麻黄—附子药对提取物中麻黄类生物碱的溶解性能考察

麻黄—附子药对提取物中麻黄类生物碱的溶解性能考察

目的 测定麻黄-附子药对提取物中麻黄类生物碱平衡溶解度和表观油水分配系数，为经皮给药研究提供依据。方法 采用70%乙醇提取、D101大孔吸附树脂纯化方法，制备麻黄-附子药对提取物。采用沉淀法联合HPLC，测定麻黄-附子药对提取物中主要有效成分麻黄碱和伪麻黄碱在各类溶剂中的平衡溶解度。采用摇瓶法，测定麻黄-附子药对中麻黄碱和伪麻黄碱在正辛醇-水中的表观油水分配系数。结果 提取物在甲醇和乙腈中的溶解度较大，麻黄碱和伪麻黄碱在pH 7.4磷酸盐缓冲液中的溶解度最大。麻黄碱、伪麻黄碱在正辛醇-水中的表观油水分配系数分别为0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。提取物中麻黄生物碱类成分的油水分配系数受pH值影响较大。结论 提取物在极性大的溶剂中溶解性较好，适宜的pH值可在一定范围内改善其有效成分的水溶性和脂溶性，从而有利于透皮吸收。

Abstract： Objective To determine equilibrium solubility and apparent oil/water

partition coefficient of ephedra alkaloid in the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti

Lateralis Radix Praeparata； To provide a basis for transdermal delivery. Methods The

extract was prepared by 70% ethyl alcohol and D101 macroporous absorbent resins.

Dissolvability of its main effective components （ephedrine and pseudoephedrine） in

the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata was determined

by precipitation method and HPLC method； the oil/water partition coefficient of

ephedrine and pseudoephedrine in n-octanol-water buffer solution system were

determined by shaking flask method. Results The extract had optimum solubility in

methyl alcohol and acetonitrile， and ephedrine and pseudoephedrine had optimum

solubility in buffered solution of pH 7.4. Oil/water partition coefficient of ephedrine

and pseudoephedrine in n-octanol-water system was 0.101 with lgP=-0.99 and 0.076

with lgP=-1.12. Oil-water partition coefficients of ephedrine and pseudoephedrine in

the extract were affected by pH. Conclusion The extract has optimum solubility in

high polar solvents. Ephedrine and pseudoephedrine have certain fatsoluble and

water-soluble in suitable pH， which was beneficial for transdermal absorption.

Key words： compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata；

ephedra alkaloid； equilibrium solubility； apparent oil/water partition coefficient；

HPLC

麻黄-附子为临床常用药对，在《伤寒论》的麻黄附子汤、麻黄附子细辛汤、麻黄附子甘草汤、乌头汤等方剂中均有应用。麻黄辛温，具有发汗解表、宣肺平喘、利水消肿功效；附子辛热，具有回阳救逆、

1 仪器与试药

AB265-S电子天平，梅特勒公司；HZS-HA水浴振荡器，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；LC-20AT型高效液相色谱仪，日本岛津公司。

麻黄、黄附子均购自哈药集团世一堂中药饮片有限责任公司，经黑龙江中医药大学中药鉴定教研室孙慧峰副教授鉴定，分别为麻黄科植物草麻黄Ephedra

sinica Stapf的干燥草质茎和毛茛科植物乌头Aconitum carmichaelii Debx.的母根炮制加工品；乙腈（色谱纯），美国迪马公司；盐酸麻黄碱对照品（批号171241-201508）、伪麻黄碱对照品（批号171237-201208），中国食品药品检定研究院；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 麻黄-附子药对提取物的制备

取麻黄、黄附子，按2∶3比例混合，加入pH 2的70%乙醇提取溶剂，回流提取2次（2、1.5 h）。减压回收乙醇后，加水配成浓度为0.4 g/mL的上样液，通过D101大孔树脂，水洗除杂质后，收集70%乙醇洗脱液，挥干乙醇，真空干燥，得麻黄附子干浸膏提取物（以麻黄碱计14 mg/g、伪麻黄碱计6 mg/g）[2]。

2.2 麻黄生物碱类成分含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18（5 ?m，250 mm×4.6 mm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98，每100 mL中加入0.04 mL三乙胺），检测波长为190 nm，流速为1 mL/min，柱温为30 ℃。

2.2.2 混合对照品溶液的配制 分别精密称取盐酸麻黄碱、伪麻黄碱对照品25.14、12.52 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的配制 称取提取物0.2 g左右，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2.4 标准曲线的绘制 精密吸取一定量上述麻黄碱和伪麻黄碱对照品溶液，按倍数关系稀释成8种不同质量浓度的溶液，分别吸取10 ?L进样测定，记录色谱峰峰面积。以对照品质量浓度为横坐标，相应峰面积积分值为纵坐标，进行回归处理，得回归方程Y=76 152X+1E+06，r=0.999 4和Y=87 629X+129 116，r=0.999

