下载文档原格式
生物工程开题报告1. 引言生物工程是一门跨学科的科学和技术领域，通过应用生物学、物理学、化学和工程学的原理与方法，研究和开发能够改善生物体功能和性能的新材料、新装置、新工艺和新技术。
生物工程的发展为解决环境问题、改善人类生活质量和推动社会经济进步提供了重要的科学基础和技术手段。
本篇开题报告旨在介绍我的研究课题及研究目标，分析课题的意义和价值，并提出预期的研究方法和研究计划。
2. 研究课题及研究目标本研究拟以生物工程为基础，探索在农业领域中应用生物工程技术改善作物产量和品质的可行性。
研究目标如下：1.分析当前农业领域中存在的问题和挑战，包括产量下降、病虫害的侵袭等。
2.探索生物工程技术在农业领域中的应用潜力，包括基因编辑、转基因技术等。
3.设计和实施一系列实验以验证生物工程技术的有效性和可行性。
4.评估生物工程技术在改善作物产量和品质方面的效果和经济效益。
5.提出相应的政策建议和实施方案，推动农业领域生物工程技术的应用和发展。
3. 课题的意义和价值农业作为人类生活的基础产业，面临着越来越多的挑战，如全球气候变化、土地资源短缺、农药滥用等。
传统的农业生产方式已经难以满足人类对食物的需求。
而生物工程作为一项新兴技术，有着巨大的潜力和广泛的应用前景，能够改变农业的面貌，提高作物产量和品质。
本研究的意义和价值主要体现在以下几个方面：•提高作物的抗病虫性：通过基因编辑和转基因技术，可以使作物具备更强的抗病虫性，减少农药的使用，降低环境污染。
•增加作物产量：通过改良作物的基因，可以提高其产量，满足不断增长的人口需求，改善粮食安全问题。
•改善作物品质：通过调控作物基因，可以提高作物的口感、营养价值和外观，提高市场竞争力。
•推动农业的可持续发展：生物工程技术可以减少农业对土地、水资源和能源的依赖，减少对环境的破坏，促进农业的可持续发展。
4. 研究方法和研究计划本研究将采用实验研究和数据分析相结合的方法，具体步骤如下：1.回顾文献和调研：对农业领域中已经应用生物工程技术的案例进行归纳和分析，了解这些技术在改善作物产量和品质方面的效果和限制。
生物学专业的开题报告新药开发中的生物信息学方法和技术研究一、引言在当今医药领域，新药的研发是一个复杂而又具有挑战性的过程。
随着生物技术的不断发展，生物信息学作为一门新兴的交叉学科，为新药开发提供了全新的思路和方法。
本文将重点探讨生物信息学在新药开发中的应用，介绍其方法和技术在生物学专业中的重要性和前景。
二、生物信息学在新药开发中的应用1. 基因组学基因组学是生物信息学中的重要分支，通过对基因组数据的分析和挖掘，可以揭示疾病发生的分子机制，为新药靶点的筛选提供重要依据。
基因组学技术如基因组测序、基因表达谱分析等已经成为新药研发中不可或缺的工具。
2. 蛋白质组学蛋白质组学研究蛋白质在细胞或组织水平上的表达、结构和功能，通过蛋白质组学技术可以发现潜在的药物靶点，并设计针对性药物。
质谱技术、蛋白质互作网络分析等方法在蛋白质组学中得到广泛应用。
3. 生物信息学数据库生物信息学数据库如基因库、蛋白质库等为科研人员提供了大量的数据资源，帮助他们进行数据挖掘和分析。
这些数据库包含了丰富的生物信息数据，为新药开发提供了重要支持。
三、生物信息学方法在新药开发中的意义1. 加速药物研发过程传统的药物研发过程需要耗费大量时间和金钱，而生物信息学方法可以帮助科研人员快速筛选靶点、设计药物分子，从而加速整个研发过程。
2. 提高研发成功率利用生物信息学方法进行精准靶点筛选和分子设计，可以大大提高新药研发的成功率，降低失败风险，节约研发成本。
