Morphine Inhibited the Rat Neural Stem Cell Proliferation Rate by Increasing Neuro Steroid Genesis

hippocampus after hyp〇xia-ischemia(J]. Glia, 2015,63(12): 2220-2230. [18] Wang S, Xue H, Xu Y, et al. Sevoflurane postconditioning inhibitsautophagy through activation of the extracellular signal-regulated kinase cascade, alleviating hypoxic-ischem ic brain injury in neonatal rats[J]. Neurochem Res, 2019, 44(2):347-356.[19] Li X, Wang MH, Qin C, et al. Fingolimod suppresses neuronalauophagy through the mTOR/p70S6K pathway and alleviates ischemic brain damage in mire[J]. PLoS One, 2017, 12(1 l):e0188748.[20] Yan YQ, Zhang B, Wang L, et al. Induction of apoptosis andautophagic cell death by the vanillin derivative 6-brom ine-5-hydroxy-4-methoxybenzaldehyde is accompanied by the cleavage ofDNA-PKcs and rapid destruction of c-Myc oncoprotein in HepG2cells[J]. Cancer Lett, 2007, 252(2):280-289.[21 ]Requejo-Aguilar R, Lopez-Fabuel I, Fernandez E, et al. PINK1deficiency sustains cell proliferation by reprogramming glucosemetabolism through HIF1[J]. Nat Commun, 2014,5: 4514.[22] Devireddy S, Liu A, I^ampe T, et al. The organization of milochondrialquality control and life cycle in the nervous system in vivo in theabsence of PINKlfJ]. J Neurosci, 2015, 35(25): 9391-9401.(收稿日期：2020-10-10)•论著•芍药苷对急性脑梗死大鼠小胶质细胞激活调节的神经元焦亡的作用祖力菲亚•艾克木麦合莆热提•乌莆尔邢辉辉樊明新张俊江【摘要】目的研究芍药苷对急性脑梗死（AC1)大鼠神经元焦亡的影响。

CHINESE JOURNAL OF ANATOMY V ol.44 No.1 2021 解剖学杂志 2021年第44卷第1期A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移*姜杨1王璐璐1金海峰1姚立杰1张嵩2刘丹阳3李永涛1张善强1沈雷1△（齐齐哈尔医学院，1 解剖学教研室，2 细胞生物学教研室，3 组织学胚胎学教研室，齐齐哈尔 161006）摘要目的：探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖和运动的影响。

方法：以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基，培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组；2组均添50 nmol/L趋化因子-8（CXCL-8），分别为A549 C组和BEAS-2B C组，若同时添加100 nmol/L triciribine （Akt抑制剂）分别为A549 CT组和BEAS-2B CT组；A549组加入100 nmol/L triciribine为A549 T组。

正常条件下培养的hBMSCs为对照组。

ELISA检测细胞上清液中CXCL-8含量和hBMSCs裂解液Akt、P-Akt蛋白的表达。

MTT实验、流式细胞仪和transwell细胞小室实验分别检测各组hBMSCs吸光度值（A490值）、细胞凋亡率和细胞迁移数目。

结果：与BEAS-2B上清液相比，A549上清液中CXCL-8含量明显升高。

各组hBMSCs的A490值、细胞凋亡率、细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达等均具有显著差异，尤以A549 C组hBMSCs最明显。

与A549 C 组相比，A549 CT组hBMSCs的A490值和细胞迁移数目、Akt和P-Akt蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高较显著。

结论：A549细胞表达的CXCL-8能激活Akt通路，促进hBMSCs增殖和运动。

关键词趋化因子-8；人骨髓间充质干细胞；Akt信号通路；细胞迁移Conditioned media prepared from A549 lung carcinoma cells promotes the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells*Jiang Yang1， Wang Lulu1， Jin Haifeng1， Yao Lijie1， Zhang Song2， Liu Danyang3，Li Yongtao1， Zhang Shanqiang1， Shen Lei1△（1. Department of Anatomy，2. Department of Cell Biology，3. Department of Histology and Embryology， Qiqihar Medical University， Qiqihar 161006， China）Abstract Objective：To investigate the effect of A549 cells （lung carcinoma cells） on the proliferation and migration of human bone marrow mesenchymal stem cells （hBMSCs）. Methods： The supernatants of A549 cells and BEAS-2B cells （the normal human bronchial epithelial cell line）were extracted. hBMSCs cultured with the supernatants were called A549 group and BEAS-2B group respectively； 50 nmol/L chemokine-8 （CXCL-8）was added to both groups to form A549 C group and BEAS-2B C group； 100 nmol/L triciribine （Akt inhibitor） was added at the same time to form A549 CT group and BEAS-2B CT group； 100 nmol/L triciribine was added to A549 group to form A549 T group. hBMSCs incubated in the conventional condition were served as the control group. The CXCL-8 in the cell culture supernatants and the expression of Akt and P-Akt in hBMSCs lysates were tested by ELISA. MTT assay， flow cytometry and transwell assay were used to detect the absorbance （A490）， apoptosis rate and the number of migrating cells in each group respectively. Results： Compared with the BEAS-2B supernatant， the CXCL-8 in the A549 supernatant was significantly increased. There were significant differences in A490， apoptosis rate， the number of migrating cells， and Akt and P-Akt expressions of hBMSCs in each group， especially in A549 C group. Compared with the A549 C group， the A490 and the number of migrating cells， Akt and P-Akt expression of hBMSCs in the A549 CT group were reduced， but the apoptosis rate was increased significantly. Conclusion： CXCL-8 expressed by A549 cells can activate the Akt pathway and promote the proliferation and migration of hBMSCs.Key words C-X-C motif chemokine ligand-8；human bone marrow mesenchymal stem cell； Akt signaling pathway； cell migrationdoi： 10.3969/j.issn.1001-1633.2021.01.003·论 著·* 黑龙江省卫生健康委员会科研课题（2018470）第1作者 E-mail：*****************.cn△通信作者，E-mail：******************.cn收稿日期：2020-04-09；修回日期：2020-09-09间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）是促成肺癌发生的因素之一[1]。

