HPLC测定元胡止痛滴丸中延胡索乙素含量

６４－　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｉｌ　ＴＣＭ　Ｄｅｃ．２０１１　ＶＯ１．１８　Ｎｏ．１２　

ＨＰＬＣ测定元胡止痛滴丸中延胡索乙素含量　

倪琳，杨锡，陈朝晖，朱宇　

（甘肃省食品药品检验所，甘肃省中药品质与安全评价工程技术研究中心，甘肃兰州７３００００）　

摘要：目的建立元胡止痛滴丸中延胡索乙素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对制剂中主要成分　延胡索乙素进行定量分析。色谱柱：ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　Ｃ　（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，５　ｐｍ）；流动相：甲醇：０．０２％磷酸二氢钾和　

０．９６％磷酸氢二钾（用磷酸调ｐＨ值至６．５）＝５５：４　５；检测波长：２８０　ｎｍ；柱温：４０℃；流速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ。结果延　

胡索乙素在０．１１　０～０．８２５　Ｐｇ范围内呈良好的线性关系，平均回收率为９７．３９％，ＲＳＤ＝２．０２％（　＝６）。结论方法准确　可靠，专属性强，结果稳定，重复性好，可有效控制制剂质量。　

关键词：元胡止痛滴丸；延胡索乙素；高效液相色谱法　

Ｄ０Ｉ：１　０．３９６９／ｊ．ｉ　ｓ　ｓｎ．１　００５—５　３０４．２０１１．１２．０２５　

中图分类号：Ｒ２８４．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５．５３０４（２０１１）１２—００６４—０２　

ＨＰＬＣ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　Ｙｕａｎｈｕ　Ｚｈｉｔｏｎｇ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌｓ　ＮＩ　Ｌｉｎ，ＹＡＮＧ　Ｘｉ，　

ＣＨＥＮ　Ｚｈａｏ—ｈｕｉ，ＺＨＵ　Ｙｕ　ｒＧａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｇａｎｓｕ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ　

ＴＣＭ　Ｑｕａｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｓａｆｅｔｙ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００００，ＣｈｉｎａＪ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　Ｙｕａｎｈｕ　Ｚｈｉｔｏｎｇ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ　ｉｎ　Ｙｕａｎｈｕ　Ｚｈｉｔｏｎｇ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　

ＨＰＬＣ．ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　Ｃ１８　ｆ４．６　ｍｍ　Ｘ　２５０　ｍｍ，５　ｇｍ１　ｃｏｌｕｍｎ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｍｏｄｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｍｅｔａｎｏｌ：０．０２％ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ一０．９６％ｐｏｔａｓｓｉｕｍ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ａｄｊｕｓｔｅｄ　

ｐＨ　ｔｏ　６．５　ｗｉｔｈ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ）＝５５：４５，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　４０℃ａｎｄ　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２８０　ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ａｔ　ｔｈｅ　

ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．１１Ｏ—Ｏ．８２５　ｇ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９７．３９％ａｎｄ　ＲＳＤ　ｗａｓ　２．０２％（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅｌｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ａｒｅ　ｓｔａｂｌｅ　ｗｉｔｈ　ｇｏｏｄ　

ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｑｕＮｉｔｙ　ｏｆ　Ｙｕａｎｈｕ　Ｚｈｉｔｏｎｇ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌｓ　ｃａｎ　ｂｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｙｕａｎｈｕ　Ｚｈｉｔｏｎｇ　Ｄｒｏｐ　Ｐｉｌｌｓ；Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ；ＨＰＬＣ　

元胡止痛滴丸由延胡索（醋制）、白芷２味药组成，具有理　氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液５０　ｍＬ，称定重量，超声处理（功　气、活血、止痛的功效，主要用于行经腹痛、胃痛、胁痛、头　率１２０　Ｗ，频率４０　ｋＨｚ）１　ｈ，放冷，再称定重量，用浓氨试液一甲　痛等症…。原标准中含量测定项采用薄层扫描法测定延胡索中　醇（１：２０）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续　

延胡索乙素的含量，在实际检验过程中发现存在如下问题：供　滤液２５　ｍＬ，蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至１Ｏ　ｍＬ量瓶中，摇　试品溶液制备方法繁琐，不利于供试品中延胡索乙素的完全提　匀，滤过，取续滤液，即得。　取；扫描波长为２８０　ｒｉｍ（紫外光区），参比波长为４８０　ｎｍ（可见　２．３　阴性对照溶液的制备　

光区），给实际操作带来困难；薄层扫描法测定重复性差。为更　按供试品的处方和制法，制成不含延胡索的阴性样品，按　好地控制产品质量，本试验建立了高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定　上述供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。　

元胡止痛滴丸中延胡索乙素含量的方法，现报道如下。　２．４　色谱条件及系统适用性试验　１仪器与试药　色谱柱选用：ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　Ｃ　（４．６　ｍｍＸ２５０　ｉｂｍ，５　ｐｍ）：　

ＬＣ一２０１０Ａ型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Ｍｅｔｔｌｅｒ　ＡＥ２４０电子天平。延胡索乙素对照品（批号ｌ　１０７２６—２００４０９），购　

自中国药品生物制品检定所；元胡止痛滴丸样品（批号　

２００８０３０６、２００８０４０２、２００８０４０５）由甘肃陇神戎发制药有限公　司提供；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。　