3. 探索个性化医疗生物信息学方法可以根据个体基因差异性设计个性化药物，实现精准医疗，为患者提供更好的治疗效果。
四、未来展望随着生物信息学技术不断创新和完善，其在新药开发领域的应用前景将更加广阔。
未来，我们可以预见生物信息学方法将成为新药研发中不可或缺的重要工具，为医药行业带来更多创新和突破。
结语综上所述，生物信息学作为一门前沿交叉学科，在新药开发中扮演着越来越重要的角色。
通过对基因组、蛋白质组等大数据的深度挖掘和分析，生物信息学为新药研发提供了全新思路和方法。
医学生物专业毕业论文开题报告一、选题背景医学生物专业是一门涉及医学和生物学知识的交叉学科，研究生物在医学领域中的应用和作用。
随着医学科技的不断发展，医学生物专业的研究领域也在不断扩大和深化。
本文拟就医学生物专业的相关研究课题展开探讨，旨在深入研究医学生物领域的前沿问题，为学术研究和实践应用提供理论支持。
二、选题意义医学生物专业的研究对于推动医学科技的发展，提高医疗水平具有重要意义。
通过对医学生物的深入研究，可以更好地理解生物在人体内的作用机制，为疾病的预防、诊断和治疗提供科学依据。
同时，医学生物的研究也有助于探索新的医学技术和药物研发方向，为医学领域的创新发展提供支持。
三、选题内容本文拟围绕以下几个方面展开研究：1. 医学生物在疾病诊断中的应用2. 医学生物在药物研发中的作用3. 医学生物与基因工程的关系4. 医学生物在生物医学工程中的应用5. 医学生物在临床医学中的前景展望四、研究方法本文将采用文献综述和实证研究相结合的方法，通过查阅大量相关文献资料，了解医学生物领域的研究现状和发展趋势。
同时，结合实际案例，开展实证研究，验证理论研究的可行性和有效性。
五、预期成果通过本文的研究，预计可以得出以下几点成果：1. 对医学生物在医学领域中的应用进行深入分析，揭示其在疾病诊断、药物研发等方面的重要作用。
2. 探讨医学生物与基因工程、生物医学工程等领域的关系，为相关领域的研究提供新的思路和方法。
3. 展望医学生物在临床医学中的前景，为医学科技的发展和医疗水平的提升提供参考依据。
六、研究进度安排1. 第一阶段：文献综述，对医学生物领域的相关文献进行梳理和分析，了解研究现状。
2. 第二阶段：实证研究，结合实际案例，开展相关实证研究，验证理论研究的有效性。
3. 第三阶段：撰写论文，总结研究成果，撰写毕业论文，并进行答辩。
七、结语本文将围绕医学生物专业的研究课题展开深入研究，旨在为医学科技的发展和医疗水平的提升提供理论支持和实践指导。
开题报告（生物）重庆市渝北区教育科学规划课题“农村高中选修课程的开发研究——食品发酵技术在农村家庭中的应用”开题报告重庆市育仁中学校生物教研组组长、课题负责人叶良明各位领导、专家、同志们：“农村高中选修课程的开发研究——食品发酵技术在农村家庭中的应用”课题是育仁中学承担的重庆市渝北区教育科学“十二五”规划2015年度重点课题，课题批准号: YBJK2013-10。
为了使本课题研究取得较有价值的成果，今天特请各位领导、专家对我们的课题进行开题指导。
现在，我作为本课题负责人代表课题组作如下开题报告，请各位领导和专家指导，请实验教师审议。
一、研究背景与意义（一）研究背景根据《普通高中课程改革方案》和《生物课程标准》的要求，选修课程的开设要因地制宜，具备可行性，要有利于学生的自主选择，有利于培养学生的动手能力和创新精神。
因此我们要在深入了解学校的具体环境，了解其运作机制，认识其规范、制度、人力资源、学生特点等条件下，计划开展适合农村高中学校实际和特色的选修课程开发研究。
（二）研究意义1.实现学生素养提高与能力发展高中生物选修课的基本理念之一是提高学生生物科学素养。
