微生物实验复习题

名词解释

1． 干热灭菌:通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。

2． 湿热灭菌：用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法

3． 消毒：是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。

4． 灭菌：采用强烈的理化因素，使任何物体内外部的一切微生物永远丧失生长，繁殖能力的措施称为灭菌。

5． 防腐：利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长，繁殖，即通过抑菌作用防止食物，生物制品等发生霉腐的措施。

6． 培养基：是供微生物生长，繁殖，代谢的混合养料。

7． 细菌：是一类个体微小，有细胞壁的单细胞原核微生物。

8． 霉菌：凡是在基质上长成绒毛状，棉絮状或蜘蛛网状菌丝体的真菌，称为霉菌。

9． 酵母菌：一类所有单细胞的的真核微生物。

放线菌：是原核生物中一类能形成分枝菌丝和分生孢子的特殊类群。

菌苔：当固体培养基表面众多菌落连成一片时变成为菌苔。

菌落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长，繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的，有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。

10 天然培养基：主要以化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物组成的培养基。

选择培养基：选择培养基是用来将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基。

加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培养基。

大题

一、高压蒸汽灭菌使用原理及操作步骤

原理：基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到0.100MPa（1.05kg/cm2）时，水蒸气的温度升高到121摄氏度，经过15~30分钟，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。

操作步骤：1.加水：打开灭菌锅盖，想锅内加水到水位线，立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。主意加水要加够，防止灭菌过程中干锅。

1.装料、加盖：灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，是蒸汽锅密闭，勿使漏气。

2.排气：打开排气口（也叫放气阀）。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5分钟，使锅内冷空气完全排净。

3.升压、保压和降压：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121摄氏度，20分钟）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开排气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降额速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。

4.灭菌后的培养基空白培养：灭菌后的培养基放于37摄氏度培养箱中，经24小时培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

二、培养基配置的操作步骤

1.称量药品

根据培养基配方依次称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白质极易吸潮，故称量时要迅速。

2.溶解

用量筒取一定量（约占总量的1/2）蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻璃棒搅拌，以防止液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他原料，待完全融化后，补足水分。 3.调节pH值

根据培养基对pH值的要求，用5%NaOH或5%HCl溶液调至所需pH值。测定pH值可用pH试纸或酸度计等。

4.融化琼脂

固体或半固体培养基需加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分（水需预热）。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

5.过滤分装

先将过滤装置安装好。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需要在漏斗中多放层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，分装三角瓶，其装量不超过三角瓶容积的50%为宜。

6.包扎标记

培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。

7.灭菌

普通培养基为121摄氏度20分钟，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成分。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，当斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。

8.倒平板

将所需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45~50摄氏度，立刻倒平板。

三、革兰氏染色的原理及操作步骤、结果

原理：G+和G-这两类细胞的细胞壁的结构和组成不同，当用结晶紫初染后，所有细菌都被初染剂染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的，G+的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成。壁厚、类脂质含量低，用乙醇或丙酮脱色时，细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经过脱色和复染后仍然保留初染剂的蓝紫色。G-则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄。类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇或丙酮溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

操作步骤及结果：先用初染剂结晶紫进行初染（1~2min），再用碘液媒染（1min），然后用乙醇或丙酮，脱色（20~30s），最后用复染剂（如番红）复染（2~3min）。进过此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌，如果细胞中初染剂被脱色剂，洗脱而使细菌染上复染剂的颜色（红色），该菌属于革兰氏阴性菌。

四、微生物分离纯化的原理及操作步骤、结果 原理：从混杂微生物群体中获得只含一种或某一株微生物的过程，称为微生物的分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离和纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，或加入某种抑制剂抑制其它微生物生长，只剩于该微生物的生长从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可以通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板画线等技术完成，值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态，才能确定有些微生物的纯培养要经过一系列分离于纯化的过程和多种特征鉴定才能得到。

土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要场地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

操作步骤： 平板画线分离法

1.倒平板

将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏I号琼脂培养基、马丁式琼脂培养基分别加热融化待冷却至55~60摄氏度时，高氏I号琼脂培养基中加入10%酚数滴，马丁式琼脂培养基中加入链霉素溶液（终浓度为30ug/mL），混合均匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿。

倒平板的方法：右手持培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻拔出，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待冷凝后即为平板。用记号笔标明培养基名称、土样编号和实验日期。

2.划线

在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述10-1的土壤悬液一环在平板上划线。先在平板培养基的一边作第一次平行划线3或4条，再转动培养皿约70度角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分做第三次划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。

3.挑菌落

挑选认为纯化为止的微生物

结果

得到霉菌菌落

霉菌形态呈绒毛状、棉絮状或蜘蛛网状的菌丝体，比细菌、酵母菌复杂，个体比较大，具有分支的菌丝体和分化的繁殖器官。

五、酵母菌、各种霉菌的形态图

略（书上124页）

六比较细菌 ， 放线菌，霉菌，酵母菌的菌落 区别 菌落特征

微生物类别 单细胞微生物 菌丝状微生物

细菌 酵母菌 放线菌 霉菌

主

要

特

征 菌

落

细

胞 含水状态 很湿或较湿 较湿 干燥或较干燥 干燥

外观形态 小而突起，大而平坦 大而突起 小而紧密 大而蓬松，小而致密

相互关系 单个分散，有一定排列方式 单个分散，假丝状 丝状交织 丝状交织

形态特征 小而均匀，个别有芽孢 大而分化 细而均匀 粗而分化

参考特菌落透明度 透明，较透明 稍透明 不透明 不透明

菌落与培不结合 不结合 牢固结较牢结征 养基结合度 合 合

菌落正反颜色差别 相同 相同 一般不同 一般不同

菌落颜色 多样 单调，一般呈乳脂或矿蜡色、少数红或黑色 十分多样 十分多样

菌落边缘 一般看不到细胞 可见球状、卵圆状或假丝状细胞 有时可见细丝状细胞 可见粗丝状细胞

细胞生成速度 一般较快 较快 慢 一般较快

气味 一般有臭味 多带有酒香味 常有混腥味 往往有霉味

七 酸奶发酵的原理及操作步骤

原理： 酸奶是经过乳酸菌发酵形成的，乳酸菌分解乳糖产生乳酸，酸奶中所含的乳酸是乳酸链球菌。保加利亚乳酸杆菌，两种是同型乳酸发酵，，发酵后的最终代谢产物，全是乳酸，两种还可以产生双乙酰（风味物质）为厌氧发酵，肠膜状明串珠菌还可以进行乳酸发酵。但有几种代谢产物，肠膜状明串珠菌有荚膜，用于代谢血糖浆

步骤： 1将脱脂乳和水以1:7（w/v），同时加入量为5%的蔗糖，充分混合于80~85（消毒10~15min）然后冷却至35~40。C,，作为制作饮料后培养基质。

2将纯种啫热乳酸链球菌，保加利亚乳酸杆菌及两种等量混合液作为发酵剂，均以10%后接种量分别挤入以上培养基质中即为饮料发酵液，亦可以市售鲜酸乳为发酵剂，接种后摇匀分装到已灭菌后乳酸瓶中，每一种菌后饮料发酵液重复分装，随后用保鲜膜密封口。

3接种后的乳酸瓶置于43。C恒温箱中培养4~5h，培养时注意观察，

食品中测定细菌总数的原理及实验步骤、报告方式

细菌生理生化实验中的原理及操作步骤、结果在出现凝乳后停止培养，然后转入4~5。C的低温下，冷藏15h以上经此后熟阶段，达到