耐酸乳酸菌的筛选

乳酸菌菌种的培养筛选方法
简介
本文档介绍了乳酸菌菌种的培养筛选方法。

乳酸菌是一种有益菌，常被应用于食品工业和医药领域。

通过培养筛选方法，可以有效筛选出优质的乳酸菌菌种，以满足特定需求。

培养基准备
1. 选择适合乳酸菌生长的培养基，如MRS培养基。

2. 按照培养基的使用说明准备培养基溶液。

3. 灭菌培养基溶液，可使用高压灭菌器或高温灭菌法。

菌种接种
1. 从已有的乳酸菌菌种中选择适合的菌株。

2. 取一定量的菌种，注意保持无菌操作。

3. 将菌种转移到培养基中，可采用无菌环或吸管接种法。

4. 将接种好的培养基培养物置于恒温培养箱中，保持适宜的温度和氧气条件。

筛选方法
1. pH值筛选：选择适宜pH范围的培养基进行培养，通常在
pH 4-6之间。

2. 温度筛选：通过调整培养温度来筛选适应不同温度的菌种。

3. 抗性筛选：将菌种暴露在一定浓度的抗生素中，筛选出对抗
生素具有抗性的菌株。

4. 发酵性筛选：观察菌种在培养基中发酵的能力，以选择产酸
产气能力强的菌株。

筛选结果评估
1. 观察培养基的菌落形态，如形状、颜色等特征。

2. 测定菌株的生长速度和产酸量等。

3. 利用分子生物学方法进行菌株鉴定，如PCR、16S rRNA测
序等。

结论
通过以上培养筛选方法，可以高效地筛选出优质的乳酸菌菌种。

根据特定需求，可以选择适应不同环境和具有良好生产特性的菌株，为食品工业和医药领域的应用提供基础支持。

以上为乳酸菌菌种的培养筛选方法的简要介绍，希望对您有所帮助。

产酸、耐酸乳酸菌的分离鉴定及益生特性林龙镇;邹卫玲;李安章;朱红惠【摘要】[Objective]To isolate, screen and evaluate Lactobacillus strains with excellent acid-producing ability, and offer materials for application of Lactobacillus in feed industry.[Method]Using acid flavor food as samples, we isolated and screened Lactobacillus strains, initially according to the size of calcium dissolving zone and subsequently according to acid tolerance. The acid-producing abilities, growth characteristics, low-pH and bile salt tolerance, and antibacterial activities of Lactobacillus strains screened out were further studied. [Result]Ten Lactobacillus strains capable of growing at pH 3.0 were obtained. Strain SC3A and DJ3 were identified as L. pentosus, and strain SC15, SC16, DJ9B, DJ10C, SC8, DJ8A, DJ8B and DJ9A were identified as L. fermentum. The acid-producing abilities, fermentation growth rate and antibacterial activities of L. pentosus strains DJ3 and SC3A were significantly superior to those of the L. fermentum stains. The L. fermentum strains DJ8A and DJ9B showed higher tolerance to acid environment and bile salt.[Conclusion]Ten Lactobacillus strains obtained from acid flavor food have strong acid-producing ability, acid tolerance and antibacterial activity, and have application potential in food and feed industries.%[目的]分离筛选高效产酸的乳酸菌Lactobacillus spp.,并进行功能评价,为乳酸菌在饲料行业的应用提供物质基础.[方法]以酸性风味食品为样品来源,以溶钙圈大小为指标进行初筛,以耐酸能力为指标进行复筛,并进一步研究了筛选得到的乳酸菌的产酸性能、生长特性、耐酸、耐胆盐以及抑制病原菌的能力.[结果]获得了10株可在pH 3.0生长的乳酸菌.其中,菌株SC3A和DJ3被鉴定为戊糖乳杆菌L.pentosus,菌株SC15、SC16、DJ9B、DJ10C、SC8、DJ8A、DJ8B和DJ9A为发酵乳杆菌L.fermentum.戊糖乳杆菌DJ3和SC3A的产酸能力、发酵生长速率和抑制病原菌的能力显著优于发酵乳杆菌.而发酵乳杆菌DJ8A和DJ9B的耐酸和耐胆盐能力较强.[结论]从酸性风味食品分离得到了10株具有较强的产酸、耐酸和抑菌能力的乳酸菌,在食品和饲料工业中具有应用潜力.【期刊名称】《华南农业大学学报》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】8页(P95-102)【关键词】乳酸菌;分离鉴定;产酸;抑菌活性;耐酸;耐胆盐【作者】林龙镇;邹卫玲;李安章;朱红惠【作者单位】广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070;广东省微生物研究所/省部共建华南应用微生物国家重点实验室/广东省菌种保藏与应用重点实验室/广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 510070【正文语种】中文【中图分类】S816.3乳酸菌Lactobacillus spp.是一类能发酵碳水化合物产生乳酸的革兰阳性、无芽孢细菌的统称[1]。

