最新微生物埃希菌志贺菌说课讲解

志贺菌鉴定依据
肠道选择平板上无色半透明菌落 KIA：KA－－ MIU：－ ＋/－ － 与志贺菌多价诊断血清和各群血清凝集 注意与EIEC、类志贺邻单胞菌、动力不 明显的沙门菌鉴别
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与EIEC的鉴别
生化反应鉴别试验 粘质酸盐－ － －
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微生物学检验
标本采集 ◆粪便或肛拭 ◆新鲜脓血便 ◆立即送检或床边接种 ◆保存于30％甘油盐水或卡-布培养基
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检验程序
KIA MIU、IMViC
多价血清玻片凝集 菌落涂片染色
粪便或肛拭 肠道选择平板
可疑菌落
增菌
初步鉴定 最终鉴定 报告结果
因子血清凝集 系统生化反应
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沙门菌属
肠道沙门菌 邦戈沙门菌
肠道亚种
致病沙门菌多为
萨拉姆亚种
肠道亚种
双亚利桑那亚种
亚利桑那亚种
豪顿亚种
英迪加亚种
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形态染色
革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周 鞭毛，多数菌株有菌毛
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沙门菌
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培养特性
兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落 菌落，与志贺菌菌落相似。 SS平板－－无色菌落，产H2S菌株，菌落中 心呈黑色 Mac平板－－无色菌落 EMB平板－－无色菌落
我国以B群为主
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不典型菌株的鉴定
在鉴定中如遇生化反应符合，血清学不 凝集；血清学凝集，生化反应不符合， 可考虑不典型菌株。 将不典型菌株在肉汤中反复传代，促其 恢复典型性状
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志贺菌快速鉴定试验
直接凝集试验 免疫荧光菌球法 协同凝集试验 乳胶凝集试验 分子生物学方法

l 人类对志贺氏菌的易感性极高，大约10个 ~200个细菌即可使10％~50％受攻击的人致 病。 l 病后有一定的免疫力，但是免疫期短，也 不稳固。可能因细菌菌型多，各型细菌之间无 交叉免疫性之故。
2、临床症状 l 志贺氏菌食物中毒引起的细菌性痢疾可 分为急性和慢性两大类、6个不同的型。
(1) 急性细菌性痢疾 l 急性细菌性痢疾又分为急性典型、急性非 典型和急性中毒性菌痢三型。
l 此抗原可以阻止菌体抗原与相应免疫血清 发生凝集。
(五)抵抗力 l 志贺氏菌属的细菌与沙门氏菌属及其他肠道 杆菌相比，对理化因素抵抗力较低。
l 对酸较敏感，必须使用含有缓冲剂的培养基。
l 在外界环境中的生存力，宋内氏志贺氏菌 最强、福氏志贺氏菌次之，而痢疾志贺氏菌最 弱。 l 一般潮湿的土壤中能生存34d，37℃的水中 存活20d，而在冰块中可存活3个月，粪便中的 细菌在室温情况下(20℃左右)可存活11d。含 有高浓度胆汁的培养基能抑制某些志贺氏菌株 的生长。
2、耐药性变异
l 自从广泛使用抗菌素以来，志贺氏菌属的耐药菌 株不断增加，给防治工作带来许多因难。
l 国内部分地区报告，志贺氏菌对四环素的耐药率 达74％ 、氯霉素73.6％~97％ 、链霉素84％~98％、 金霉素75％~100％ 、磺胺类97％~100％ ，可见对 国内常用几种抗菌素的耐药率相当高。
l 本菌为兼性厌氧菌，但厌氧培养时，生长较不 旺盛。
l 营养要求不高，在普通培养基上易于生长。 l 最适温度为37℃左右，但在10℃~40℃范围内 亦可生长，最适pH约为7.2。
l 在固体培养基上经培养18h~24h后，菌落 圆形、透明、隆起并微凸、直径约2mm~3mm、 表面光滑、湿润、边缘整齐。
l健康带菌者是指临床上无肠道症状而又能排 出志贺氏菌者。这种带菌者是主要的传染源， 特别是在饮食上，炊事员和保育员中的带菌者 危险性更大。

