兽医生物制品学ppt课件

➢ 工艺的稳定性
• 培养条件 • 工艺技术（各种参数如种子接种量、培养时间、收
获时间等）
传统病毒类疫苗抗原增殖技术 • 动物增殖 • 禽胚增殖 • 细胞增殖
5、疫苗检验
• 活疫苗
➢ 物理性状（冻干苗） ➢ 无菌检验（纯粹检验） ➢ 鉴别检验：特异性血清中和检验。 ➢ 外源病毒检验（病毒类疫苗）：中和法检验。 ➢ 活菌计数（细菌类疫苗）：平板计数。 ➢ 病毒含量测定（病毒类疫苗） ：EID50、ELD50
或TCID50。
➢ 安全检验：动物或鸡胚（剂量几倍至几十倍） ➢ 效力检验：攻毒保护或微生物含量测定。 ➢ 水份测定（冻干苗）：4%以内。 ➢ 真空度测定（冻干苗）：白色、粉色或紫色辉
光。
• 灭活疫苗
➢ 灭活检验：半成品检测：EID50、ELD50或 TCID50 。
➢ 物理性状：外观、剂型、稳定性、粘度检验。 ➢ 无菌检验：培养基检测 ➢ 安全检验：动物检验 ➢ 效力检验：攻毒保护或测抗体。 ➢ 灭活剂含量测定：化学分析
• 生产过程评价 • 检验结果评价
➢ 安全性 ➢ 效力 ➢ 稳定性
• 临床使用效果评价（国家标准与企业内控 标准差异）
➢ 自家苗？
五、疫苗研究发展方向
• 传统疫苗改进
➢ 精制化（减少副反应）； ➢ 规模化（改进工艺、提高产能、降低成本）； ➢ 耐热化（有利于保存和运输）； ➢ 多联多价化（减少动物应激）； ➢ 高效化（改进疫苗质量，提高内控标准，增强
3、保证措施——管理软件
• 软件：是指企业对管理体系中采用的全部 要素、要求和规定编制成各种制度、标准 和程序形成文件系统，在实施中及时正确 地记录执行情况且保存完整的执行记录。 从组织架构、工作标准到记录（凭证）等 都进行了详细的制定，它是质量控制的重 要保证。

巢式PCR示意图

3.反向PCR(IPCR):
反向PCR用于扩增已 知序列两端的未知 DNA片段，因此一对 引物与常规PCR一样 与已知序列互补但是 方向却是相反的。 IPCR步骤主要包括酶 切、自身连接还化、 扩增和序列分析。
四、聚合酶链反应（PCR）


PCR技术是DNA体外扩增技术，以单链DNA为模 板，在DNA聚合酶的作用下引物沿5‘→3’方向不断延 伸，利用4种dNTP合成新的互补DNA链，然后在高 温下变性为单链，再在低温下使引物DNA片段与其复 性，并在DNA聚合酶的作用下开始新一轮DNA合成。 经如此反复循环（变性－退火－延伸）30~60次左右 就可在短时间内将目的DNA扩增数百万倍。PCR技术 为疾病诊断提供了简便、快速、特异、敏感的检测手 段，适于检测不宜分离培养或含量极微的样品中病原 体特定基因片段的有无，或分析不同样品中此片段的 异同。 为了检测RNA样品可以先进行反转录，然后进行 PCR扩增DNA，这就是RNA的反转录－聚合酶链反应 （RT－PCR）。PCR与酶切图谱分析和分子杂交技术
免疫标记法


抗杂交体标记法：在杂交过程中作为探针的核酸 与其互补的核酸能形成杂交体，杂交体本身具有 一定抗原性，因而可用抗杂交体的抗体并结合带 标记的第二抗体对杂交体进行检测 半抗原标记法：通过对已知核酸片段做一定的修 饰，在探针的某些部位连接半抗原，探针通互补 核酸片段 杂交后，与半抗原的特异性抗体结合， 再通过结合带标记的第二抗体对形成的杂交体进 行检测。
斑点杂交
1、原理及步骤：提取病毒、细菌、Cell DNA ↓ 点样品至膜、干燥、固定 ↓ 探针、DNA变性、杂交 ↓ 洗膜、放射自显影 2、应用： ↓ 1）混合样品DNA 结果分析

