蟾皮的提取和含量测定及临床应用研究进展_黄玉叶

第29卷第7期2011年7月中华中医药学刊CHINESEARCHIVESOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEVol．29No．7Jul．2011

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蟾皮的提取和含量测定及临床应用研究进展黄玉叶，宋霄宏（浙江中医药大学，浙江杭州310053）

摘要：为更好地规范蟾皮的生产、质量标准制定及保证临床用药的安全有效，从蟾皮的理化性质、提取工艺、定性、定量及临床应用加以分析和综述，并指出目前蟾皮及含有蟾皮的中药制剂在生产过程、质量标准制定及临床应用中存在的问题，以期可为蟾皮加工炮制、生产和临床安全用药的进一步研究与开发提供参考依据。关键词：蟾皮；化学成分；提取工艺；含量测定；临床应用中图分类号：R284．1文献标识码：A文章编号：1673－7717（2011）07－1636－03

ResearchProgressontheExtraction，ContentDeterminationandClinicalApplicationfromtheSkinofBufoBufoGargarizan

HUANGYu-ye，SONGXiao-hong（ZhejiangChineseMedicalUnivesity，Hangzhou310053，Zhejiang，China）

Abstract：Tobetterregulatetheproduction，makethequalitystandardandensurethesafetyandutilityinclinicalmedicationoftheskinofBufobufogargarizan，thisreviewintroducedandanalyzedphysicochemicalpropert，extractiontechnology，qualitystandardandclinicalapplicationoftheskinofBufobufogargarizanandpointedoutthecurrentques-tionontheskinofBufobufogargarizansanditsTraditionalChineseMedicinepreparationduringtheproductionprocess，determiningthequalitystandardandclinicalapplication，inordertoprovidebetterreferenceforfurtherexploitationandresearchonprocessing，productionandthesafetyofclinicalmedicationofskinofBufobufogargarizans．Keywords：SkinofBufobufogargarizans；Chemicalconstituents；Extracttechnology；Contentdetermination；Clini-calapplication

收稿日期：2011－02－23基金项目：浙江省科技厅资助项目（2007C33048）作者简介：黄玉叶（1986－），女，浙江温州人，硕士研究生，研究方向：中药新药及中药质量标准研究。通讯作者：宋霄宏（1954－），女，山东泰安人，研究员，研究方向：中药新药及中药质量标准研究。

蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍BufobufogargarizansCantor的干燥皮［1］。蟾皮性凉、味辛、微毒，药理活性强，临床应用广泛，具有解毒消肿、止痛、开窍醒神、抗肿瘤等。在《本草纲目》有“蟾蜍其皮，主治恶疮、破症结、肿毒、肠头挺出和一切恶肿等”。《中药大辞典》中的记载：“蟾皮能清热解毒、消肿止痛，软坚散结”。目前上市产品中如华蟾素片（口服液、注射液）、华蟾素滴丸、鹤蟾片、季德胜蛇药片等均含有本品。由于蟾皮为地方药材，为更好地规范蟾皮的加工炮制、有效成分提取、质量标准的制定及保证临床用药安全、有效，本文从蟾皮的理化性质、提取工艺、定性、定量及临床应用进行分析和概述，以期为生产和临床进一步研究提供参考依据。1蟾皮的化学成分蟾皮的化学成分复杂，主要有蟾蜍甾二烯类化合物，吲哚碱类，甾醇类。其中蟾蜍甾二烯类化合物是蟾皮中的主要有效成分，具有显著的洋地黄样作用、升压作用、呼吸兴奋作用及治疗原发性肝癌、肺癌、肠癌等［2－3］。蟾皮的特殊成分一般与蟾酥相似［1］，含有30种以上甾体类化合物，生理活性物主要是蟾蜍毒素及其水解产物蟾毒配基，已知有12种以上蟾毒配基，如酯蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵等；胆甾醇、7－α－羟基胆甾醇、麦角甾醇等；含7种以上吲哚类衍生物，如蟾蜍噻咛、蟾蜍色胺、去氧蟾蜍色胺等。蟾皮除了含上述成分外，还含有色氨酸吡咯酶、多种喋啶类衍生物。杨立宏等［4］对蟾皮化学成分进行研究，分离并鉴定了5种化合物，根据分析确定为蜍蟾灵3－丁二酰精氨酸酯、华蟾毒精3－丁二酰精氨酸酯、酯蟾毒配基3－丁二酰精氨酸酯、蟾蜍噻咛、光色素。代丽萍等［5］对蟾皮水溶性成分进行了系统研究，从水提物中分离得到6个化合物：4－氨基－3－羟甲基－环辛酰胺骈四氢－α－呋喃酮（蟾蜍环酰胺B，I）、蟾蜍环酰胺C（Ⅱ）、蟾蜍噻咛（Ⅲ）、去氢蟾蜍色氨氢溴酸盐（IV），辛二酸（V），丁二酸

（VI），其中化合物I和Ⅱ为新化合物。2提取方法

蟾皮的主要提取方法有超声提取法、加热回流提取法、室温浸渍法等。2．1超声提取法

超声提取可使药材中的有效成分能直接与溶剂接触并溶解在其中，提高有效成分的提取率。超声提取法在中药提取中已具有明显的优势，应用广泛。李淑盈［6］等采用超声提取心可宁胶囊中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基成分，并测定其含量。超声技术的介入能显著缩短浸提时间，加快传质效率，提高有效成分的浸出，且能保证其稳定性。超声波具有高效、节能、降低工艺成本且安全性大的特点，可以作为实验室和大生产的提取工艺。但超声波发生