The “life cycle” of E. coli O157:H7
致病性
•肠集聚型大肠埃希菌（EAEC） 婴儿和旅行者持续性水样腹
泻、脱水，偶有血便。 不侵袭细胞，致微绒毛变
短，黏液的分泌，单核细胞 浸润和出血。
——胃肠炎
埃希菌属
微生物学检查法 标本：肠外-取中段尿、血液、脓液等，肠
内- 取粪便。 分离培养与鉴定 ①肠外感染 •除血液，其他均需作涂片染色检查； •血液先增菌，再移种BAP，体液标本离心沉 淀后接种BAP。 •初步鉴定据IMViC试验；最后靠生化鉴定。 •尿路感染每毫升≥10万才有诊断价值。
取菌落，做生化应和血清学凝集试验。
志贺菌属
——微生物学检查法
毒力试验 ①Sereny试验：受试菌9亿/ml菌悬液
后，接种豚鼠眼结膜囊内，如发生角 膜结膜炎，为试验阳性。 ②毒素测定可用敏感细胞培养，观察病 变，或用PCR技术检测产生毒素基因。 快速诊断法：方法多。
志贺菌属
防治原则 作好饮食卫生和垃圾管理； 隔离病人和消毒排泄物； 及时发现病人和带菌者并及时治疗； 有效的活疫苗正在研制； 志贺痢疾菌对多种抗生素有较高耐药。
致病性与免疫性
——所致疾病
•急性中毒性痢疾 小儿常见，症状为全身中毒；内毒素致
使微血管痉挛、缺氧、缺血、DIC、多器 官功能衰竭和脑水肿； 临床表现为高热、休克和中毒性脑病； 抢救不及时，因呼吸、循环衰竭而死亡。
致病性与免疫性
——所致疾病
•慢性痢疾 急性痢疾治疗不彻底，致反复发作和慢
性迁延，病程到两月以上； 症状不典型，成为传染源或延误治疗。
沙门菌属（Salmonella）
概述 肠道中的G-杆菌； 肠道沙门菌和邦戈沙门菌两种，前者有6

2.与国际接轨的原则
该标准的起草内容主要参考了国际标准组织ISO标准 ， 部分参考采用了美国FDA、NMKL等标准
3.与现有已颁布的新版国家标准协调 统一
参考了已颁布的2008版国标，在样品 的前处理步骤，培养条件的选择，文字 描述等方面尽量 保持一致。
GB/T 4789.5-2003 标准不足处
志贺氏菌的O抗原
• 人们原来的认识认为血清学试验是特异性 的，但是志贺氏菌的 O抗原和大肠埃希氏 菌属关系密切，有半数的菌型与大肠埃希 氏菌的某些O抗原完全相同。相同抗原菌属 间存在血清交叉凝集反应。因此，生化试 验对于属的鉴定是非常重要的。
志贺氏菌属与大肠埃希氏菌的O抗原关系
O抗原完全相同的：
白色不透明圆形边缘不整齐直径1mm3mm菌落周围琼脂颜色变为紫红色宋内氏典型菌落xld熟肉制品中宋内的分离效果rf志显xld蔬菜制品中宋内分离效果xld鲍氏在生肉中的分离效果xld选取平板上5个或5个以上可疑菌落接种tsi葡萄糖半固体营养琼脂斜面36培养20h24培养物中出现以下情况可以弃去a
志贺氏菌的检验
（anaerogenic E.coli）、A-D
（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型） 菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与 某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面 生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物 还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液 酸盐试验(36 ℃培养24 h～48 h)。志贺氏菌 属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性 区别见表3
（三）、生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺 氏菌外，均不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，