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一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽孢杆菌（枯草、地衣）。
5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽孢杆菌。
1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。
2种注：境中生长最好。
最适温度为37～42℃。
在正常大气或无氧环境中均不能生长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。
三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养，1m3空间用焦性没食子酸10g、10%氢氧化钠溶液l00mL，按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸包好，放在圆柱上。
继而放上隔板,将接种完毕的培养基放于隔板上，同时放美蓝指示剂一管。
盖上缸盖并用石蜡封闭。
再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。
置于温箱37℃培养24一48h观察结果。
2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖,放入密封性较好的玻璃罐(用凡士林封口)，通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。
一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中O2的浓度必须小于1000ppm（千分之一），更严格的环境是小于300ppm（万分之三），本实验室CO2培养箱CO2浓度范围为280-2000ppm，所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
粪便标本肠道致病菌鉴别流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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肠道致病菌的分离与鉴定
一、实验目的
（1）掌握肠道致病菌的分离、鉴定的主要步骤
（2）掌握平板划线分离法
（3）掌握玻片凝集试验的操作方法以及实际意义
二、实验材料
（1）实验仪器：试管、玻片、酒精灯、接种针、接种环、试管架、
（2）实验试剂：生理盐水、细菌培养基、伤寒诊断血清、伊红美蓝
培养基（EMB）、克氏双糖铁培养基（KIA）、葡萄糖发酵管、乳糖发酵
管、甘露醇发酵管、尿素培养基、蛋白胨水、半固体培养基
三、实验流程
（1）肠道致病菌的分离
① 待测标本的制作：把接种环放置于点燃的酒精灯火焰处对其进
行灭菌，用已灭菌的接种环在细菌培养基中取少量待测细菌于盛有
5ml生理盐水的试管中，混匀。
②
细菌的分离接种：用接种环取适量配置好的细菌悬液，在酒精
灯附近进行划线分离法接种细菌于EMB培养基。将培养基置于37℃
培养18~24小时。
（2）肠道致病菌的纯化
①
单菌落接种：从已培养待测细菌的EMB培养基上用已灭菌的接
种针挑取某单个菌落接种到KIA培养基上，一部分直接深入培养基中
底部，一部分直接涂抹于斜面处，置于37℃培养18~24小时。
②
待测细菌的初步判断：取出已纯化培养待测细菌的KIA培养基，
观察现象，初步断定该细菌是致病菌或是非致病菌。
（3）肠道致病菌的鉴定
①
生化鉴定：分别取葡萄糖、乳糖、甘露醇发酵管各一只（注意
管内的小倒管则应充满液体，不含气泡），用已灭菌的接种针取已培
养的KIA培养基上的培养物接种于各发酵管，将各发酵管于37℃培
养18~24小时。取出并观察记录现象。（注意每次使用接种针前都应
用酒精灯火焰进行灭菌）
②
动力检查：用已灭菌的接种针取KIA培养基上的培养物分别接