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器工作噪音比较大且对提取容器的要求较高，这些问题还有待进一步解决。2．2加热回流提取方法加热回流提取法是中药提取中常用的方法，优点就是可以使溶剂气化冷凝后再回到容器内达到反复循环的作用。用醇回流提取克服了蟾皮的酯毒内酯类成分水不溶性的缺点，减少溶剂及有效成分的损失，工艺科学合理，适合于大生产。赵大洲［7］等在对中华大蟾蜍蟾酥与蟾皮化学成分进行比较分析时采用了回流提取法，并将提取后的样品溶液经等体积石油醚萃取，大孔树脂纯化分离、除杂后，蟾蜍二烯内酯在TLC色谱中展开效果理想，斑点清晰，分离效果好。王晓娟［8］等以酯蟾毒配基为指标，氯仿为溶媒，采用索氏回流法提取并测定蟾皮水烫制品的含量，明显高于生品。代丽萍［5］等在研究蟾皮化学成分的分离与结构鉴定，将蟾皮用95%的乙醇回流提取，回收溶剂，将乙醇提取物以水进行反溶，吲哚生物碱等水溶性物质减压浓缩，进行减压硅胶柱色谱，分别以氯仿－甲醇－水（9∶1∶0．5；8∶2∶0．5；8∶3∶0．5）、甲醇洗脱，并对洗脱液进行处理，用于结构鉴别，结果表明所得成分与文献吻合。2．3室温浸渍法艾颖娟［9］等测定蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基、华蟾蜍精等成分的含量时在蟾皮药材中加10倍量甲醇溶液，室温浸渍24h，滤过，回收甲醇，减压浓缩干燥至恒重，同时考察了不同提取方法，经含量测定结果表明，以室温浸渍法为最佳提取方法。室温浸渍法工艺简单，操作方便。但要注意提取溶剂的使用，如果用水提取，提取液容易发霉变质，因此有时需要加入适当的防腐剂。3定性鉴别与含量测定3．1定性鉴别3．1．1理化鉴别［1］（1）甾体类反应：取蟾皮粗粉0．1g，加氯仿5mL，浸泡1h，滤过。滤液，蒸干，残渣加醋酐少量溶解，滴加硫酸初显蓝紫色，渐变蓝绿色。（2）吲哚类反应：取蟾皮粗粉0．1g，加甲醇5ml，浸泡1h，滤过。取续滤液2mL，加对二甲氨基苯甲醛固体少许，滴加硫酸数滴，即显蓝紫色。3．1．2薄层鉴别汪启虎［10］对蟾皮进行薄层鉴别，以正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）为展开剂，以2%对二甲醛盐酸溶液为显色剂，结果供试品溶液和对照品溶液在薄层板相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。杨世高等［11］对药材蟾皮进行定性鉴别，分别制备蟾皮供试品、对照品及阴性对照溶液，取上述溶液各5μL，分别点于硅胶G薄层板上，以环己烷∶氯仿∶丙酮（4∶3∶3）作为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液作为显色剂，在365nm波长下显示荧光斑点。3．2含量测定蟾皮的含量测定方法主要有高效液相色谱法和薄层色谱扫描法。据研究结果表明［12］华蟾毒基（约5%）、脂蟾毒配基（约3．4%）是2个主要的蟾蜍内酯类化合物。将蟾毒内酯类作为含量测定的质量控制指标，是目前检测蟾皮及含蟾皮复方中药制剂的常用的方法。3．2．1高效液相色谱法高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对样品的分析。该方法已在化学、医学、工业、农业等个学科领域得以广泛应用。苏永华［13］等以Econosphere－C18柱为色谱柱，以乙腈－水（50∶50）为流动相，用高效液相色谱法分离测定华蟾

素注射液中蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基等成分的含量。取蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基为对照品用甲醇溶解配制成适当标准品溶液，醋酸乙酯分离提取华蟾素中脂溶性成分，经二极管阵列检测，华蟾素浓缩液脂溶性提取物在与对照品几乎相同时间上有峰出现，并且其紫外吸收图谱与对照品的完全相同。经方法学考察证实本实验条件分离效果好，灵敏度高，样品处理方法简便，达到对样品定性、定量检测要求。庄美芳［14］等采用高效液相色谱法测定药材干蟾皮中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量，以Kromasil－C18（250mm×416mm，5μm）为色谱柱；以0．5%

磷酸二

氢钾溶液－乙腈（50∶50），用磷酸溶液调pH3．2为流动相。结果加样回收率为98．35%，RSD为1．48%。胡英等［15］采用相同的色谱条件测定安替可胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾酥配基的含量。加样回收率为96．5%，RSD为0.8%。该方法简便、稳定、重现性好，灵敏度高。艾颖娟，王东［9］等采用高效液相色谱法测定蟾皮中蟾蜍灵、脂蟾毒配基、华蟾蜍精等成分的含量，色谱条件：色谱柱：Diamon-silTMC18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相：甲醇－乙腈－水（体积比为4∶1∶5），流速：1．0mL·min－1，检测波长：