｅｌｉｍｉ￣ｎａｒｙａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎａｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌａｓｓａｙ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＳｃｉｅｎｃｅꎬ２０２２ꎬ２３(４):ｅ５５.[２３]于浩洋ꎬ王彩霞ꎬ吴绍强ꎬ等.非洲猪瘟病毒ｐ３０蛋白单克隆抗体的制备及阻断ＥＬＩＳＡ检测方法的建立[Ｊ].中国兽医科学ꎬ２０２２ꎬ５２(１):４８－５５.[２４]张冯禧ꎬ肖琦ꎬ朱家平ꎬ等.非洲猪瘟病毒Ｐ３０蛋白单克隆抗体制备㊁鉴定及阻断ＥＬＩＳＡ方法的建立[Ｊ].中国农业科学ꎬ２０２２ꎬ５５(１６):３２５６－３２６６.[２５]齐艳丽ꎬ刘桃雪ꎬ于海深ꎬ等.非洲猪瘟病毒ｐ５４蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[Ｊ].畜牧兽医学报ꎬ２０２３ꎬ５４(１):２８１－２９２.５４１㊀第１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀矫健ꎬ等:非洲猪瘟病毒ｐ２２蛋白单克隆抗体的制备及鉴定。
皖西学院化学化工文献信息检索检索报告姓名：XX学号：XXXXXX班级：班课题：二十面体病毒衣壳蛋白自组装结构的研究1 指导老师一、课题的背景和目的病毒（virus)是由一个核酸分子（DNA或RNA）与蛋白质构成的非细胞形态的靠寄生生活的生命体。
病毒无细胞结构。
病毒是颗粒很小、以纳米为测量单位、结构简单、寄生性严格，以复制进行繁殖的一类非细胞型微生物。
病毒是比细菌还小、没有细胞结构、只能在细胞中增殖的微生物。
由蛋白质和核酸组成。
多数要用电子显微镜才能观察到。
衣壳（capsid）是病毒的蛋白质外壳，又称为壳体。
衣壳是由病毒衣壳蛋白亚基所形成的寡聚体。
衣壳的作用是用于包裹病毒的遗传物质（核酸）。
包在病毒核酸外的蛋白质外壳。
用电子显微镜可观察到它是由规则排列着的许多单元小粒子构成，这些小粒子是亚单位称为壳微粒与病毒相比，壳微粒是单纯的蛋白质分子，有的是由本身数个结构单位聚集而成。
作为衣壳的基本形态，有的是壳微粒呈螺旋状排列的圆柱状（烟草花叶病毒等），有的是壳微粒排列成等轴形状的正二十面体（腺病毒等）。
衣壳是包围在病毒核酸外的一层蛋白质，是由一定数量的壳粒组成。
壳粒是衣壳的形态学亚单位。
由于病毒核酸的螺旋构形不同，衣壳的壳粒数量及排列方式也不同。
病毒衣壳的功能：1、护病毒核酸，使之免遭环境中的核酸酶和其它理化因素破坏。
2、参与病毒的感染过程。
因病毒引起感染首先需要特异地吸附于易感细胞表面，而无包膜病毒是依靠衣壳吸附于细胞表面的。
3、具有良好的抗原性，诱发机体的体液免疫与细胞免疫，这些免疫应答不仅有免疫防御作用，而且可引起免疫病理损害，与病毒的致病有关。
由此可知，病毒与人们的生活是有着紧密联系的。
二、初步检索策略的分析1）通过百度了解一下病毒、病毒衣壳蛋白的基本性质首先通过百度用检索词“病毒”来检索有病毒的网页。
虽然检索结果很多，但是有许多网页是与病毒相关的其他产品或软件的网页。
通过阅读和课题相符的网页，可以看到病毒的一些基本信息、发现历史、来源和危害等一系列的信息。
通过阅读这些网页，我了解到了病毒的基性质。
而在输入“病毒衣壳蛋白”该检索词后得到的却是关于衣壳的信息，后来改用“病毒衣壳”和“衣壳蛋白”为检索词，得到的大部分信息依旧是关于衣壳的信息。
2）中文检索词的分析通过分析课题，首先可以确定第一个关键词为“病毒衣壳”，第二个关键词是“蛋白”而第三个关键词则是“自组装”。
三、初步的检索过程和结果根据上面确定的检索策略进行中文文献的检索，然后通过阅读检索的中文文献，进一步调整检索的策略，从而确定最适宜的检索策略。
