人羊水来源干细胞治疗大鼠卵巢早衰的初步研究

生殖干细胞的研究进展贾天玉;刘龙会;沈豪飞;张学红【摘要】卵巢中始基卵泡是女性的基本生殖单位,也是卵细胞储备的唯一形式.传统观点认为,出生后卵母细胞数量不再增加,随着卵泡的发育、成熟和闭锁,卵母细胞不断耗竭,卵巢功能衰退,从而进入绝经期.随着人类在干细胞研究领域不断深入,应用干细胞治疗相关疾病已成为现实.在临床应用中,骨髓造血干细胞移植成为白血病等血液系统疾病患者的重要治疗方式.近年来,研究人员在成年小鼠卵巢内发现进行有丝分裂的生殖细胞,可能参与卵母细胞再生,这种细胞很可能就是生殖干细胞(GSCs).GSCs的存在为卵巢功能不全、卵巢早衰和恶性肿瘤患者生育力保存及绝经后期女性健康维护带来希望.现就GSCs的研究进展进行综述.【期刊名称】《国际生殖健康/计划生育杂志》【年(卷),期】2019(038)003【总页数】4页(P222-225)【关键词】干细胞;卵母细胞;卵巢;再生;治疗【作者】贾天玉;刘龙会;沈豪飞;张学红【作者单位】730000 兰州大学第一医院生殖专科医院,甘肃省生殖医学与胚胎重点实验室;730000 兰州大学第一医院生殖专科医院,甘肃省生殖医学与胚胎重点实验室;730000 兰州大学第一医院生殖专科医院,甘肃省生殖医学与胚胎重点实验室;730000 兰州大学第一医院生殖专科医院,甘肃省生殖医学与胚胎重点实验室【正文语种】中文生殖干细胞（germline stem cells，GSCs）[1]又称卵巢干细胞（ovarian stem cells）[2]、卵母干细胞（oocytestem cells）[3]或原始生殖细胞（primordial germ cells）[4]。

自胚胎形成后，卵泡便进入自主发育和闭锁的生理过程，该过程不依赖于促性腺激素。

胚胎形成6周后原始性腺开始分化，GSCs不断有丝分裂，细胞数增多，体积增大，称为卵原细胞（oogonia），约60万个。

胚胎形成8～10周原始性腺才出现卵巢结构。

龙源期刊网 羊水干细胞：干细胞研究的漂亮转身作者：张田勘来源：《大众健康》2008年第03期干细胞有新来源——羊水2007年是干细胞研究取得重大突破的一年，尤其是关于羊水的课题。

研究人员认为，从羊水中提出的干细胞，简称AFS，具有激发人体内已知含有的220种专有干细胞中绝大多数并不是全部的潜能，从而可能在胚胎和成人之间的AFS干细胞之间发挥某些作用。

最重要的是，AFS比较容易取得，可以通过产前例行的羊水诊断取得足量的羊水；另外还可在“产后”即产妇生完孩子后取得AFS干细胞。

想想看，现在美国每年就会有400万婴儿降生，AFS具有相当广阔的未来研究前景。

干细胞研究在2007年获得了巨大突破，有几个显著标志，例如，从羊水中获取干细胞，通过转基因方法从皮肤细胞培育类似胚胎干细胞的全能分化的干细胞等。

从羊水获取干细胞被美国《时代》杂志评选为2007年度十大医学突破之一，而皮肤细胞经“基因直接重组”后可以转化成为具有胚胎干细胞特性的细胞则被美国《时代》杂志评为2007年十大科学发现之冠。

从羊水中摄取干细胞人体干细胞分两种类型，一种是全能干细胞，从理论上讲，它可以通过诱导形成人体的任何类型的细胞，也可以说能直接克隆人体。

另一种是多功能干细胞，可复制各种内脏和组织。

全能分化的干细胞无疑对于人类是一件很大的幸事，因为干细胞在治疗白血病、癌症、白癜风、心脏病、帕金森氏综合征、糖尿病、皮肤烧伤、老年性痴呆等人类许多顽症方面都有不可替代的重大作用。

在上个世纪末的1999年，美国《科学》杂志甚至把干细胞研究评为21世纪10项重要的研究领域之首，而且位居人类基因组计划之上。

但是，干细胞研究一直被伦理困扰。

因为，要获得全能分化的干细胞似乎非胚胎干细胞莫属。

而从胚胎中提取干细胞又为世界多数国家的伦理和文化所不容。

美国虽然引领着世界科技的潮流，但在干细胞研究上被伦理卡得最死。

这体现在总统布什两次否决了推进和批准干细胞的议案。

布什于2006年7月19日首次否决了支持胚胎干细胞研究的法案，理由是这项法案支持利用无辜的人类生命为其他人牟取医学利益，谋杀(胚胎)是错误的。

由于现代生活压力大，许多女孩二三十岁的就出现了类似更年期的症状，如困倦、易怒、阴道干涩、性欲下降、失眠多梦、月经紊乱等，有人以为这是工作太累引起的，不用过于在意，可实际上，女性在非更年期出现更年期症状，可能预示着卵巢早衰！卵巢功能早衰（POF）是指女性40岁之前由于多种病因出现卵巢萎功能衰竭，被认为是导致不孕的“不治之症”。