２方法与结果　２．１对照品溶液的制备　

取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每１　ｍＥ含０．０５５　ｍｇ　

的溶液，即得。　２．２供试品溶液的制备　

取本品（２００８０４０２），研细，取约１　ｇ，精密称定，精密加入浓　流动相：甲醇：０．０２％磷酸二氢钾和０．９６％磷酸氢二钾（用磷酸　调ｐＨ值至６．５）＝５５：４５；检测波长：２８０　ｎｍ；柱温：４Ｏ℃：　流速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：１０　ＬＩ　Ｌ【ｌ　。对照品、供试品以及　

阴性对照色谱图见图１。阴性对照无干扰。　２．５线性关系考察　

分别精密吸取延胡索乙素对照品溶液（５５　ｇｇ／ｍＬ）２、４、　

６、８、１０、１５　ｕＬ，注入液相色谱仪，测定，并以峰面积积分　值为横坐标，对照品溶液的进样量（ｕｇ）为纵坐标，作图，得　

回归方程：ｊ，＝９．３６５　４×１０　Ｘ＋０．０１７　３，，＝０．９９９　８。结果　表明，延胡索乙素在０．１１Ｏ～０．８２５　Ｐｇ范围内呈良好的线性　

关系。

　２０１１年１２月第１８卷第１２期　中国中医药信息杂志　・６５・　

Ｏ　５　０　１０　０　１５　０　２００　２５　０　３００　３５　０　４０　０　４５　０　５００　５５　０　６００　

Ａ　

１　

０　５　０　１０　０　１５　０　２００　２５　０　３０　０　３５　０　４０　０　４５　０　５００　５５　０　６０　０　

Ｂ　

０　５　０　１００　１５０　２００　２５０　

注：Ａ．对照品：Ｂ．供试品；Ｃ．阴性对照：１．延胡索乙素　图１元胡止痛滴丸ＨＰＬＣ图　２．６精密度试验　

精密吸取延胡索乙素对照品溶液１０　ｕＬ，注入液相色谱仪，　连续进样６次，测定延胡索乙素峰面积，ＲＳＤ＝Ｏ．３７％，表明仪器　

精密度良好。　

２．７稳定性试验　

取同一供试品溶液，每隔２　ｈ时间进样１次，结果在１０　ｈ　

内，供试品溶液中延胡索乙素峰面积稳定，ＲＳＤ＝Ｏ．５１％。　２．８重复性试验　

称取元胡止痛滴丸（批号２００８０４０５）６份，每份约１　ｇ，精密　称定，按供试品溶液制备方法制各，在确定的色谱条件下进行　

分析，ＲＳＤ＝０．９４％。　２．９加样回收率试验　

精密称取已知含量（含延胡索乙素１．９８６１　ｍｇ／ｇ）的同一批　号供试品３组，每组２份，每份约０．５　ｇ，精密称定，分别精密加　

入一定量的延胡索乙素对照品溶液，按供试品溶液制备方法制　

备并测定，结果见表１。　

表１加样回收率试验结果（／／＝６）　

２．１　０样品的测定　取３批元胡止痛滴丸，按供试品溶液的制备方法制成供试　

液，分别进样，测得峰面积值，计算延胡索乙素的含量。见表２。　表２样品测定结果（ｍｇ／ｌＯ丸）　

３讨论　３．１提取方法的选择　

曾试验加浓氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液超声处理，过滤，　

滤液蒸干，残渣加：①氯仿；②乙醚；③石油醚溶解，用氨试液　

萃取，弃去氨试液层，将氯仿层蒸干、乙醚层蒸干、石油醚层蒸　

干，残渣加甲醇溶解；④加浓氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液超　声处理；⑤加浓氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液超声处理，滤过，　

滤液蒸干，残渣加水溶解，用稀盐酸调ｐＨ值２～３，用石油醚　（６０￣９０℃）萃取，弃去石油醚层，水层用氨试液调ｐＨ值９～１０，　

用石油醚（６０￣９０℃）萃取，分取石油醚层，蒸干，残渣加甲醇　

溶解；⑥加浓氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液加热回流，滤过，　

滤液蒸干，残渣加氯仿溶解，用氨试液萃取，弃去氨试液层，将　

氯仿层蒸干，残渣加甲醇溶解；⑦加浓氨试液一甲醇（１：２０）混　合溶液加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解。按“２．４”　项下色谱条件测定，测得延胡索乙素含量分别为０．４８８　２、　

０．５３６０、０．４８４２、０．５４６０、０．３３７７、０．５０３９、０．５４５７　ｍｇ／ｇ。　结果表明，７种提取方法其中方法④含量较高，并且提取方法　较简便，故选择方法④作为供试品溶液的制备方法。　

３．２色谱柱的选择　取同一批号样品按供试品溶液的制备的方法用ＣＡＰＣＥＬＬ　

ＰＡＫ　Ｃ１８色谱柱、Ｄｉａｍｏｎｓｉ１　ｃｌ８色谱柱、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ　Ｃｌ８色谱柱　３个不同品牌色谱柱测定，结果ＣＡＰＣＥＬＬ　ＰＡＫ　ｃ　色谱柱测得的　

含量较高，故选用该色谱柱。　３．３流动相的选择　

曾试验甲醇一０．１％磷酸（用三乙胺调节ｐＨ值至６．０）　作　为流动相，结果样品中延胡索乙素达不到基线分离，经多次试　

验，用甲醇一磷酸盐缓冲液（用三乙胺调节ｐＨ值至６．５）作为流　

动相，样品中延胡索乙素达到基线分离。　参考文献：　

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［３］李惠芬，刘芳，朱丽丽．ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定延胡索及其制剂元胡止痛片中延　胡索乙素的含量［Ｊ］．中草药，２００６，３７（１２）：１８１卜１８１２．　

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