6。结果表明，麻黄碱在0.02～10.06 ?g范围内线性关系良好，伪麻黄碱在0.01～5.01 ?g范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，连续进样6次，进样量10 ?L，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算峰面积，结果盐酸麻黄碱峰面积RSD=0.45%（n=6）；盐酸伪麻黄碱峰面积RSD=0.88%（n=6）。表明精密度良好，符合含量测定基本要求。

2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液，于0、6、12、18、24 h精密吸取10 ?L注入高效液相色谱仪，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算峰面积，麻黄碱峰面积

RSD=1.58%（n=5），伪麻黄碱峰面积RSD=1.96%（n=5）。表明供试品溶液在24

h内基本稳定。

2.3 平衡溶解度试验

2.3.1 沉淀法 称取提取物0.2 g左右，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入不同溶剂（水、甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、正辛醇）及不同pH值（2.25、4.99、6.8、7.4、8.98）缓冲液各5 mL，放入恒温水浴振荡器中，温度保持在37 ℃，振摇24 h，使其达到充分溶解。将药液连同残留的固体药物一同转移至已经恒定质量的离心管中，12 000 r/min离心10 min，倾出上清液，残渣和离心管在70 ℃真空干燥箱中烘干并称定质量，计算提取物在不同溶剂中的溶解度[3]。溶解度=（m加入量-m未溶解量）÷溶剂体积。结果测得平衡溶解度分别为31.8、35.78、25.94、0.42、33.14、11.3、10.4、7.44、40.16、36.66、34.94、31.3、21.88 mg/mL，说明不同溶剂中提取物的溶解度依次为甲醇>乙腈>水>乙醇>三氯甲烷>正辛醇>丙酮>乙酸乙酯。不同pH值磷酸缓冲液中的平衡溶解度见图1 。

2.3.2 指标成分法 分别精密吸取上述离心后的各溶液上清液3 mL置5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度。经0.45 ?m滤膜过滤，取续滤液10 ?L，采用HPLC测定溶液中麻黄碱和伪麻黄碱（色谱图见图2），并计算指标药效成分的溶解量。结果表明，37 ℃条件下，麻黄碱在水中的平衡溶解度为275.19 ?g/mL，伪麻黄碱在水中的平衡溶解度为132.31 ?g/mL，在有机溶剂中的平衡溶解度见表1，在磷酸缓冲体系中的平衡溶解度见图3。由结果可知，37 ℃时麻黄碱和伪麻黄碱在甲醇中的溶解度最大，在乙醇中的溶解度相对较大，在三氯甲烷中的溶解度最小。指标成分麻黄碱类在磷酸盐缓冲液中的溶解度均随pH值的增大呈现先缓慢减小后增大然后再减小的变化趋势。麻黄碱和伪麻黄碱在pH 7.4磷酸盐缓冲液中的溶解度最大，分别为344.27 ?g/mL和162.22 ?g/mL。

2.4 表观油水分配系数的测定

选择正辛醇为油相，pH值分别为2.25、4.99、6.8、7.4、8.98的磷酸盐缓冲液及蒸馏水为水相。取提取物0.2 g左右，精密称定后置5 mL量瓶中，加入被正辛醇饱和的水和系列pH值的磷酸盐缓冲液，超声30 min，12 000 r /min离心10 min，取上清液2 mL，用甲醇稀释至5 mL，取上清液过0.45 ?m滤膜，取20 ?L，经HPLC测定其中指标成分的浓度（C0）。再取上清液2 mL置具塞锥形瓶中，分别加入2 mL被水饱和过的正辛醇溶液，加塞，置于37 ℃恒温水浴振荡器中，振荡24 h，静止后取上层油相2 mL，用甲醇稀释至5 mL，混匀，过0.45 ?m 滤膜，取20 ?L，经HPLC测定其中指标成分的浓度（C1）。按公式计算表观油水分配系数（P）：P=C1/（C0-C1）[3]。结果表明，37 ℃时麻黄碱、伪麻黄碱的正辛醇/水分配系数分别为0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。麻黄碱和伪麻黄碱的lgP值受pH值影响较大，在pH 6.8时lgP值达到最大，pH 7.4时为最低。之后随pH值的增加lgP值有所降低。结果见图4。3 讨论

油水分配系数是影响药物胃肠吸收和经皮吸收的重要因素。文献报道，药物