生物科学素养是指参加社会生活、经济活动、生产实践和个人决策所需的生物科学概念和科学探究能力，包括理解科学、技术与社会的相互关系，理解科学的本质以及形成科学的态度和价值观，它反映了一个人对生物核心基础领域中核心的基础内容的掌握和应用水平，以及在已有基础上不断提高自身科学素养的能力。
其核心基础之一使学生应掌握一系列的相关技能，包括操作技能、科学探究一般技能等。
加强课程内容与学生生活以及现代化社会和科技发展的联系，关注学生的学习兴趣和经验。
“食品发酵技术在农村家庭中的应用”这一课题内容加强了与学生生活世界的联系，能够满足学生的兴趣和需要，锻炼学生合作探究、实验设计、操作实施、沟通交流等方面的能力，达到综合实践能力的提高和生物科学素养的提高。
2.促进教师的专业发展与角色转变在课题研究中，力求符合学校的实际和学生的需要，这就要求教师必须提高自己心理素质、专业技术等方面的知识水平，对生物学基础知识、基本技能等进行不断的构建和重组，对教学实践不断地进行反思和探究。
生物开题报告ppt生物开题报告ppt一、引言生物学作为一门研究生命科学的学科，涵盖了广泛的内容，包括生物的结构、功能、进化以及生态系统等等。
本次开题报告旨在介绍我所选择的生物学研究课题，并展示我将在研究过程中采用的方法和预期的结果。
二、研究背景生物学的研究领域非常广泛，涉及到植物、动物、微生物等各个方面。
鉴于我对动物行为和进化的兴趣，我选择了研究动物行为的主题。
动物行为是生物学中一个重要的研究领域，它涉及到动物的交流、社会结构、繁殖行为等方面。
通过研究动物行为，我们可以更好地了解动物的生存策略、适应环境的能力以及进化过程。
三、研究目的本次研究的目的是探究动物行为与环境之间的关系，以及行为对动物生存和繁殖的影响。
通过对不同环境条件下动物行为的观察和分析，我们希望能够揭示动物行为的进化机制，并为保护野生动物和改善人与动物共生关系提供科学依据。
四、研究方法在本次研究中，我们将采用多种方法来收集数据和分析结果。
首先，我们将进行野外观察，通过记录动物的行为表现和环境条件，来探究它们之间的关系。
其次，我们将使用实验室技术，如行为实验和分子生物学技术，来深入研究动物行为的机制和遗传基础。
五、预期结果我们预期本次研究将得出以下几个方面的结果。
首先，我们将揭示不同环境条件下动物行为的差异，以及这些差异对动物生存和繁殖的影响。
其次，我们将探究动物行为的进化机制，包括个体选择、亲属选择和群体选择等。
最后，我们希望能够发现一些新的行为特征和行为模式，为动物行为学领域的研究提供新的视角和理论基础。
六、研究意义本次研究的意义在于增进我们对动物行为的理解，并为生物学和生态学领域的研究提供新的思路。
通过深入研究动物行为，我们可以更好地保护野生动物，促进生态平衡的维持，同时也可以为人类社会解决与动物共生相关的问题提供科学依据。
七、结论生物学作为一门综合性的学科，其研究领域广泛而深入。
本次开题报告介绍了我所选择的生物学研究课题，并展示了我将采用的研究方法和预期的结果。
生物类开题报告引言生物类开题报告是为了设计和开展一项关于生物学的研究项目而准备的文件。
本报告旨在提供详细的研究计划和方法，以及预期的研究结果和目标。
通过开题报告，研究者可以明确研究的背景和意义，阐述研究的假设和研究问题，并确定预期结果和目标。
本文介绍了生物类开题报告的一般结构和建议内容。
背景在开题报告的背景部分，研究者需要对所研究的生物学问题进行详细的描述。
背景部分应包括以下内容：1.问题描述：详细描述所研究的生物学问题，并说明该问题的重要性和研究的现有知识。
