HCV检测现状及新进展
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人类免疫缺陷病毒耐药检测研究进展 艾滋病抗病毒治疗对于病毒抑制和患者生存意义重大,但病毒耐药问题的出现已成为治疗的严重威胁,不仅会导致个体治疗的失败,也会引发耐药毒株的传播风险,因此开展耐药检测工作十分必要。本文对耐药检测的意义、方法和应用研究最新进展加以综述,从临床和公共卫生的角度为进一步加强耐药检测工作,更有效的降低耐药的发生、传播和流行提供参考依据。
[Abstract] Antiviral therapy of acquired immunodeficiency syndrome (AIDs) is of great importance for virus inhibition and the survival of patients, but drug resistance of virus has been recognized as a serious threat to treatment, leading to failure of individual treatment and spreading risk of the drug resistant strains. Thus, drug resistance detection is very necessary. This paper generalizes the latest progress of significance, methods and applicative research of drug resistance to provide clinical and public health references for the further improvement of drug resistance detection and further reduction of occurrence, spreading and prevalence of drug resistance.
艾滋病毒的早期诊断方法及其应用前景艾滋病毒(HIV)是一种严重威胁人类健康的病毒,造成艾滋病的发生。
艾滋病毒感染后,如果不及时进行治疗,会逐渐损害人体免疫系统,导致免疫功能衰竭,进而患者体内无法有效对抗各种感染和肿瘤的侵袭。
因此,早期诊断对于预防艾滋病的传播和有效治疗至关重要。
早期诊断艾滋病的方法主要包括分子生物学和免疫学两个方面。
下面将简要介绍这些方法以及其在临床应用中的前景。
分子生物学方法是目前早期检测艾滋病毒感染最常用的方法之一。
该方法使用PCR(聚合酶链式反应)技术,检测患者血液中的艾滋病毒核酸。
PCR技术的敏感性和特异性都非常高,因此能够检测到艾滋病毒感染早期的病例。
此外,PCR技术还可以定量测定病毒的载量,从而评估病情的严重程度。
尽管PCR技术在早期诊断中具有很高的准确性,但由于其设备和操作技术要求较高,临床应用范围有限。
免疫学方法是通过检测患者体内产生的艾滋病毒特异性抗体来早期诊断艾滋病。
目前常用的免疫学方法包括各种抗体检测试剂盒和免疫层析技术。
这些方法操作简便,成本低廉,适用于大规模筛查和快速检测。
然而,由于艾滋病毒感染后,患者体内的抗体产生需要一定的时间,因此这些免疫学方法在感染后的早期阶段可能无法及时准确地诊断感染情况。
除了分子生物学和免疫学方法外,近年来还出现了一些新的早期诊断方法及技术。
其中,核酸序列分析和蛋白质组学技术是最具有前景和潜力的方法之一。
核酸序列分析是指通过对靶标基因或蛋白质产生的相应RNA或DNA进行测序,寻找患者血液中的艾滋病毒核酸序列。
这种方法可以提高对艾滋病毒感染的准确性和敏感性,特别是对那些抗体检测阴性但核酸阳性的早期感染患者。
蛋白质组学技术是研究蛋白质在细胞和生物体中表达、组装和功能等方面的方法。
通过对艾滋病毒感染前后患者血液样本中的蛋白质组进行比较分析,可以筛选出具有艾滋病毒感染相关的特征蛋白,从而实现早期诊断。
这些新的早期诊断方法的出现为早期发现艾滋病毒感染提供了新的途径和手段。
乙肝病毒特性与致病机理研究进展王晓冬,王峰,吕月蒙,李强,张国峰,孙涛,贾亚雄甘肃农业大学生命科学技术学院,甘肃兰州(730070)E-mail:wangxiaodong505@摘要:乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)是引起中国及东南亚一带病毒性肝炎的主要病原之一,有半数以上HBV感染的患者将会发展为慢性肝炎(Chronic Hepatitis, CH)、肝硬化(Liver Cirrhosis, LC),甚至肝细胞性1fl癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC ),常被形象的称之为“慢性肝病三步曲”。
新近有多项研究表明活化的T细胞反应可能在HBV感染的慢性化和肝细胞损伤过程中起重要作用。
CD4+Th细胞可分为Thl和Th2细胞,分别介导两种不同的免疫学效应。
Thl细胞主要分泌IL-2, IFN- X和肿瘤坏死因子(TNF)等细胞因子,参与细胞免疫应答;Th2细胞主要分泌IL-4, IL-5, IL-6和IL-10等细胞因子,参与体液免疫应答;Thl/Th2的平衡决定了免疫应答的有效性和安全性。
Thl与Th2之间存在相互制约或促进左右,细胞因子组成一个复杂的分子网络,参与调节炎症反应以及器官功能的自我稳定。
关键词:细胞因子,乙型肝炎病毒,细胞毒性T淋巴细胞1.引言乙型病毒性肝炎(hepatitis B, HB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)引起的。