卵巢早衰对女性生殖健康的两大威胁主要是雌激素水平降低及生育能力丧失，雌激素水平降低增加了女性患骨质疏松和冠心病的危险。

而处于生育期的女性提早闭经、生育能力丧失，容易出现抑郁、焦虑等心理问题。

该病的诊断标准是指: 40岁以前出现至少4个月以上闭经, 并有2次或以上血FSH>40U/L (两次检查间隔1个月以上) , 雌二醇<73.2pmol/L。

这种疾病的发病率在育龄女性中超过１％，且近年来呈上升和年轻化趋势。

没有一种有效的治疗方法能够根治POF，间充质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类多能干细胞，具有强大的增殖能力和多向分化潜能、免疫调节功能、异体移植排异较轻、配型要求不严格、易于分离和培养等优势。

脐带间充质干细胞治疗POF的研究进展脐带间充质干细胞（UCMSCs）是目前干细胞研究领域最热的成员之一，具有取材容易，对母体创伤小，污染概率低，无免疫原性等优势特点。

朱少芳等人研究发现人脐带间充质干细胞可以在损伤的大鼠卵巢中存活，迁移，能部分改善建模后大鼠的性激素水平，减轻对卵泡的损伤，卵巢注射组和尾静脉注射组部分大鼠能生育幼鼠，其后代生长发育良好。

还有研究发现，将UCMSCs通过尾静脉注射到小鼠体内，可以提高卵泡的数量，改善卵巢的功能。

UCMSCs 是目前最有可能应用于临床治疗卵巢早衰的生物制剂。

骨髓间充质干细胞（BMSCs）治疗POF的研究进展骨髓间充质干细胞（BMSCs）是被广泛应用和研究的一类干细胞之一。

范雪等人研究发现BMSC可以维持血清中各种雌性相关激素的正常水平，消除由顺铂类物质对卵巢造成的早衰，促进卵泡的发育，改善并增强卵巢功能。

卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）是指女性在40岁前由于卵巢内卵泡耗竭或被破坏，或因手术切除卵巢而发生的卵巢功能衰竭，且以低雌激素及高促性腺激素为特征，表现为继发性闭经，常伴有围绝经期症状。

POF病因复杂，主要包括遗传因素、自身免疫性疾病、医源性损伤（放疗、化疗、手术）或特发性原因引起。

目前，POF治疗主要采用雌、孕激素序贯治疗和连续治疗、中医药治疗、高压氧暴露、基因治疗和免疫学病因治疗，但均未见突破性进展且不良反应很多，故尚无有效治疗POF 的根本方法。

干细胞的基础研究和临床探索为POF治疗开辟了一条崭新的道路。

研究人员用绿色荧光蛋白标记的UCMSCs移植至化疗性POF 大鼠卵巢内，研究UCMSCs 在移植鼠体内各脏器的分布特点，探讨UCMSCs 在体内向生殖细胞分化及用于化疗性POF 治疗的可能性。

采用6 ~ 8 周龄近交系SPF 级雌性Wistar大鼠建立动物模型，将其腹腔内注射环磷酰胺（CTX）。

建模结束当天即实施UCMSCs 移植。

大鼠麻醉后行开腹手术，暴露双侧卵巢，1 ×106 个UCMSCs 用20 μL 生理盐水悬浮成单细胞悬液，用1 mL 注射器抽取后直接注射至卵巢内。

移植细胞存活情况观察。

在移植后第1 天、15 天、30 天分批处死大鼠，留取卵巢、心脏、肝脏、肾脏、肺标本，固定后切片，荧光显微镜下观察有无绿色荧光及其分布情况。

Ad－GFP感染UCMSCs后表达的绿色荧光实验结果表明，卵巢局部移植UCMSCs 后，在卵巢局部可见到较多较强的绿色荧光，说明UCMSCs 能够在卵巢组织中定居、分布，具有向创伤组织定向趋化迁移的能力，从而参与损伤组织结构及功能的修复。