2.文献综述：对相关文献进行综述，介绍相关研究的主要发现和已知结论。
3.空白点说明：指出目前存在的研究空白和未解决的问题，说明为什么需要进一步研究。
研究目标和问题在开题报告中，研究者需要明确研究的目标和问题。
研究目标是指研究者希望实现的预期结果，研究问题是指需要解答的具体问题。
在此部分，需要清楚地表达研究的目标和问题，并确保它们与背景部分的描述相一致。
研究设计与方法在研究设计与方法部分，研究者需要详细描述所采用的研究设计和实验方法。
以下是一些常见的实验方法，供参考：1.学科选择：选择进行该研究的学科领域和研究方法。
2.数据收集：详细描述如何收集所需的生物数据，包括样本采集、实验设计和数据记录等。
3.数据分析：说明如何处理和分析所收集的数据，包括统计方法和数据可视化等。
4.实验设计：描述实验的具体设计和操作步骤，包括实验组和对照组的设置、实验条件的控制等。
5.预期结果：根据研究目标和问题，提出预期的研究结果，并解释预期结果的科学意义。
研究计划在研究计划部分，研究者需要制定并描述整个研究项目的时间安排和每个阶段的任务分配。
以下是一个可能的研究计划示例：阶段时间安排任务1 第1-2周文献综述2 第3-4周数据收集3 第5-6周数据分析4 第7-8周实验设计5 第9-10周结果讨论预期结果在预期结果部分，研究者需要根据研究目标和问题，提出预期的研究结果。
生物试验开题申请报告怎么写及范文尊敬的导师：我是您的学生xxx，现就我计划进行的生物试验向您提出开题申请。
我计划的试验题目为“不同温度对植物生长的影响”。
我希望通过这个试验，探究不同温度对植物生长的影响，为植物生长环境的优化供应科学依据。
一、研究背景和意义植物生长受到很多环境因素的影响，其中温度是最紧要的因素之一、不同温度对植物的生长发育、生理代谢和产量等方面都有侧紧要影响。
因此，研究不同温度对植物生长的影响，对于优化植物生长环境、提高农作物产量具有紧要意义。
二、研究目的和内容本试验旨在探究不同温度对植物生长的影响，并分析不同温度下植物的生长情形、生理指标和产量等方面的更改。
具体研究内容包含：1. 设计不同温度处理组，察看植物在不同温度下的生长情况；2. 测量植物在不同温度下的生长指标，如株高、叶片面积、根长等；3. 分析植物在不同温度下的生理代谢更改，如叶绿素含量、呼吸速率等；4. 比较不同温度下植物的产量差别。
三、研究方法和步骤1. 试验料子：选择一种常见的植物作为研究对象，如小麦或豌豆；2. 试验设计：将植物分为不同温度处理组，如常温组、高温组和低温组；3. 温度掌控：利用恒温箱或温室等设备，掌控不同处理组的温度；4. 察看记录：定期察看和记录植物在不同温度下的生长情况，包含株高、叶片面积、根长等；5. 生理指标测定：手记植物样品，测定叶绿素含量、呼吸速率等生理指标；6. 产量测定：收获植物，比较不同温度处理组的产量差别；7. 数据分析：利用统计学方法对试验数据进行分析，得出结论。
四、预期结果和创新点估量不同温度处理组的植物生长情况、生理指标和产量等方面会有差别。
通过对试验结果的分析，可以得出不同温度对植物生长的影响规律，并为植物生长环境的优化供应科学依据。
本试验的创新点在于对不同温度下植物生长的综合研究，旨在全面了解温度对植物生长的影响机制。
五、试验安全和可行性分析本试验所需料子和设备均为常见的试验室设备和植物料子，操作简单、安全可靠。
生物研究报告开题报告开题报告题目：生物研究报告一、研究背景生物是一个广泛的领域，涵盖了从分子层级到生态系统层级的各个方面。