种于蛋白胨水、尿素培养基、半固体培养基中，将各个培养基于37℃
培养18~24小时。取出后将靛基质（吲哚）加入到蛋白胨水培养基
中，并观察记录现象。（注意每次使用接种针前都应用酒精灯火焰进
行灭菌）
③
血清学鉴定：取洁净玻片一张，将其用蜡笔分为两格，两边各
取生理盐水一滴，再用已灭菌的接种环分别取KIA培养基上的培养物
加入两格中，与生理盐水混匀不摊开。（注意每次使用接种环前都应
用酒精灯火焰进行灭菌）然后在第二格中滴入一滴伤寒诊断血清，混
匀不摊开，轻轻摇动玻片，经1~2min观察两格中有无凝集现象。
注：本实验涉及细菌接种都应在无菌条件下进行，由于条件有限，因
而可在燃烧的酒精灯附近进行实验操作。
四、实验结果与分析
（1）EMB培养基现象与分析：
①
培养基下部呈现黑色现象，上部培养基仍为红色，培养基斜面
有细菌明显蔓延生长。
②
分析：培养基下部出现黑色现象，说明该细菌能够分解培养基
中的物质并产出硫化氢气体，由于培养基中含铁，因而硫化氢能够与
其结合成硫化铁，出现黑色现象；而上部因重力含铁量较少，产生的
硫化氢气体又部分挥发，只有少部分能够与少量铁结合，故产生的现
象不明显，上部仍呈现红色。
（2）生化鉴定现象与分析：
①
葡萄糖发酵管：管内培养基指示剂由紫色变成黄色，其内可见
细菌有明显生长现象，无气泡产生。
分析：培养基指示剂由紫色变成黄色，说明该细菌能够分解葡萄糖并
产酸但不产气，使得指示剂内化学物质发生颜色改变。
②
乳糖发酵管：管内培养基指示剂颜色不发生改变，仍为紫色，
有明显细菌生长现象，无气泡产生。
分析：培养基指示剂不发生颜色改变，说明该细菌能分解乳糖但不能
产酸也不产气，使得管内指示剂无明显现象。
③
甘露醇发酵管：管内培养基指示剂由紫色变成黄色，其内可见
细菌有明显生长现象，无气泡产生。
分析：培养基指示剂由紫色变成黄色，说明该细菌能够分解甘露醇并
产酸但不产气，使得指示剂内化学物质发生颜色改变。
（3）动力检查现象与分析：
①
尿素培养基：管内培养基指示剂颜色无明显变化，但有明显气
泡产生，有明显细菌生长现象。
分析：管内培养基指示剂无明显颜色改变，说明该细菌不能分解尿素，
但培养基中其他物质成分可以使细菌分解产气，因而产生气泡。
②
蛋白胨水：管内指示剂颜色无明显变化，有明显细菌生长现象，
无气泡产生。加入靛基质（吲哚）试剂后不出现玫瑰红色。
分析：加入靛基质指示剂后不呈现玫瑰红色，说明该细菌不能分解培
养基中的色氨酸产生靛基质，因而靛基质指示剂不能与之发生化学反
应，出现颜色变化。
③
半固体培养基：管内指示剂颜色无明显变化，有明显细菌沿穿
刺线扩散生长现象，无气泡产生。
分析：细菌能够沿穿刺线生长，说明该细菌有鞭毛，能运动，有助于
鉴别细菌种类。
（4）血清学鉴定现象与分析：
①
现象：通过玻片两边对比，在加有伤寒杆菌诊断血清的第二个
格子中周围液体清澈，有明显凝集现象；另一格液体表面浑浊，无凝
集现象。
②
分析：第二格中加入伤寒杆菌诊断血清出现凝集现象，说明接
种细菌应为伤寒杆菌，二者特异性结合产生抗原抗体复合物，因而呈
现凝集现象；而第一格中未加入伤寒杆菌诊断血清，接种细菌无相应
抗体，不能产生抗原抗体复合物，所以不呈现凝集现象。
综上：
葡萄糖 甘露醇 乳糖 靛基质 硫化氢 尿素分解 动力
现象 ＋ ＋ － － ＋＋＋ － ＋
由此判断：该细菌应为乙型副伤寒杆菌。
五、实验总结
本次实验所需材料较多，实验流程较复杂，需要动手操作的步骤
较频繁，因而在实验过程中需要多加注意操作方法。
①
在实验进行前应熟悉掌握实验的操作步骤及流程，了解实验
操作的方法，以便实验的顺利进行。
②
实验应在无菌操作下进行，如可在燃烧的酒精灯附近进行细
菌接种（注意酒精灯安全，切勿灼烧自己或是实验仪器，防止事故的
发生）。
③
细菌的培养应在适宜的环境下进行，避免外界环境影响细菌
的生长繁殖（由于实验室已配备培养箱，故出现问题不大，由于实验
室操作者较多，须做好相应的标记）。
④
从EMB中挑选单菌落接种时注意不要挑选其他菌落进行
接种，防止多种细菌共同出现，影响实验结果。
⑤
实验过程中注意操作安全，切勿使细菌沾染自己，如不慎
出现细菌沾染，应及时用清水洗净。
