阿散酸的鉴别和定量测定

詹仲贵，等：阿散酸的鉴别和定量测定　一３９一　

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阿散酸的鉴别和定量测定　

詹伸贵陈海燕　

（浙江荣耀化工有限公司，３１７０１６）　

摘要：本文对《兽药质量标准》中阿散酸的鉴别和测定进行了分析，破解了伪劣阿散　

酸的组成成份。提出了阿散酸的高效液相色谱分析方法。　

关键词：阿散酸；鉴别；定量测定；高效液相色谱法　

阿散酸（化学名：对氨基苯胂酸）为合成抗　

菌素类饲料添加剂，能促进鸡生长，提高产蛋率，　

提高饲料效率，增进皮肤、卵黄色素沉淀，抑制球　

虫卵、支原体、抗大肠杆菌。对猪具有促进生长，　

提高饲料效率，使皮肤红润光亮，防治痢疾等作　

用。其特点：（１）几乎不为消化道所吸收，故不　

会残留在畜产品中。（２）不含致畸、致突变、致　

癌等毒性，是一种具有高度安全性的饲料添加　

剂。（３）不产生耐药性及交叉耐药性。（４）具有　

机体同化作用，能够加强蛋白质合成，改善皮肤　

营养。正是因为它的这些优点，所以在饲料行业　

成为抢手货，颇受青睐。在利益驱使下，也成为　

不法商家仿冒制假的对象。　．　

几年来，我们陆续收到经销商寄来的市面上　

销售的“阿散酸”样品，经检测后发现绝大部分　

都是假冒伪劣产品。但是它们却可以在市面上　

进行销售，有关部门检验后也认为是合格产品。　

笔者分析制假者可以得逞的原因是利用广大检　

验人员仅用《兽药质量标准》中规定的用亚硝酸　

钠滴定阿散酸的《定量》方法，而不做其他《检　

查》和《鉴定》，检查和鉴定又只带定性性质，不　

做定量的这个漏洞。所以，不要说是一般用户，　

就是普通化验室也较难鉴别。下面我们将重点　

介绍为什么根据《兽药质量标准》中的规定无法　

准确的鉴别和检测阿散酸，以及怎样识别真假阿　

散酸和定量测定阿散酸。　

要定量检测阿散酸，首先要先鉴别它是不是　阿散酸。　

１　《兽药质量标准》中阿散酸的鉴别和检测方　

法　

１．１观察性状　

阿散酸应该是白色或微黄色的结晶粉末，如　

果收到的样品不是这个颜色，那么就应该怀疑这　

个样品是不是阿散酸或者说是不是纯的阿散酸？　

有没有添加其他什么物质？就算是白色或微黄　

色的结晶粉末也不能说明它就是阿散酸。所以　

还要进行下面的操作。　

１．２鉴别　

部标（ＣＰＶ２００３）列出四个鉴别操作步骤，但　

是这些项目也有一定的局限性，它们只能够对是　

否含有阿散酸进行区分，但是不能鉴别含有少量　

阿散酸的劣质产品。因为在劣质产品中添加有　

少量的阿散酸，即使进行了四项的鉴别操作，也　

难发现问题。因为样品中含有阿散酸存在鉴别　

反应同样是阳性，所以判定是纯品阿散酸的结论　

同样有问题。　

１．３检查酸度　

在阿散酸的饱和水溶液中，加入一滴甲基红　

指示液，应显红色。这个现象只能说明该物质的　

水溶液呈酸性，若样品中加入其他酸性的物质，　

溶液也会显红色。所以检查酸度也同样是不可　

靠的。　

１．４滴定含量　

使用亚硝酸钠标准溶液进行滴定，最后通过　－－－——４０－－－——　中国饲料添加剂　２０１０年第１０期（总第１００期）　

滴定消耗的亚硝酸钠的量来计算阿散酸的含量。　

反应方程式如下：　Ｃ６Ｈ８ＡｓＮＯ３＋２ＨＣ１＋ＮａＮＯ２　

Ｃ６Ｈ８ＡｓＮ２Ｏ３　Ｃ１十ＮａＣ１＋２Ｈ２Ｏ　２ＨＮＯ２＋２ＫＩ＋２Ｈａ——÷Ｉ２＋２ＫＣ１＋２５／０＋２ｒ￣ｏ　重氮化法的反应原理：　

亚硝酸钠在酸性条件下与第一芳香胺的氨　

基均能发生重氮作用。与亚硝酸钠发生重氮化　

反应的物质并不只是阿散酸，比如：对氨基苯磺　

酸，对它的性状检查、鉴别、检查酸度均与阿散酸　

性质相似，只是滴定含量上的差异。　

因为对氨基苯磺酸的分子量只有１７３．２，而阿　

散酸的分子量是２１７．１，对氨基苯磺酸的分子量只　

有阿散酸分子量的４／５。如果对氨基苯磺酸和其他　

的不与亚硝酸钠作用的物质（如硫酸钠等无机盐）　

按４：１相混合，那么最后用亚硝酸钠滴定的结果与　

纯品阿散酸的计算结果是一致的。　

正是因为上面的这些原因，才使得鉴别和定　

量检测阿散酸变得困难。因此，广大的用户急切　

的需要一套科学有效的分析方法来分辨阿散酸　的真伪。　

用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）来鉴别和定　

量检测阿散酸是一个有效可靠的方法。我们利　用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）做了混合不同量　