生物研究不仅对于人类自身生存和健康具有重要意义，也对于保护生物多样性、推动环境保护和可持续发展具有重要意义。
因此，进行生物研究具有广泛的学术和实际价值。
二、研究目的本报告旨在通过对生物领域的相关问题进行深入研究，以期深化对生物学科的理论和实践的理解，开展创新性的研究工作，为推动生物学科的发展和应用做出贡献。
三、研究内容1. 研究生物分子层级的结构和功能，探索生物分子在细胞和生物体中的作用和相互作用。
2. 研究生物进化和遗传，探索物种演化的机制和生物遗传多样性。
3. 研究生物生态系统，探索生物与环境之间的相互关系和生态平衡的维持。
4. 研究生物技术和生物工程，开发新的生物材料和生物药物，促进生物科技的应用和发展。
四、研究方法本研究将采用综合的研究方法，包括实验室实验、野外观察和调查、数据分析和建模等。
通过这些方法，可以全面地了解生物系统的结构和功能，并揭示其中的规律和机制。
五、研究预期成果本研究的主要成果包括但不限于：1. 对生物学科相关问题的深入理解和解答；2. 发表高水平的学术论文，提升学术声誉；3. 推动生物学科的发展和应用，为人类健康和环境保护做出贡献。
六、研究计划安排1. 文献综述：对生物学科的相关领域进行全面的文献调研和综述，了解研究前沿和现有研究成果；2. 实验设计和数据采集：制定科学合理的实验方案，并在实验室或野外进行数据采集；3. 数据分析和建模：利用统计学和计算模型等工具对实验数据进行分析，并建立相应的模型来解释研究结果；4. 论文写作和沟通：撰写学术论文，并进行学术交流和沟通，包括参加学术会议和报告。
七、研究的意义和影响本研究将进一步拓展对生物学科的认识和理解，为解决相关生物问题提供科学依据。
同时，本研究的成果将有助于推动生物科技的发展和应用，为人类健康和环境保护做出更大的贡献。
生物开题报告范文生物是拥有动能的生命体，本文将介绍20XX生物开题报告。
20XX 生物开题报告 (1)一、问题的提出《课程标准》在课程理念中指出：在教课活动中培育学生研究能力。
研究性学习是学生自主地获得知识和技术、体验和认识科学探究的过程和方法、形成和提高创新意识、建立科学的价值观的活动过程。
生物学科是一门以实验为基础的学科，实验对培育和提高学生的综合素质起侧重要的作用，关注实验与研究能力表现了要重视学生科学修养的要求 ; 在实验中比较简单表现出学生的灵巧性和开放性。
二、研究目标在生物教课中 , 经过设计一系列合理的实验教课方案来睁开探究性学习的实践研究，以此来认识这些方案对学生研究、创新等综合能力的影响，对教师的一项。
三、研究内容1、学生对研究性学习的认识和现状剖析、检查。
2、设计一系列实验教课方案(1)把考证性演示实验转变为研究性演示实验(2)把考证性演示实验改为研究性学生实验考证性的演示实验不过教师着手、学生察看。
因为教师拥有较高的实验能力，再加上课前的充足准备，实验结果一般都较理想。
虽然它有益于学生成立生物学看法和理解生物学规律，但却不利于培育学生的独创精神和独立工作能力。
而将演示实验改为学生实验，因为学生的知识水平易实验能力错落不齐，实验中简单产生各样与结论不符的不测结果，这必定惹起学生对教材中的实验结论的思疑。
在好奇心的驱遣下，为了确信自己的实验结果而不得不重做实验，直至得出满意的结论。
初、高中生物教材中的某些演示实验，如过氧化氢酶作用的高效性、人呼出的气体、小麦胚芽鞘的向光曲折改为学生研究实验，不单会给学生供给更多的着手时机，给学生充足的时间，充足的自由，让学生充足发挥想象，并且学生在详细操作过程中，还可以有所发现，有所创立。