绿色荧光主要分布在卵巢间质，表明移植的UCMSCs 并未直接参与或作用于卵泡的发育，移植细胞分化为卵细胞的可能性很小，推断其修复作用可能是通过间接途径实现。

干细胞是现如今治疗疾病和保养最有效的方式，但是在治疗的时候一定要选择指定的正规公立医院进行治疗，如今市面上干细胞机构太多谨防上当，如果您需要干细胞治疗的可以加我V：xibaozl，北京解放军总院301医院实验室治疗，安全有保障，谢谢配合！UCMSCs 移植后卵巢组织学观察A：移植后第1 天；B：移植后第60 天体内示踪结果表明卵巢局部移植的UCMSCs 可进入其它脏器及组织，肺、脾脏内可见到较多的绿色荧光细胞，在心、肝、肾脏组织内也可见到散在分布的绿色荧光细胞。

补肾活血方对卵巢功能早衰大鼠卵巢组织外泌体相关膜蛋白的影响 作者：李涵 刘慧萍 肖贾丽珏 杨开锋 辛雨霏 来源：《湖南中医药大学学报》2022年第06期 〔摘要〕 目的 观察补肾活血方对卵巢功能早衰模型大鼠卵巢组织中外泌體相关膜蛋白表达情况及卵巢组织形态和功能的影响。方法 选取30只大鼠，腹腔注射顺铂建立卵巢功能早衰模型，造模成功后随机分为模型组、阳性对照组和中药低、中、高剂量组，每组6只。另取6只大鼠为空白组。空白组和模型组大鼠每天灌胃蒸馏水;中药低、中、高剂量组分别按每天9.72、19.44、38.88 g/kg剂量补肾活血方灌胃;阳性对照组大鼠按每天0.09 mg/kg剂量灌胃给药戊酸雌二醇片，连续21 d。每周称体质量，计算体质量增量，每天观察大鼠动情周期。末次给药后于第2天取血和卵巢、胸腺、脾脏，称脏器质量，计算脏器指数;ELISA检测大鼠血清中雌二醇（estradiol 2， E2）和抗米勒管激素（anti-Müllerian hormone， AMH）水平变化含量;HE染色观察卵巢形态变化;免疫组织化学法检测卵巢组织中外泌体膜蛋白CD63、CD81、CD82的表达水平;透射电镜观察大鼠外周血外泌体形态;Western blot检测大鼠外周血外泌体相关蛋白。结果 与空白组相比，模型组动情周期紊乱、AMH和E2减少（P<0.05，P<0.01），体质量和体质量增量明显减少（P<0.01），卵巢指数、胸腺指数明显减少而脾脏指数明显升高（P<0.01），卵泡数和成熟卵泡明显减少，闭锁卵泡增多，卵巢组织CD63、CD81、CD82蛋白表达明显下降（P<0.01）。与模型组相比，中药中、高剂量组和阳性对照组AMH和E2显著升高（P<0.01），中药高剂量组和阳性对照组动情周期恢复正常，体质量及体质量增量明显升高（P<0.01），卵巢指数、胸腺指数明显升高而脾脏指数降低（P<0.05，P<0.01），给药组卵泡数依次增多，中药高剂量组和阳性对照组蛋白表达明显升高（P<0.01）。透射电镜和Western blot证明大鼠外周血外泌体提取成功。结论 补肾活血方可以明显改善卵巢功能早衰的情况，其改善卵巢形态和功能的机制可能与提高外周血和卵巢中外泌体活性有关。

SDF-1／CXCR4轴在间充质干细胞治疗卵巢早衰中的研究进展柳颖灵;刘炜;纪亚忠【摘要】Premature ovarian failure (POF)causes serious damage to mental and physical health in middle-aged women,especially in childbearing-aged women.However,there is currently no effective treatment for POF.In recent years,the transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs)has been considered as the effective treatment for POF.MSCs have characteristics of low immunogenicity,transferability and strong tissue repaircapacity.Therefore,MSCs have important value in the treatment of many diseases.Stromal cell derived factor-1(SDF-1)and its cognate re-ceptor CXC chemokine receptor 4(CXCR4)play an important role in the migration of MSCs.The induction of homing of MSCs to ovary by regulating SDF-1/CXCR4 may exert the curative effect on POF to greatest extent.In this paper,we review the regulation mechanism of homing of MSCs to provide theoretical basis for the application of MSCs in the treatment POF.%卵巢早衰（POF）目前尚无有效的治疗手段，采用间充质干细胞（MSCs）移植治疗 POF 取得了一定的效果。

