生物技术制药 期末复习.doc
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名词解释 1 .Cassette mutagenesis: 盒式突变(cassette mutagenesis),又称片段取代法(DNA fragment replacement),利用li标基因序列屮适当限制酶切位点,插入备种合适的突变DNA片段,用 以取代目标基因屮特定DNA片段 2. DNA shuffling: DNA改组(DNA shuffling)将DNA拆散后重排,一种模仿6然进化的体 外DNA重组的新技术.这种方法不仅可以对一种基因人为进化,而且可以将具有结构同源 性的几种基因进行重组,共同进化岀一种新的蛋H质.在实验室屮把DNA改组与有效的筛 选方法结合起来可为多领域的应用快速进化基因. 3. Yeast centromeric plasmid:酵母着丝粒载体,一种在YRp质粒结构基础上增加了一段来 白酵母染色体着丝粒DNA片段的载体 4. yeast artificial chromosome酵母人丁.染色体型载体,具有酵母染色体的主要构件包括酵 母染色体自主兰制序列(ARS)、着丝粒序列(CEN)和端粒序列(TEL)。 5. Inclusion Bodies
6. Refolding:
7. Interferon:干扰索是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿寤和免疫调节作用的可 溶性糖蛋白 8. Interleukin: 白细胞介素(interleukin, IL),简称白介素:是由多种细胞分泌的一类具有免 疫调节活性的细胞因了。这类物质主要是市白细胞合成,且主要介导H细胞间的相互作川。 一类低相对分了量的蛋白多肽,通常由一个或几个基因表达合成 9. Antisense technology:反义技术(antisense technology)是采用反义核酸分了(人T合成或生 物合成的DNA或RNA,它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的 靶基因表达的一种手段 10. siRNA :RNAi是一个依赖ATP的过程,在此过程屮,dsRNA (外源或内生)首先被降解为 具3,端有2〜3nt突出、长21〜23bp的小分了双链RNA,这种RNA称为小干扰RNA(siRNA)。 siRNA通过碱基互补配对识别具同源序列的mRNA,并介导其降解。 11. RNAi: RNAi,又称为RNA干扰或RNA干涉;是一种由dsRNA所引起的序列特异性基 因沉默现彖Fire等(1998)发现将dsRNA注入线虫体内后可抑制序列同源基因的表达,并证实 这种抑制主要作用于转录之示,所以又称转录示基因沉默(post transcriptional gene silencing, PTGS)。将这一现象称为 RNA 干扰(RNA interference,简称 RNAi)。 12. Subunit vaccine: 基因丁•稈亚单位疫苗;只含有病原体的一种或儿种抗原,而不含有病 原体的其他遗传信息 13. Virus like particles:病毒样颗粒疫苗(Virus like particles))IJ于免疫的抗原物质模拟了其天 然结构,诱导的体液和细胞免疫反应具有更强的针对性,保护效果更好。 14. Live recombinant vaccine:用基因工程的方法对细菌和病毒进行改造,使Z成为重纟fl活 疫苗(live recombinant vaccine)o这种重组活疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的方法 使Z携带并表达某种特定病原体的抗原决定簇基因,产生免疫原性;也可以是致病性微生物通 过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因以后,仍保持免疫原性 I5.ScFv: ScFv是将抗体重链、轻链V区通过一段连接肽连接而成的抗体V区单链片段。 其连接肽一般为15个氨基酸,序列为(Gly4Ser) 3 16. DsFv: DsFv是在轻链、重链V区适当部位各引入1个半胱氨酸,形成以二硫键固定的 Fv段。其结合能力及稳定性均优于ScFv ,用DsFv构建的免疫制剂己进入临床试用前期 阶段。 17. PNAs:肽核酸(peptide nucleic acids, PNAs):是一种以肽为骨架的DNA类似物,它是 在将 反义寡核廿酸的磷酸一糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物 18. Prodrug: 前药转换体外无或较小活性体内经酶或非酶的作川转化为具有药理作用 的化合物 19. Expression cassette: 表达盒(expression cassette)绘酵母基因表达载体最重要的构件, 主要由转录启动了和终止了纟R成。如果需要外源基因的表达产物分泌,在表达盒的启动了下 游还应该包括分泌信号序列 20. Signal sequence:信号序?lj(signal sequence),是前体蛋白N端一段17〜30个氨基酸残基 的分泌信号肽的编码区;作用:引导分泌蛋白在细胞内沿着正确的途径转移到胞外,对于分 泌蛋H翻译后加工和生物活性有重要意义
阐述题 1・生物技术新药设计的基本策略包括那些? 仿真、类似、结构简化、激活、拮抗、拼合、前药转换、软药代谢、老药新用、化害为利 等。
2、简述基因工程药物研发的基本程序。
构建目的基因DNA重组体 将DNA重组体转入宿主菌构建T程菌 工程菌的发酵 外源基因表达产物的分离纯化 产品的检验
3、表达载体需要具备哪些条件?
能够独立复制.复制能力强,多用松弛型; 具有灵活、便于操作的多克隆位点; 具有方便的筛选标记; 具有强启动了,能为大肠杆菌的RNA聚合酶识别; 具有强终止了; 所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号,即起始密码AUG和SD序列; 一般具有阻遏子,使启动子受到控制 4、什么是反义技术?反义药物包括哪些?