(3)将考证性学生实验设计成研究性学生实验1)相关实验资料研究经过对实验资料进行研究实验，让学生明确为何教材上的实验要选择此种资料，它能否是最正确资料，假如没有能够换用当地的哪一种资料，资料不一样对实验有什么影响等等，让学生理解一个实验的成功与否与资料的选择是密不行分的。
XX大学本科生毕业论文（设计）开题报告 毕业论文（设计）题目 应用原生质体融合技术构建耐胆盐、耐酸乳酸菌菌株 选题类型 应用基础型 课题来源 自选项目 学 院 生命科学与理学院 专 业 生物科学 指导教师 ××× 职 称 ×× 姓 名 ××× 年 级 2006级 学 号 ××× 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献）
1 立题依据
牛奶的组成最为接近人体母乳，含有人体所需的全部营养成分，营养最为丰富和均衡，在人们的膳食结构中有其它食品无法替代的地位和作用。由新鲜牛奶发酵成的酸奶由于其丰富的营养、特殊的风味、爽滑的质构和良好的生理功能，倍受人们青睐[1]。在当今社会，酸奶早已成为人们茶余饭后的饮料，酸奶所具有的独特功效备受人们喜爱。1908年俄国诺贝尔奖获得者E．Metchnikof提出“酸奶长寿”理论，认为高加索地区居民长寿者多的原因是由于食用大量的含有乳酸菌的酸奶。 乳酸菌是一类可以发酵碳水化合物产生乳酸的细菌的统称，很早就被用来加工和保存食品，不仅可以提高食品的营养价值，改善食品风味，提高食品保藏性和附加值，而且近年来对乳酸菌的研究表明，乳酸菌还有很多特殊的医疗保健作用，如改善胃肠道功能，提高免疫力，维持维生素供应，降低胆固醇，美容，长寿，降血糖等，益生作用突出[2-4]。另外，乳酸菌能产生一系列具有抗菌活性的有机小分子物质，常见的有乳酸、乙酸、丙酸。除了这些具有抑菌作用的初级代谢产物外，益生乳酸菌还产生如细菌素等多种抗菌物质，其中酸性物质和乳酸菌素是最有效的抑菌物质，并通过减少肠道中有毒物质的形成，来帮助人们的延年益寿。 人类的肠道拥有一个丰富而有活力的菌群，至少含有400～500种细菌，益生菌是通过维持或改善肠道菌群平衡而对消费人群具有确实的保健功能的活菌制剂。然而人体胃环境的低pH（有时pH值小于3）下，不利于微生物的生长；同时胆汁进入小肠，也大大影响肠道微生物的生长繁殖。研究发现，酸奶中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌在摄入消化道中后，经受不住强烈的胃酸和胆汁的强烈作用，不能在人体肠道内固定下来和生存增殖。口服乳酸菌若要到达肠道并在肠道内起作用，需要菌体或菌体产生的酶能够通过低pH胃液存活下来，耐受肠道内的胆盐浓度[5]。 因此要求具有一定耐受胆盐、耐受酸度使乳酸菌能够活着到达作用位点，而且它还必须能通过上消化道，并能在肠道中的环境中发挥积极作用[6]；而且益生性乳酸菌可用于治疗肠道菌群失调，以及消化道的通透性增加等症状，而后者是许多肠道失控的主要特征[7]。所以如何构建耐受胆盐和耐受低pH的酸奶发酵剂，是提高酸奶营养价值被机体吸收利用的关键，成为当前研究的重要方向。 近年来，由于乳酸杆菌具有转化率高、产酸快和基因工程可操作性而广泛用于乳酸发酵生产。尤其是基因组洗牌分子技术，此技术是DNA shuffling技术的一个改进，通过改变乳酸菌基因组原有的核苷酸序列，产生新的遗传结构，创造新的基因，并赋予表达产物以新的功能[8]。 目前国内外也做了很多这方面的研究。微生物原生质体融合技术的整个过程包括 ：原生质体的制备、原生质体融合、原生质体再生。国内外学者在每一个关键技术上都做了大量的工作，取得了可喜的成就[9]。并在工业生产中大量应用，尤其是微生物育种方面应用最为广泛。 