水飞蓟素对神经胶质瘤的体内外抑制作用及机制Δ刘明＊，刘熙鹏，李淳，甄诚，刘春江，王海洋，巩建青（河北北方学院附属第一医院神经外科，河北 张家口　075000）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）16-1955-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.16.07摘要 目的 探讨水飞蓟素（SM ）对神经胶质瘤的体内外抑制作用及潜在机制。

方法 将人神经胶质瘤细胞系U 87随机分为对照组，低、中、高质量浓度SM 组（50、100、200 μg/mL ），蛋白激酶B （又称Akt ）激活剂组（SC 79 20 μmol/L ），高质量浓度SM 联合Akt 激活剂组（SM 200 μg/mL+SC 79 20 μmol/L ）。

经药物（对照组除外）处理后，检测各组细胞的光密度（OD ）值、克隆形成率、凋亡率、增殖/凋亡相关蛋白[增殖细胞核抗原（PCNA ）、B 细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、Bcl-2相关X 蛋白（Bax ）、胱天蛋白酶3（caspase-3）]的表达情况和Akt/促分裂原活化的蛋白激酶（MAPK ）信号通路相关蛋白[Akt 、p 38 MAPK 、胞外信号调节激酶1/2（ERK 1/2）]的磷酸化水平。

于右侧腋窝内皮下注射U 87细胞建立异种移植肿瘤裸鼠模型并将其分为对照组，低、中、高剂量SM 组（25、50、100 mg/kg ），Akt 激活剂组（SC 79 40 mg/kg ）、高剂量SM 联合Akt 激活剂组（SM 100 mg/kg+SC 79 40 mg/kg ），每组5只。

经药物（裸鼠对照组除外）干预后，称定其瘤体质量并计算瘤体体积。

结果 与对照组比较，SM 各质量浓度组细胞的OD 值，克隆形成率，PCNA 、Bcl-2蛋白的表达水平，Akt 、p 38 MAPK 、ERK 1/2蛋白的磷酸化水平，以及裸鼠SM 各剂量组裸鼠体内的瘤体质量及体积均显著降低/减小，细胞凋亡率和Bax 、caspase-3蛋白的表达水平均显著升高，且均有剂量依赖性（P ＜0.05）；Akt 激活剂组上述指标的变化趋势与之相反（P ＜0.05），且Akt 激活剂可明显减弱高质量浓度/高剂量SM 对神经胶质瘤的体内外抑制作用（P ＜0.05）。

中国协和医科大学博士论文第３天（Ｘ１００）ｔｈｅ３ｒｄｄａｙ第１０天（×１００）ｔｈｅｌ０“ｄａｙ第７天（×ｌＯＯ）ｔｈｅ７０ｄａｙ第１４天（×ｌｏｏ）ｔｈｅ１４“ｄａｙ图１－３人嗜铬细胞瘤细胞原代培养不同时间的细胞形态Ｆｉｇ．ｔ－３Ｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｏｆｈｕｍａｎｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏａｍｃｅｌｌｓａｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅ１９中国协和医科大学博士论文结果一、ＡＤＭ及其特异性受体ＲＡＭＰ２／ＣＲＬＲ的ｍＲＮＡ表达１．嗜铬细胞瘤和正常肾上腺髓质组织总ＲＮＡ提取后所得ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值均在１．８－２．０之间，表明ＲＮＡ未被蛋白质和ＤＮＡ污染；进行电泳鉴定，紫外灯下可见２８Ｓ、１８Ｓ条带明显、清晰，且二者的比值约为２：１，说明在提取过程中ＲＮＡ质量完好（图２－１）。

ｍ驼Ｉ）Ｉ挖鞠Ｓ１８Ｓ图２－１．嗜铬细胞瘤组织和正常肾上腺髓质组织ＲＮＡ电泳Ｆｉｇ．２－１ＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆＲＮＡｃｏｎｔｅｎｔｓｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａａｎｄｎｏｒｍａｌａｄｒｅｎａｌｍｅｄｕｌｌａＮ：正常肾上腺髓质；Ｐ：嗜铬细胞瘤Ｎ：Ｎｏｒｍａｌａｄｒｅｎａｌｍｅｄｕｌｌａｔｉｓｓｕｅｓ；Ｐ：Ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ２。