1、中国期刊网检索年份：1915—2015检索路径：高级检索检索过程和结果：2、万方数字化期刊检索年份：1982—2015检索路径：高级检索检索过程和结果：四、初步阅读文献，调整已有的检索策略通过阅读相关的文献，对病毒衣壳、自组装的概念有了初步的了解，但是课题中的“二十面体”在检索中没有得到体现，使检索的范围过大，没有得到适合的检索信息。
虽然如此，也让我从各个方面了解到了病毒衣壳和生命科学之间的种种联系，进一步的扩大了自己的知识面。
例如，通过检索，我找到了本校常老师和钟老师以及刘同学对相应课题的研究文章，通过该文章，我了解到二十面体病毒衣壳结构蛋白具有不同的构象。
在装配过程中，正在附着的蛋白亚基构象与位置在先前蛋白亚基构象的指令下发生相应的调整后装配到衣壳骨架上。
局部相互作用指导下的装配反复进行，最终形成规整的二十面体病毒衣壳的立体结构。
此外，病毒是介于生命与非生命之间的一类无细胞结构的生物，绝大多数病毒的成熟颗粒是由核酸和蛋白质构成的传染因子。
一个简单的病毒粒子，实质上只是一团遗传物质( R N A 或 D NA) 和它外围的一层蛋白质外壳，这层蛋白质就是衣壳，具有保护病毒核酸的作用，也是病毒核酸由一个宿主细胞转移到另一个宿主细胞的工具。
结构比较复杂的病毒，则在衣壳外面还有一层( 几层) 富含脂质的外膜。
许多病毒晶体的结构蛋白根据物理学及几何学原理装配成规律性的几何堆积——对称的二十面体衣壳。
了解了以上的内容，需对检索策略进行适当的调整。
“病毒衣壳”这个词太宽泛，不够准确，使检索结果过于宽泛。
通过阅读文献可发现，可以将检索词“病毒衣壳”更换为“二十面体病毒”，从而缩小检索范围，找到适宜、贴近的检索结果。
根据调整后的检索路线，对文献进行二次检索，尽量找到与课题相符的检索结果1、中国期刊网检索年份：1915—2015检索途径：高级检索检索过程和结果：2、万方数字化期刊检索年份：1982—2015检索路径：高级检索检索过程和结果：五、文献综述二十面体病毒衣壳蛋白自组装结构的研究病毒是介于生命与非生命之间的一类无细胞结构的生物，几乎所有的球状病毒衣壳都采用二十面体对称，在分子生物学和物质科学里，简单单元自发地自组装成有序的结构扮演了重要角色，病毒的自组装就是一个很好的实例。
一个简单的成熟病毒粒子, 实质上只是一团遗传物质( RNA 或DNA) 和它外围的一层蛋白质外壳构成, 这层蛋白质就是衣壳。
球形病毒由于具有5: 3: 2 对称性质而被称为二十面体病毒[ 1] , 二十面体病毒衣壳蛋白是最佳的蛋白质分子结构分析模型, 对其研究已经成为当今蛋白质科学的热点领域之一[ 2]。
研究表明, 对规整有序的、封闭的二十面体病毒衣壳结构的立体构筑是立体化学、几何学和结构分子生物学尚待解决的问题之一[ 3]。
针对结构蛋白具有构象的特点, 根据蛋白亚基间的局部相互作用, 设计了相应的构象连接与增长方式, 以此规律模拟解决二十面体病毒衣壳结构的构筑问题。
1 蛋白亚基局部相互作用1. 1 三角形剖分数T为表明各种不同的二十面体病毒的壳粒总数与蛋白亚基总数之间的关系，并借以描述各种球形病毒的衣壳结构，将二十面体的每个等边三角形面划分成较小的单位等边三角形，其数目称三角形剖分数T，病毒的结构类型可以用T 值表示。
T = 3 芜菁黄花叶病毒共有180个蛋白亚基, 其中60个蛋白亚基形成12个五聚体壳粒分布在二十面体的顶点上, 另外120个蛋白亚基形成20个六聚体壳粒分布在二十面体的面与棱上。
1. 2 蛋白亚基局部构象相互作用原理低温电子显微镜研究表明二十面体结构蛋白可能存在几种不同的构象[ 4, 5] , 如噬菌体P22 衣壳蛋白gp5 有7 种构象, 猴病毒SV40 的主要衣壳蛋白V P1 有 6 种构象等。
衣壳装配过程中, 通过蛋白亚基- 蛋白亚基的局部弱相互作用导致蛋白亚基构象间的特异识别及聚合, 这种构象间的特异识别及聚合形成了病毒衣壳自组装的驱动力, 并进而形成一个闭合的二十面体衣壳骨架。