2 研究的主要内容及预期目标 原生质体融合技术是构建多突变组合微生物的有效工具，可以在短时间内获得多亲本的良好的菌株性状(耐受胆盐、耐受pH特性、快速产酸特性、细菌素产生、良好的风味)的遗传基因的重组菌株，每次原生质体融合都能获得一些有用的遗传多样性，对乳酸菌的育种具有重要意义。 进行原生质体融合时，先用酶脱去两个亲本细胞壁，使菌体细胞在高渗环境中释放原生质体，并在高渗条件下混合，再经聚乙二醇促进，两种原生质体凝集而发生融合，获得异核体或重组子。利用杂合菌可以提高发酵制品的特性或发展新的产品[1]。 将从酸奶和牛场中分离筛选具有一定的pH和胆盐耐受特性的6株乳酸菌进行原生质体的融合，构建耐受高胆盐浓度和低酸度的优良菌株。 在整个实验中，探讨原生质体制备的最优方案成为一个难点，包括菌株预处理时间，酶解条件等；以及用通过互补致死损伤进行原生质体灭活的方案，作为原生质体融合的标记是一个重点；关于原生质体的融合的再生条件是本实验的关键。必须准确把握每个步骤，达到预期目的。 3 研究方案 3.1 实验流程 3.2 实验材料 3.2.1 实验材料
样品及其来源：从牛奶和牛场环境中筛选出6株具有一定耐胆盐和耐酸乳酸菌菌株 PEG6000，溶菌酶 3.2.2 培养基与溶液配制 MRS液体培养基：蛋白胨10克，牛肉浸取物10克，酵母提取液5克，葡萄糖5克，乙酸钠5克，柠檬酸二胺2克，吐温801ml，磷酸氢二钾2克，四水硫酸锰0.25克，七水硫酸镁0.58克，蒸馏水1升。固体培养基琼脂20.0克(进口的15克)，蒸馏水定容至1.0升；半固体MRS培养基，加0.9%琼脂和1%的氯化钙。 再生培养基：不含吐温80的液体MRS，明胶2.5%，氯化镁25mmol/L,氯化钙25mmol/L，蔗糖0.5mol/L，小牛血清0.5%。 选择培养基：在液体MRS基础上调节pH1、pH2、pH3;添加牛胆盐1%、2%、3%。 LBP缓冲液：Tris-HCl 10mmol/L, 氯化钙20mmol/L，蔗糖0.5mol/L,pH6.3 40％聚乙二醇PEG6000溶液用灭菌高渗缓冲液配制，溶菌酶储液用TE配置。 3.2.3 实验设备与仪器 高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，生化培养箱，紫外可见分光光度计、电子天平 3.3 实验步骤
1.0ug/ml青霉素MRS预处理4h 0.6%Gly +0.5ug/ml青霉素液体MRS预处理4h 1.2%Gly液体MRS预处理4h 原生质体高温灭活 原生质体紫外线灭活 2mg/ml溶菌酶酶解1.0-2.0h 耐性筛选 原生质体的融合 再生培养 液体MRS活化菌株、370C过夜培养 3.3.1 原生质体制备 3.3.1.1 菌种活化 将实验室所保存的来自酸奶和牛场的具有一定的耐受胆盐和耐受酸度的乳酸菌，转接于MRS培养基中37℃中过夜培养，进行菌株活化（图1）。
3.3.1.2 菌株前处理 每几株菌过夜培养后新鲜菌液按2%一起接种于5ml分别含1.0%甘氨酸、1mg/ml青霉素、0.5%甘氨酸+0.5mg/ml青霉素MRS液体培养基37℃振荡培养4h（图2）。
3.3.1.3 制备原生质体悬液 取1ml混合培养菌液，离心收集菌体，高渗缓冲液洗涤2次，重悬于高渗缓冲液中，甘氨酸和青霉素预处理的菌体分别添加终浓度为2mg/ml溶菌酶，37℃保温1.0～2.0h，显微镜下观察破壁情况。酶解后当90％以上菌体破壁时，3000r/min离心10min，再用高渗