>反义技术(antisense technology)是采用反义核酸分子(人工合成或生物合成的DNA或 RNA,它们能与DNA、RNA互补)抑制、封闭或破坏与疾病发生相关的靶基因表达 的一种手段 > 反义药物分为6类:反义RNA (antisense RNA) 反义寡核廿酸(antisense oligodeoxynucleotid巳s, ODNs) 肽核酸(peptide nucleic acids, PNAS) 核酶(ribozyme)和 DNAzyme Aptamer 小干涉RNA(siRNA 5. 什么是肽核酸?有何特点和结构特征? 肽核酸(peptide nucleic acids, PNAs):是种以肽为骨架的DNA类似物,它是在将反义寡 核普酸的磷酸一糖骨架以肽键取代后得到的一类新型化合物 >其特点:1.与核酸的杂交能力强于核酸间的杂交能力;2.热稳定性高于核酸间的杂 交 体;3.抗酶解能了极强。由于其非肽和非核酸的结构特点,蛋白酶和核酸酶均不 能降解PNA 6、何谓基因治疗?有哪几类?
>基于修饰活细胞遗传物质而进行的医学干预。细胞可以体外修饰,随后再注入患者 体内;或将基因治疗产品岚接注入患者体内,使细胞内发生遗传学改变。这种遗传 学操纵的日的:预防、治疗、治愈、诊断或缓解人类疾病" > 1、体细胞基因治疗(somatic gene therapy) 治疗基因转移到体细胞内使Z表达基因产物,以达到治疗li的 2、生殖细胞基因治疗(gennline gene therapy) 将治疗基因转移到患者的生殖细胞或早期胚胎内的一种基因疗法
7、细胞因子主要包括哪些种类?何谓干扰素?包括哪些类型?如何提高基因工
程干扰素IFN-P的生物学活性? ① 干扰素(Interferon, IFN) 白细胞介素(Interleukin, IL) 集落刺激因子(Colony stimulating factor, CSF) 肿瘤坏死因了(Tumor necrosis factor,TNF) 生长因了 (Growth factor, GF) 趋化因 了(Chemokine CK) 造血细胞因子(Hematopoietic cytokine) 神经营养因子(Neurotrophic factor) >干扰素是由多种细胞产生的具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的可溶性糖 蛋白。 >根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素将其分为2种类型:I型(a, P) 和II型(Y) >用Scrl7替代Cysl7,称为丝氨酸B干扰素(IFN-P Ser),使大肠杆菌的表达产物能 够正确折叠成高活性的IFN・B
8、基因工程重组激素类药物有哪些主要类型?各自的结构特征如何?如何通 过基因
工程技术开发速、常效和高效胰岛素制剂? %1 胰岛素生长激素心素钠及利钠多肽 促性腺激素 >②胰岛素:胰岛素是胰岛B细胞合成和分泌、由A、B两条多肽链借二硫 键连接而成、含51个氨基酸残基的蛋白质激素。A链有21个氨基酸残基, B链有30个;两条肽链有A7-B7和A20-B19的Cys之间形成的两对二硫
键和连,A链内部还有一对由A6-A11的Cys残基形成的链内二硫键 >生长激素:人生长激素(hGH)的主要形式:191个氨基酸的单一多肽链构 成的球形蛋白。在55-165位和182-189位氨基酸Z间有两个分子内二硫 人心钠素(hANP)是由28个氨基酸残基组成的活性多肽,含链内二硫键 (Cys7-Cys23),使ANP分子呈环状结构,除第12位的氨基酸(人为Met, 其它为
lie)外,哺乳动物的ANP高度保守
>促性腺激素:a亚基由92个氨基酸残基组成,寡糖链连接在Asn52和 Asn78位上;0亚基由111个氨基酸组成,寡糖链连接在Asn7和Asn24 ±
9、抗体药物包括哪几个层次?比较细胞工程抗体与基因工程抗体的特点
>多克隆抗体:指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质屮多种抗原决定 簇的多种抗体混合物如:免疫血清 单克隆抗体:由单一-克隆的杂交瘤细胞分泌的抗体 基因工程抗体:利用重组DNA和蛋白质工程技术,对抗体基因进行加工 改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子 >细胞工程抗体:①骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 %1 杂交瘤细胞的筛选 %1 抗体的检测 优点:高度专一;高度存一缺点: 基因工程抗体:模拟全套天然抗体库;避开了人工免疫和杂交瘤技术;可 获得高亲和力的人源化抗体 10、比较大肠杆菌、酵母菌和哺乳动物细胞表达系统的异同?
>基于T7噬菌体R\A聚合酶/启动子的大肠杆菌表达系统 >载体pET-28a的主要构成元件:有T7噬菌体启动子、乳糖操纵子、核糖 体结合位点、6XHis标签序列、凝血酶切割位点、多克隆位点、T7噬菌体 终止子以及乳糖阻遏子序列(lad). pBR322复制子、fl噬菌体复制子、 卡那霉索筛选标记序列等