细菌疫苗和类毒素制造工艺流程
病毒性组织疫苗制造工艺流程
生物制品的概念
• 利用微生物、寄生虫及其组织成分或代谢产物以及动物或 人的血液与组织液等生物材料研制成的，用于传染病或其 他疾病的预防、诊断和治疗的生物制剂称为生物制品。
兽医临床常用的生物制品及其 应用
种类
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
应用
• 疫苗
• 预防
• 诊断液
• 诊断
• 免疫血清
• 治疗
疫苗
• 概念：使机体产生人工主动免疫的生物制品。
• 抗独特型疫苗：抗独特型抗体，可刺激机体产生与抗原特异性抗体具有同等免疫 效应的抗体，由此制成的疫苗。
• DNA疫苗：将编码保护性抗原的基因与能在真核细胞中表达的载体DNA重组，用重 组的DNA做的疫苗。
• 基因工程活疫苗： • 基因缺失疫苗：是用基因工程技术将毒株毒力相关基因切除构建的疫苗。 • 重组活载体疫苗：是用基因工程技术将保护性抗原基因（目的基因）转移到 载体中，使之表达。 • 非复制性疫苗：又称活—死苗，与重组活载体疫苗类似，但载体病毒接种后 只产生顿挫感染，不能完成复制过程，无排毒的隐患，同时又可表达目的抗 原，产生有效的免疫保护。
生物技术疫苗
• 概念：生物技术疫苗是利用生物技术制备的分子水平的疫苗。
• 种类 • 基因工程亚单位疫苗：用DNA重组技术，将编码病原微生物 保护性抗原的基因导入受体菌或细胞，使其在受体细胞中 高效表达，分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链， 加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗。 • 合成肽疫苗：用化学合成法人工合成病原微生物的保护性 多肽，并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成疫苗 。
• 异源苗：用具有共同保护性抗原的不同种病毒制成的疫苗。例如用 火鸡疱疹病毒（HVT）预防鸡马立克氏病。

同源动物 （如NDV LaSota株）
异源动物 （HVT FC126株）
化学途径
物理途径 生物途径
亚硝基胍 醋酸坨 洗衣粉
高温 紫外线
适应非易感动物 或细胞 杂交减毒
兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
8
制
疫苗验规程》，它是 国家法定标准。
• 疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行 生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料 证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新 《规程》才能进行生产。
LD50 EID50 ELD50 TCID50 血清学实验 攻毒保护实验
稳定性实验
筛选出毒力强、抗原性好、生长稳定、纯净的毒株，用于制备疫苗、诊断液和治疗 用抗体或疫苗效力检验用
冻干、冷冻或冷藏保存
兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
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制
弱毒菌（毒）种的选育
弱毒菌（毒）种的选育
自然弱毒株的分离
人工诱变致弱
• 灌装设备：洗烘连动线、自动灌装加塞联动机；
• 包装设备：扎盖机、帖标机；
• 冷藏冷冻设施设备：冷库、冷柜、液氮罐等；
• 污水废弃物处理设施设备：灭菌柜、消毒罐、污水处理站；
• 检验仪器设施设备：各种显微镜、水分测定仪、二氧化碳
培养箱、生物安全兽柜医生、物制动品学物兽用制房疫苗等生产。和质量控
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兽医生物制品学兽用疫苗生产和质量控
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制
厂房、设施和仪器设备
• 灭菌设备：高压蒸气灭菌柜、干热箱、锅炉等；
• 净化设备：净化机组、无菌室、超净工作台等；
• 微生物培养设施设备：温室、孵化器、细胞培养转瓶机、 各种罐体、生化培养箱等；
• 乳化设备：各种罐体、胶体摸、高压匀浆机等；