《乳酸菌筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响》篇一一、引言随着现代畜牧业的发展，青贮饲料在畜牧业中的地位日益重要。

苜蓿作为青贮饲料的主要原料之一，其发酵过程对饲料的质量和营养价值具有重要影响。

乳酸菌作为青贮发酵过程中的主要微生物，其种类和数量直接影响着发酵的效果。

因此，筛选出优良的乳酸菌株并研究其对苜蓿青贮发酵性能的影响，对于提高青贮饲料的质量和营养价值具有重要意义。

二、乳酸菌的筛选1. 筛选方法乳酸菌的筛选主要通过从自然环境中的样品中分离、纯化、鉴定等步骤进行。

首先，从苜蓿青贮样品中采集乳酸菌，经过一系列的分离纯化操作，得到纯菌株。

然后，通过生理生化试验和分子生物学技术对菌株进行鉴定，确定其种类和特性。

2. 筛选标准在筛选过程中，主要考虑乳酸菌的产酸能力、耐酸能力、生长速度等指标。

产酸能力强的乳酸菌能够快速降低青贮环境的pH 值，抑制其他有害微生物的生长；耐酸能力强的乳酸菌能够在低pH值环境下生存并继续发酵；生长速度快的乳酸菌能够更快地占领青贮环境，抑制其他杂菌的生长。

三、乳酸菌对苜蓿青贮发酵性能的影响1. 发酵过程中的变化添加优良乳酸菌的苜蓿青贮在发酵过程中，其pH值会迅速降低，乳酸含量增加，同时其他有害微生物的数量会减少。

这表明优良乳酸菌能够有效地促进苜蓿青贮的发酵过程，提高其发酵效果。

2. 对饲料质量的影响优良乳酸菌的添加可以显著提高苜蓿青贮的饲用价值。

乳酸菌的发酵作用能够降低饲料中的抗营养因素，提高饲料中蛋白质的消化率；同时，乳酸菌还能够产生一些有益的物质，如维生素等，进一步提高了饲料的质量和营养价值。

四、结论通过对乳酸菌的筛选及其对苜蓿青贮发酵性能的影响的研究，我们可以得出以下结论：1. 筛选出产酸能力强、耐酸能力强、生长速度快的乳酸菌株对于提高苜蓿青贮的发酵效果具有重要意义。

2. 优良乳酸菌的添加可以显著改善苜蓿青贮的发酵过程，降低pH值，增加乳酸含量，减少有害微生物的数量。

3. 优良乳酸菌的添加可以提高苜蓿青贮的饲用价值，降低抗营养因素，提高蛋白质消化率，产生有益物质，如维生素等。

乳酸菌菌种的分离筛选方法解读第一篇：乳酸菌菌种的分离筛选方法解读乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。