羊胎盘干细胞应用于临床治疗的研究随着科学技术的不断发展，干细胞治疗成为了近年来备受关注的热点领域。

羊胎盘干细胞作为一种重要的种类之一，其在临床治疗中也得到了广泛的关注和应用。

本文将介绍羊胎盘干细胞的来源、特点以及其在临床治疗中的研究进展。

1.羊胎盘干细胞的来源和特点羊胎盘是一种独特的组织，具有重要的生物学功能。

从胎盘中提取出的干细胞称为羊胎盘干细胞，其具有以下特点：（1）来源广泛：羊胎盘干细胞可以来源于妊娠期任何时期的胎盘组织，其获得方法简单，不会产生法律、道德等方面的争议。

（2）容易扩增：羊胎盘干细胞有较强的自我复制和自我更新的能力，能通过体外培养等手段扩增。

（3）多向分化：羊胎盘干细胞具有多向分化的潜力，可以转化为神经细胞、心肌细胞、胰岛细胞、肝细胞等多种细胞类型。

2.羊胎盘干细胞在临床治疗中的研究进展（1）神经系统疾病的治疗羊胎盘干细胞作为神经元前体细胞，可以通过多向分化转化成神经元，有望应用于神经系统疾病的治疗。

在几种神经系统疾病的动物模型实验中，羊胎盘干细胞的应用均显示了良好的治疗效果。

例如，在中风、帕金森病和脊髓损伤等疾病的治疗中，羊胎盘干细胞均可有效改善病情。

（2）心血管系统疾病的治疗羊胎盘干细胞还可以转化为心肌细胞，因此在心血管系统疾病的治疗中也具有潜力。

研究表明，羊胎盘干细胞移植可以有效促进心肌细胞再生和增殖，从而改善心肌梗死等疾病患者的病情。

（3）其他疾病的治疗除了神经系统和心血管系统疾病，羊胎盘干细胞还可以用于治疗多种疾病。

例如，其可以转化为胰岛细胞，应用于糖尿病的治疗；还可以转化为肝细胞，应用于肝硬化、肝炎等肝脏疾病的治疗。

近年来，羊胎盘干细胞还被应用于治疗白血病、骨髓再生障碍等血液系统疾病，展示了广泛的应用前景。

3.结语羊胎盘干细胞作为一种重要的干细胞来源，其在临床治疗中具有广泛的应用前景。

虽然目前仍存在一些技术难题和道德审查等问题，但其治疗效果的良好表现让人们坚信，在未来的研究中，羊胎盘干细胞将会为患者的临床治疗带来更大的希望。

不同来源诱导剂建立的卵巢早衰动物模型的比较目的比较不同来源的诱导剂建立的卵巢早衰动物模型。

方法选取97只雌性SD大鼠分别给予120 mg/kg的环磷酰胺、白消安、35%半乳糖食物丸，制备卵巢早衰动物模型。

通过观察体重变化，激素血清浓度水平，卵巢病理切片等分析数据。

结果单次给药环磷酰胺后，大鼠体重增加非常缓慢，卵巢受损；随着血清LH浓度上升趋势，血清E2浓度下降趋势和受损的卵巢，35%半乳糖食物颗粒饲喂的大鼠体重增加缓慢，其中白蛋白和总蛋白以及受损的卵巢的血清浓度显著升高（P＜0.05）。

结论不同诱导物可产生不同特征POF模型，为进一步研究提供有效的实验依据。

标签：大鼠；卵巢早衰；动物模型卵巢早衰（POF）是指40岁以前卵巢早衰或卵巢功能衰退，主要发生在平均绝经年龄前两年的标准偏差人口，其原因可能与内源性基因，异常自身免疫，感染，医疗疗法等影响有关。

POF具有明显异质性及显着遗传性。

染色体异常被一直被认为是POF的常见原因。

基于POF基因组学致突变大鼠模型在探索，且不同模型之间存在较大差异，因此在探索POF治疗方法时很难选择合适的动物模型。

本文通过比较不同方法致大鼠卵巢早衰动物模型之间的差异，为POF治疗进一步研究提供实验依据。

1 材料和方法1.1 一般材料环磷酰胺由上海金穗生物有限公司提供。

35%半乳糖食品颗粒由南通营养饲料有限公司提供。

1.2 研究方法雌性大鼠在室温（22±2）℃和相对湿度（50±10）%的标准实验室条件下培养12 h光暗周期，水和食物随意提供。

每只大鼠的平均食物消耗为28g。

所有手术均在戊巴比妥钠麻醉下进行。

将体重约为（180～200）g的56只SD大鼠分成A、B、C组，A组大鼠用120 mg/kg的溶于0.9%盐水溶液中的单次腹膜内注射环磷酰胺处理，B组大鼠用单一的用0.9%盐水溶液以12 mg/kg的剂量自发注射白消安注射液，C组大鼠为对照组，用0.9%盐水溶液腹膜内处理。