ＰＣＲ产物鉴定：１）正常肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤组织均可见ＡＤＭ（４１０ｂｐ）ＲＡＭＰ２（２８３ｂｐ）、ＣＲＬＲ（４９７ｂｐ）的ＰＣＲ产物（图２—２）。

２）ＡＤＭ、ＲＡＭＰ２、ＣＲＬＲ的ＰＣＲ产物提纯后经自动测序仪双向测序，与ＧｅｎＢａｎｋ登记的序列同源性达９５％，排除ＰＣＲ反应错配、测序错误及种属内同源性差异，可认为扩增片段为人ＡＤＭ、ＲＡＭＰ２、ＣＲＬＲ的ｃＤＮＡ（图２—３、２—４、２－５）。

中国协和医科大学博士论文ｔｘＰ—ｔ，＿●畦订ｍＣｌｌＵｌ．ｔ“∞№２００■，ｍｂｐ＊嘶１００口ｂＩＳ∞帅ｍｂｐ图２－２．嗜铬细胞瘤组织和正常肾上腺髓质组织ＡＤＭＲＡＭＰ２ＣＲＬＲＲＴ－ＰＣＲ产物Ｆｉｇ．２－２ＲＴ－ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆＡＤＭＲＡＭＰ２ＣＲＬＲｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａａｎｄｎｏｒｍａｌａｄｒｅｎａｌｍｅｄｕｌｌａＮ：正常肾上腺髓质；Ｐ：嗜铬细胞瘤Ｎ：Ｎｏｒｍａｌａｄｒｅｎａｌｍｅｄｕｌｌａｔｉｓｓｕｅｓ；Ｐ：Ｐｈｅｏｅｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａ㈨酬岫㈣㈧㈨枞。

米诺环素抑制促炎因子生成保护多巴胺能神经元汪锡金;颜志强;谷胜利;叶民;刘振国【摘要】Objective To investigate the effect of minocycline on inflammation-induced dopaminergic neurodegeneration. Methods SD rat model of inflammation-induced dopaminergic neurodegeneration was established in mesencephalic neuron/ glia cultures by lipopolysaccharides. The culture system was treated by minocycline before or after the addition of lipopolysaucharides. The number of dopaminergic neurons was determined by immunocytochemistry and cell counting. Cell bioactivity was detected by liquid scintillation uptake assay. Besides, the changes of key proinflammatory factors such as tumor necrosis factor-α (TNF-α) (by ELISA), interleukin-1β (IL-1β) ( by ELISA), nitric oxide ( NO) ( by Griess method) and superoxide (by cytochrome C reduction method) were examined in the cultures. Results Minocycline (2-10 (μmol/L) pretreatment dose-dependently attenuated the reduction in dopamine uptake and dopaminergic cell number in mesencephalic cultures treated with lipopolysaccharides ( 1 - 100 ng/mL). Minocycline (10 μmol/L) posttreatment also protected dopaminergic neurons from lipopolysaccharides (10 ng/mL) -induced neurodegeneration inneuron/glia cultures. Minocycline pretreatment and posttreatment significantly inhibited the production of TNF-a, IL-1β. NO and superoxide in neuron/glia cultures. Conclusion Minocycline may protect meseneephaiic dopaminergie neurons treated with lipopolysaccharides byinhibiting the production of proinflammatory factors%目的探讨米诺环素对炎症介导的中脑多巴胺能神经元损伤的影响.方法应用脂多糖处理中脑原代神经元/胶质细胞培养体系建立SD大鼠多巴胺能神经元损伤的炎症机制模型,于脂多糖处理该培养体系前或后加入米诺环素,免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目,液闪测定法测定多巴胺摄取力,并检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(ELISA法)、白介素-1β(IL-1β)(ELISA法)、一氧化氮(NO)(Griess法)和超氧阴离子(细胞色素C 还原法)等促炎因子的变化.结果米诺环素(2～10 μmol/L)前处理对脂多糖(J～100 ng/mL)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具有显著的保护作用.呈剂量依赖性；米诺环素( 10μmol/L)后处理对脂多糖(10 ng/mL)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤也具有显著的保护作用；米诺环素显著降低促炎因子TNF-α、IL-1β、NO和超氧阴离子的生成.结论米诺环素在脂多糖处理的中脑神经元/胶质细胞培养体系中可能通过抑制促炎因子生成保护多巴胺能神经元.【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(032)006【总页数】5页(P711-715)【关键词】帕金森病;米诺环素;多巴胺能神经元;促炎因子【作者】汪锡金;颜志强;谷胜利;叶民;刘振国【作者单位】上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092;中国科学院上海生命科学研究院实验动物中心,上海201615;上海长宁区同仁医院神经内科,上海200050;南京明基医院神经内科,南京210019;上海交通大学医学院附属新华医院神经内科,上海200092【正文语种】中文【中图分类】R-332;R742.5近年来，越来越多的研究[1-10]表明，免疫/炎症机制在帕金森病(Parkinson’s disease，PD)的发病和病情进展中起重要作用。