为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。

营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。

在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。

通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。

乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。

当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类时，SL培养基常用作为选择性培养基。

对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。

M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。

嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。

其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无鞭毛。

粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。

乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。

革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。

在MRS培养基上菌落小，呈白色。

沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。

乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。

分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。

培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。

乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。

分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。

也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。

一.筛选方法： 1.溶钙圈法：利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。

其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。

耐酸耐胆盐益生乳酸菌的筛选与鉴定吕源玲【摘要】为了筛选出人源性的耐酸、耐胆盐的益生菌,利用含胆盐(0.2%)的5种选择性培养基(TPY、BHI、MRS、SL、乳酸杆菌选择性琼脂培养基),以溴甲酚紫为酸性指示剂,从婴儿粪便中初步筛选出42株耐胆盐的乳酸菌.根据菌株在pH5.0,4.0,3.5的MRS液体培养基中培养时OD值的变化情况,筛选出3株具有较好酸耐受性的菌株.然后通过平板菌落计数方法测定筛选出的3株菌在pH 3.0条件下0~3 h存活率的变化情况,筛选出对酸和胆盐耐受能力最强且最稳定的菌株经16S rDNA分子生物学鉴定为Lactobacillus plantarum.该菌能够作为潜在的益生菌菌株用于后期深入地挖掘其益生功能.%In order to screen human probiotics with the acid and bile resistant abilities, infant stool diluents were spread on five different selective ager plates including TPY, BHI, MRS and SL in this study.42 strains of lactic acid bacteria with certain bile-tolerance were isolated by selective ager media for lactobacilli, supplemented with bile salt (0.2%) and bromcresol purple as an acid indicator.3 strains of lactic acid bacteria with high acid tolerance were further selected from 42 strainsaccording to biomass of their cultured in the MRS liquid medium with pH 5.0, pH 4.0 and pH 3.5 respectively.Then the viability of these 3 strains in MRS medium with pH 3.0 was measured by plate colony count technique, resulting in one of them with the highest acid-and bile salt-tolerance.Then this strain was subsequently identified using 16S rRNA-based molecular biological approaches.The strain was molecularlyidentified to ctobacillus plantarum.The strain could be used as a potential probiotic strain for late digging its probiotic function.【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2017(033)006【总页数】4页(P42-45)【关键词】乳酸菌;耐胆盐;耐酸;筛选;鉴定【作者】吕源玲【作者单位】江南大学食品学院, 江苏无锡 214122【正文语种】中文作为人和动物肠道的正常菌群的益生乳酸菌，具有许多益生功效[1]。

乳酸菌菌种的分离筛选原理乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的益生菌，广泛应用于食品、饲料、医药等领域。

乳酸菌菌种的分离筛选是乳酸菌应用研究中的重要一环，其目的是从大量的混合菌群中筛选出具有优良特性的菌株。

乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括以下几个方面：1. 选择合适的培养基：乳酸菌菌种对营养要求较高，因此选择适宜的培养基是分离筛选的首要步骤。