对氨基苯磺酸的阿散酸样品，图谱见图１、图２。　

通过图谱可以看出高效液相色谱法（ＨＰＬＣ法）　

可以完全分离两个不同组份，满足测定要求。　

图１　混合９０％对氨基苯磺酸的阿散酸　２　阿散酸的高效液相色谱法　

２．１　高效液相色谱法原理　

通过对样品和标准品色谱图的比较，保留时　

间是否一致进行定性分析；通过计算峰面积或峰　图２混合５０％对氨基苯磺酸的阿散酸　高的大小来进行定量计算出样品中的阿散酸含　

量。　２．２检测仪器　

检测器：Ｗａｔｅｒｓ　４８６　Ｔｕｎｂａｌｅ　Ａｂｓｏｒｂａｎｅｅ　Ｄｅ．　ｔｅｃｔｏｒ或同等检测器；　

泵：Ｗａｔｅｒｓ　５１０（或５１５）或同等泵；　

进样器：ＲＨＥＯＤＹＮＥ　ＣＯＴＡＴＩＣＡＬＩＦＯＲＮＩＡ　

７１２５或同等设备；　

色谱柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８　４．６　ｍｍ×１５０　ｍｍ或　同等柱子；　

色谱工作站：杭州英谱ＨＳ色谱数据工作站　

或同等设备；　

天平：Ｍｅｔｔｌｅｒ　ＡＢ１３５Ｓ或同等设备；　

玻璃仪器：Ａ级计量仪器或同等仪器。　

２．３实验试剂　水：二次蒸馏水或同等试剂；　

甲醇：ＨＰＬＣ级；　

磷酸：试剂级或同等试剂；　

阿散酸：标准品；　

ＮａＯＨ：试剂级或同等试剂。　

２．４操作步骤　２．４．１　０．１７％磷酸溶液（Ｖ／Ｖ）　

量取２ｍＬ　８５％磷酸溶液，放入盛有６００ｍＬ　水的１Ｌ容量瓶中，混合溶液用水稀释至刻度。　

２．４．２流动相制备　

分别量取２００　ｍＬ甲醇、８００　ｍＬ二次蒸馏水　

和６０ｍＬ　０．１７％磷酸溶液。混合均匀，使用前用　

０．４５　ｍ滤膜过滤，使用前脱气。　

２．４．３　０．０５％的ＮａＯＨ溶液（Ｗ／Ｖ）　

称取０．５ｇＮａＯＨ，放人盛有６００ｍＬ水的１Ｌ　

容量瓶中，用超声波助溶混匀后，再用水稀释至　詹仲贵，等：阿散酸的鉴别和定量测定　一４１一　

刻度。　

２．４．４标准品溶液制备　２．４．４．１准确称取５０ｍｇ（－Ｉ－０．１ｍｇ）阿散酸标　

准品于１００ｍＬ容量瓶中，加入０．０５％ＮａＯＨ溶　

液溶解并稀释到刻度。　

２．４．４．２取５．０　ｍＬ刚制备的２．４．４．１溶液于　

５０　ｍＬ容量瓶中，用流动相稀释至刻度。　

标准溶液浓度＝　１量００重

．０　ｍ　Ｌ　×　

５．０ｍＬ　，标准品含量％　５０．０ｍＬ　１００　

２．４．５样品溶液制备　

２．４．５．１精确称取５０　ｍｇ（±０．１　ｍｇ）阿散酸样　

品于１００ｍＬ容量瓶中。用０．０５％ＮａＯＨ溶解稀　

释至刻度。　

２．４．５．２取５．０　ｍＬ　２．４．５．１溶液至５０　ｍＬ容　

量瓶中，用流动相稀释至刻度。　

２．４．６高效液相色谱法参数　

波长：２８０　ｎｍ；　

进样量：２０　Ｌ；　

流速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；　流动相：２００ｍＬ甲１￣／８００ｍＬ　ＨＰＬＣ级纯水／　

６０ｍＥ０．１７％磷酸（Ｖ／Ｖ）；　

柱：Ｋｒｏｍａｓｉｌ　Ｃ１８　１５０×４．６ｍｍ　５Ｉｘｍ或同等　

柱子；　

柱温：３０±２ｏＣ；　运行时间：ｌ０分钟；　

按上述条件运行，分别记录阿散酸标准品和　

样品图谱的峰面积或峰高。　

２．４．７计算　

Ｒｓａｍ×Ｃｓｔｄ×Ｄ×１００　

阿散酸含量％＝Ｒｓｔｄ×Ｗ　

Ｒｓａｍ：阿散酸样品的峰面积或峰高；　Ｒｓｔｄ：阿散酸标准品的平均峰面积或峰高；　

Ｃｓｔｄ：阿散酸标准品的浓度（ｍｇ／ｍＬ）；　

Ｄ：样品溶液稀释倍数；　

Ｗ：样品重量。　

例如：　

样品峰面积＝１２３００００　

样品重量＝５０ｍｇ　样品稀释倍数：１０００　标准品浓度＝０．０４９５　ｍｇ／ｍＬ　标准品峰面积＝１２２００００　含量　

一　三　：　１２２００００×５０ｍｇ　

＝９９．８％　２．５鉴别　用本方法中所列条件出具的谱图进行鉴别。　

将样品中阿散酸的出峰时间与该样品前后两个　阿散酸标准品谱图中阿散酸的出峰时间的平均　值相比较，相差不超过标准平均值的１０％，这样　

的结果是可靠的。　阿散酸标准品的谱图（见图３）和阿散酸样　

品谱图（图４）。　

图３阿散酸标准品　

图４阿散酸样品　注：由于所用色谱柱、流动相、流速的不同可　

能产生出峰时间的漂移，但是只要是在同等条件　下出具的阿散酸标准品谱图和样品谱图，他们之　

间的相对关系还是确定的。　

参考文献　

［１］阿散酸的说明书，２００５：１．　［２］兽药质量标准，２００３：１５５～１５６．　［３］《阿散酸》浙江荣耀化工有限公司企业标准，２００８：１　

～３．