A B F C D E 图1 MRS液体培养基，37℃过夜培养10～12h，进行菌株活化 ABC 1.2%Gly MRS DEF ABC DEF 0.6%Gly+0.5ug/ml青霉素 ABC DEF
1.0ug/ml青霉素MRS 图2 37℃培养4h至对数期前期 缓冲液洗涤2次，重悬于50ul高渗缓冲液中备用。酶解条件如表1。 表1 各预处理下菌株酶解条件 预处理条件 预处理 酶解 原生质体形成率 1.2%Gly 4h 2h 1.0ug/ml青霉素 4h 1h 1.2%Gly+0.5ug/ml青霉素 4h 1h 3.3.2 原生质体灭活 灭活的双亲原生质体只有通过融合后致死损伤得到互补才能形成融合子，因此采用能引起细胞不同部位的致死作用的热和紫外线灭活方法，热灭活的致死机理是细胞质中蛋白变性，紫外线灭活的机理是核酸(DNA)断裂所致。利用原生质体互补致死灭活作为分子标记。两亲株融合后，损伤可以互补，形成能够生长繁殖的融合子。基因组改组技术应用多母本递进融合，定向筛选具有重要表型特征改变的突变体。作为有效的工业微生物菌种改造技术，可以用于工业微生物复杂表型的改良[ 10-11]。 取悬于缓冲溶液中的1/2原生质体液60℃保温120min，其余1/2紫外线下照射32min，分别灭活。原生质体灭活条件如表2。 表2 原生质体灭活条件 灭活技术 作用部位 灭活时间 灭活率 紫外线 细胞核 32min 高温 细胞质 120min 3.3.3 原生质体的融合 将上述不同方法灭活原生质体混合，在3000r/min条件下离心10min，重悬于50ul高渗缓冲液中，加4.5ml 40％PEG6000，充分混匀，室温下放置6min，加5ml高渗缓冲液稀释PEG6000，终止反应，迅速在3000r/min条件下离心10min，然后洗涤2次，悬于100ul高渗溶液中。 3.3.4 再生培养 将高渗溶液中融合的原生质体转接于再生培养基，在倒好的MRS培养基表面将融合的原生质体涂布均匀，将冷却至50～60℃的再生半固体培养基倒在涂布有融合菌的平板中，37℃避光培养培养24～96小时，每隔一天观察记录融合子形成情况。融合子形成数统计表如下表3 表3 各处理下融合子形成数 预处理条件 1.2%Gly 1.0ug/ml青霉素 1.2%Gly+0.5ug/ml青霉素 融合子形成数 3.3.5 耐受性筛选 胆盐耐受性：将再生的融合菌分别转接于1%、2%、3%胆盐浓度的液体MRS培养基37℃培养4h,吸取筛选菌200ul涂布于MRS平板中，37℃培养24～48小时。 pH耐受性：将高胆盐浓度平板上的抗胆盐菌落分别转接到pH1、pH2和pH3的液体MRS培养基中37℃培养4h后，吸取200ul涂布于MRS平板，37℃培养24～48小时。 3.3.6 稳定培养 将平板上的菌落进行10次传代培养，以稳定其优良特性。 4 论文进度安排 2009年4月20日～5月4日 预备试验，了解熟悉试验流程，掌握试验重要环节和关键步骤 2009年5月6日～5月21日 初步试验和开题报告撰写 2009年6月1日～6月21日 正式试验和开题报告答辩 2009年6月25日～10月30日 完成全部实验 2009年11月1日～12月10日 撰写论文，准备答辩
参考文献 [1] 徐成勇, 郭本恒, 吴昊, 等. 酸奶发酵剂和乳酸菌生物技术育种[J]. 中国生物工程杂志，2004, 7: 186-171 [2] 王玉华, 张桂荣, 刘景圣. 原生质体融合提高嗜酸乳杆菌耐酸及耐胆盐能力[J]. 食品科学，2006, 3(5): 176-182 [3] 郑重谊, 谢达平, 谭周进, 等. 影响微生物原生质体融合技术的因素[J]. 湖南农业科学, 2006, 4: 35-38