常用的培养基有MRS培养基、DC培养基等，它们含有适宜乳酸菌生长的营养成分，能提供所需能量和营养物质。

2. 适宜的培养条件：乳酸菌对培养环境的温度、pH、氧气和二氧化碳等条件有一定要求。

通常情况下，乳酸菌分离筛选需要在适宜的温度（一般为30-40）下进行，pH值保持在4.5-7.0之间，氧气和二氧化碳含量适中。

3. 分离方法：乳酸菌菌种的分离常采用传统的分离培养技术，如层析法、稀释平板法、摇瓶培养法等。

其中，层析法是一种常用的快速分离方法，通过将混合菌群在筛选培养基上涂抹或刺激，使不同菌株在筛选培养基上形成分离的菌落。

4. 鉴定鉴别：乳酸菌菌种的筛选与鉴定是不可分割的一步，只有确定菌株的种属和特性才能真正确认其乳酸菌的菌种类型。

目前，常用的鉴定方法包括形态学观察、生理和生化特性检测、分子生物学方法（如PCR技术、16S rDNA序列分析）等。

在乳酸菌菌种的分离筛选过程中，还需要注意以下几个问题：1. 选择样品：样品的选择对于乳酸菌菌种的分离筛选至关重要。

通常情况下，从乳制品、肠道、土壤等环境中寻找潜在的乳酸菌菌种，可以提高分离到优良菌株的几率。

2. 优化培养条件：对于特殊的乳酸菌菌种，可能需要优化培养条件，如调整温度、添加特定的营养成分等，以促进其生长和繁殖。

3. 评价筛选结果：乳酸菌菌种的分离筛选结果需要综合考虑其特性和应用价值。

如菌株的酸奶生产能力、耐酸碱能力、抗菌能力、抗氧化能力等。

总结起来，乳酸菌菌种的分离筛选原理主要包括选择合适的培养基和培养条件、采用适当的分离方法和鉴定鉴别技术。

乳酸菌的分离与筛选具体实验流程1. 引言1.1 背景介绍乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的细菌，它们能够以乳酸为代谢产物进行无氧发酵，并且在食品工业、农业和医学领域具有重要的应用价值。

乳酸菌不仅能够促进食品品质的改善和保鲜，还对人体健康具有积极影响。

然而，目前市面上存在许多商业化的乳酸菌制剂，其有效成分及效果并不尽相同。

因此，研究和筛选出优质活性的乳酸菌种类，具有重要意义和广阔前景。

1.2 研究意义本研究旨在通过分离与筛选方法得到高活性的乳酸菌。

通过该研究可以加深我们对乳酸菌及其作用机制的理解，并为特定领域如食品工业、农业等提供先进的技术支持和解决方案。

此外，筛选出具有优良特性的乳酸菌株也将为开发新型功能性食品、生物农药等领域的产品提供重要支持。

因此，本研究对于推动食品工业、农业发展具有积极意义。

1.3 实验目的本实验主要目的如下：- 收集和处理样品：收集富含乳酸菌的样品，并经过适当处理以提高分离效果。

- 选择与制备分离培养基：根据乳酸菌的特性选择适合的培养基并进行制备。

- 设定分离培养条件：通过调控温度、pH值等参数，确定适宜的乳酸菌分离培养条件。

- 鉴定活性乳酸菌指标：确定评价乳酸菌活性和质量的指标，并进行相关试验和检测。

- 设计与实施筛选试验：根据所选指标设计筛选试验，并在实验中采用相应方法进行实施。

- 可行性评估与结果分析：对筛选试验结果进行评估和分析，并总结可行性及相关优化建议。

通过以上实验流程，我们旨在深入了解乳酸菌的特点及其在不同领域中应用潜力，并为进一步研究和开发具有市场竞争力的乳酸菌产品提供理论和实践基础。

2. 乳酸菌的分离方法2.1 样品收集与处理在乳酸菌的分离研究中，样品的选择和处理十分重要。

我们可以选择不同来源的样品，如发酵食品、生态环境等。

收集样品后，需要进行适当的处理以消除非目标微生物对于乳酸菌生长和筛选的干扰。

常见的样品处理方法包括冷藏、过滤、稀释等。

2.2 分离培养基选择与制备为了促进乳酸菌的分离和生长，在实验中需要选择适宜的分离培养基。

乳酸菌的筛选与鉴定流程1.材料首先要确定目标，即所筛选的乳酸菌来自哪里，例如想要筛选一株果蔬发酵乳酸菌，那我们就得找一个产区或者其他地方自然发酵果蔬的样品。

1.1培养基查找相关文献，菌种生化鉴定用培养基建议查看文献：工业微生物实验手册MRS培养基：牛肉膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，吐温801g/L，葡萄糖50 g/L，乙酸钠5g/L，硫酸镁0.2 g/L，磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸二铵2 g/L，溴甲基酚紫0.4 g/L，酵母提取物5 g/L，琼脂15～20 g/L，pH 6.3～6.7，121 ℃湿热灭菌30 min。

（PS：若自己嫌麻烦，可买现成的MRS培养基）初筛培养基：在MRS分离培养基的基础上，添加0.5%碳酸钙，乳酸调至PH2.0.（加碳酸钙是为了能更好的挑出优势菌，乳酸调至PH2.0也是同样道理）如图：若是乳酸菌菌落旁会有清晰可见的透明圈，这是由于乳酸与碳酸钙反应了。