若在蛋白亚基装配过程中有一次识别错误, 则形成衣壳不能闭合的螺旋状结构。
在装配过程中, 首先以一个蛋白亚基为局部环境的中心, 此后陆续进入该局部中心的蛋白亚基则在先前蛋白亚基的构象指令、规定下, 运动到正在构建中的衣壳骨架上相应的位置, 进行装配、排列, 其自身构象在先前蛋白亚基的作用下, 也发生相应的调整。
如此反复进行这种局部构象指导下的装配, 局部骨架不断增大, 最终形成高度有序的、规整的二十面体病毒衣壳的立体几何结构。
1. 3 局部相互作用的连接方式与增长方式病毒衣壳局部相互作用的规则可以用几何图形形象地描述。
如下图2所示。
图2图2表示个构象与其它构象类型可以具有三个局部相互作用。
图2( b) 、(c) 和( d) 分别是构象2、3和4 与周围最邻近亚基构象的连接方式, 它们壳粒间的构象连接可以选择不同的构象进行( 如1/ 3、4/ 2、3/ 4) 。
图2中四种连接方式按其构象指令可以进行交叉匹配, 从而使连接增长。
图 3 即为局部区域增长的情况, 当图3 的局部环境按同一规律不断增大, 最终将形成高度有序的、规整的二十面体病毒衣壳的立体几何构型。
图32 连接规则构筑二十面体病毒衣壳白亚基决定的构象连接与增长规则, 对于不同三角剖分数T 的二十面体病毒衣壳, 都能够建立与之相匹配的局部相互作用, 并进而构筑成其衣壳骨架。
2. 1 T= 1 衣壳T = 1 的二十面体病毒是最简单的球形病毒, 其等同的蛋白亚基只有一种构象, 亚基间的局部连接方式表示在图4( b) 中, 该连接表示了图4( a) 阴影中三个蛋白亚基间的局部相互作用, 20个这样的连接性聚合可以形成60个蛋白亚基的封闭衣壳[ 6]。
（a）（b）图42. 2 T= 3 衣壳T = 3 病毒衣壳的蛋白亚基在表面点阵上占据着三个不等价位置, 其中两个不等价位置上的蛋白亚基构象相同, 用图 5 中标记的 1 表示。
第三个不等价位置上的蛋白亚基的作用类型用 2 标记。
当蛋白亚基开始组装衣壳骨架时, 如果以含有 2 构象的蛋白亚基为装配起点, 经过蛋白亚基反复增长、并以图5( a) 的局部连接方式进行调整, 则T = 3 衣壳立体结构将最终形成。
（a）（b）图52. 3 T= 4 衣壳图2、3 即为局部相互作用的T = 4 病毒蛋白亚基的构象连接方式及增长规律。
蛋白亚基局部相互作用的连接,使得壳粒间除了有4- 4- 4构象形成的三重对称的三聚体,还有1- 2- 3构象形成的准三重对称的三聚体(图3)。
按照图2、3的亚基构象连接方式及增长规律模拟得到的T= 4的立体模型与实验结果基本一致[ 7]2. 4 T= 7 衣壳多瘤病毒( T= 7) 360个蛋白亚基VP1 共6个构象, 形成的全部是五聚体壳粒。
6个构象之间的连接如图7所示六种方式, 其中 C 代表亚基的羧基末端, C 所在的边表示五聚体壳粒内蛋白亚基间的局部相互作用, 双边代表在壳粒与壳粒之间可以通过VP1长的、柔性的羧基末端臂而形成双连接相互作用[ 8]。
N代表了氨基末端, 所在的边表示壳粒间蛋亚基间的局部相互作用。
按照图7 所示构象间遵循的连接方式, 使其增长, 得到图8 的部分衣壳骨架。
图8 中实线分别将5个蛋白亚基连接起来, 全部为五聚体壳粒。
虚线表示壳粒间的相互作用。
这样的连接、增长方式不断进行, T= 7 衣壳立体结构将最终形成。
模拟构筑的结果与实验研究基本一致[ 9]。
图7 T = 7 多瘤病毒的构象连接方式示意图图8 多瘤病毒局部连接的增长示意图3 结论在构象差异的基础上, 利用蛋白质—蛋白质之间的局部相互作用, 建立了T = 1, 3, 4, 7 二十面体病毒衣壳结构蛋白之间的连接方式, 分别给出了符合实验事实的T= 4 与T= 7 的立体衣壳模型。
在蛋白质相互作用基础上构筑二十面体病毒衣壳的结构模型, 可以计算蛋白质的作用能及相关作用参数, 为进一步研究二十面体病毒衣壳装配的热力学和动力学课题提供立体结构与拓扑结构的模型支撑, 有关研究工作正在开展中。