高盐复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上，添加10%氯化钠和0.5%碳酸钙。

高糖复筛培养基∶在MRS分离培养基的基础上将葡萄糖质量分数提高到30%，添加0.5%碳酸钙。

明胶培养基∶蛋白胨25 g/L，牛肉膏7.5 g/L，氯化钠5g/L，明胶100 g/L，pH7.0～7.2，121∶湿热灭菌15 min。

果蔬发酵培养基∶将苹果、胡萝卜、西瓜、西红柿等水果、蔬菜清洗去皮切分后分别榨汁除渣制得发酵果酱，然后按1∶1∶1∶1比例混合经巴氏灭菌后4 ∶冷藏。

按照混合果蔬汁33.3%、葡萄糖5%、蔗糖5%、氯化钙0.5%、磷酸氢二钠0.05%、磷酸二氢钠0.05%、硫酸镁0.03%、柠檬酸0.1%的配比配制，除果蔬和柠檬酸外其余成分于115 ∶湿热灭菌15 min。

2.方法2.1乳酸菌的分离筛选取产区自然发酵苹果原浆，用0.9%灭菌生理盐水进行10 倍梯度稀释后，吸取适宜稀释度溶液涂布至MRS分离培养基中，37 ∶恒温厌氧培养24h，挑取菌落黄色范围大并具有乳酸菌典型特征的单菌落，进行革兰氏染色观察菌体形态。

《抗真菌特性乳酸菌的筛选鉴定及在酸奶防腐中的应用》篇一一、引言近年来，随着人们对食品安全的关注度不断提高，寻找具有天然防腐特性的食品添加剂已成为食品工业研究的热点。

乳酸菌作为一种常见的益生菌，除了具有调节肠道菌群平衡、促进消化等作用外，还具有显著的抗真菌特性。

本文旨在筛选具有抗真菌特性的乳酸菌，对其进行鉴定，并探讨其在酸奶防腐中的应用。

二、材料与方法1. 材料（1）样品来源：从不同发酵食品中采集乳酸菌样品。

（2）培养基：MRS培养基、抗真菌培养基等。

（3）实验仪器：恒温摇床、显微镜、PCR仪等。

2. 方法（1）乳酸菌的分离与纯化：采用梯度稀释法分离乳酸菌，并利用划线法进行纯化。

（2）抗真菌特性筛选：将筛选出的乳酸菌与常见真菌进行共培养，观察其抗真菌效果。

（3）乳酸菌鉴定：利用分子生物学技术，如16S rRNA基因序列分析等，对筛选出的乳酸菌进行鉴定。

（4）酸奶制备及防腐实验：将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。

三、实验结果1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定通过共培养法，我们从样品中筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌。

经过分子生物学鉴定，确定其种类及特性。

结果表明，筛选出的乳酸菌对多种常见真菌具有显著的抑制作用。

2. 酸奶制备及防腐实验将鉴定后的乳酸菌添加到酸奶中，观察其防腐效果。

实验结果表明，添加了抗真菌特性乳酸菌的酸奶在储存过程中，其菌落总数和霉菌污染率均显著低于未添加乳酸菌的对照组。

这说明抗真菌特性乳酸菌在酸奶中具有良好的防腐效果。

四、讨论1. 抗真菌特性乳酸菌的筛选与鉴定本研究通过共培养法成功筛选出具有抗真菌特性的乳酸菌，并利用分子生物学技术进行了鉴定。

这为进一步研究乳酸菌的抗真菌机制及其应用提供了基础。

此外，这些抗真菌特性乳酸菌的发现也为开发新型天然防腐剂提供了新的思路。

2. 酸奶防腐应用将抗真菌特性乳酸菌添加到酸奶中，可以有效降低酸奶在储存过程中的菌落总数和霉菌污染率，提高酸奶的品质和安全性。