HBV的感染不仅可以导致急、慢性病毒性肝炎和重性肝炎,而且还与肝硬化(liver cirrhosis, LC)和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生、发展密切相关。
20﹪的慢性乙肝患者将发展成为肝硬化,HBV慢性感染的人罹患HCC的危险性是正常人的100倍。
HBV感染呈世界性分布,其中西欧、北美、澳大利亚为低流行区,乙性肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen, HBsAg)携带率在2﹪以下;东欧、日本、南美、北美和地中海国家为中流行区;中国、东南亚与南非为高流行区(HBsAg 携带率10﹪左右)。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术,可以用于检测病毒感染。
人巨细胞病毒(HCMV)是一种广泛存在于人群中的病毒,它可以引起免疫功能低下人群的严重感染。
本文将通过对实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义进行分析,以期探讨该技术在临床诊断和治疗中的应用前景。
一、HCMV感染与临床疾病HCMV感染是一种全球性分布的病毒性感染,通常对健康人群并不产生严重影响,但对于免疫功能低下的人群,特别是器官移植受者、艾滋病患者和先天免疫缺陷患者等,HCMV感染可能导致严重并发症,如肺炎、肝炎、胃肠道炎症等。
HCMV还是新生儿感染的主要致病因子之一,导致新生儿先天性HCMV感染,可能引发先天性畸形和神经系统损伤。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染1. 技术原理实时荧光定量PCR是一种核酸扩增技术,它结合了PCR扩增和荧光探针技术,能够实现对靶基因数量的准确计数。
在进行PCR扩增的荧光探针与靶基因结合,产生特定的荧光信号,通过荧光信号的强度可以定量检测靶基因的数量。
实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高准确性和高特异性的特点,能够快速准确地检测HCMV感染。
2. 临床应用实时荧光定量PCR检测HCMV感染已被广泛应用于临床诊断和监测。
在器官移植术后感染HCMV的患者中,通过定期对血液或组织样本进行实时荧光定量PCR检测,可以及时发现HCMV感染的情况,以便早期干预治疗。
对于新生儿先天性HCMV感染的诊断,实时荧光定量PCR也具有高度的准确性和可靠性,有助于早期发现感染,进行及时治疗。
1. 提高诊断准确性传统的HCMV感染诊断方法包括病毒培养、免疫组化检测和血清学检测等,这些方法存在着时间长、操作复杂、准确性低等缺点。
而实时荧光定量PCR检测HCMV感染具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点,能够在短时间内对HCMV感染进行快速、准确的诊断,有助于提高诊断准确性。
丙型肝炎由丙型肝炎病毒(HCV)感染所致,主要由血液/体液传播。
据世界卫生组织估计,全球有亿人感染HCV。
在我国健康人群抗HCV阳性率为%~%,约3800万人。
由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素,机体免疫往往难以有效清除病毒,致使约50%~80%HCV感染者发展为慢性肝炎,其中20%~30%将发展成肝硬化。
肝硬化患者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。
一、基因组特征:丙型肝炎病毒呈球形颗粒,直径约为50nm,有一脂质包膜。
基因组为单链正链RNA,链长月。
整个基因组只有一个ORF,编码一条由3010~3033个氨基酸组成的聚蛋白前体,该蛋白前体在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶作用下,裂解为病毒的结构蛋白和非结构蛋白。
(如图所示)在HCV基因组中,5’端有一个长度和序列非常稳定的非编码区(UTR),由341个核苷酸组成,形成4个二级结构域,为病毒复制和翻译所必需。
此区是整个基因组中最保守的区域,所以常常选择该区域的基因序列作为基因扩增的靶序列,这样可以检测出目前已知的所有HCV基因型。
3’端UTR包括3个结构域:靠近5’端为基因型特异的多变区(不同基因型之间的核苷酸序列差异较大;相同基因型之间核苷酸序列比较保守);居中部分为一个多聚U区域(poly U),含有50~62个核苷酸,对病毒RNA复制至关重要,但不同基因型的HCV的多聚U区域长度不等;3’端尾部为高度保守的发夹样结构,称为X-tail。
通过定点突变破坏这一结构会导致RNA病毒复制的显著降低,说明该区域对RNA病毒有效复制同样重要。
5’端和3’端UTR之间是一个ORF并且分成9个区域:核心区→E1区→NS1/E2区→NS2区→NS3区→NS4a区→NS4b区→NS5a区→NS5b区。
其中NS5b区域在不同型HCV中同源性较低,可作为HCV分型依据。
二、分类急性丙型肝炎——成人急性丙型肝炎病情相对较轻,多数为急性无黄疸型肝炎,ALT升高为主,少数为急性黄疸型肝炎,黄疸为轻度或中度升高。
!M"!经肝动脉化疗栓塞术联合靶向/免疫治疗在中晚期肝细胞癌中的应用进展赵晓辉,姚全军,黎海亮,胡鸿涛郑州大学附属肿瘤医院(河南省肿瘤医院)微创介入科,郑州450008摘要:我国肝细胞癌患者发现时多为中晚期,其治疗方法主要包括经肝动脉化疗栓塞术(TACE)和系统治疗。
本文介绍了从索拉非尼、仑伐替尼为代表的靶向药物,再到免疫治疗的异军突起———阿替利珠单抗联合贝伐珠单抗获批一线治疗方案,同时TACE联合靶向和/或免疫治疗的研究也在进行中,取得了较好的疗效,这些都为中晚期肝癌患者带来了更好的生存预后。
但是,想要真正改变中晚期肝癌预后的问题,仍需要在此基础上进行更多的探索与研究。
关键词:癌,肝细胞;靶向治疗;免疫疗法;化学栓塞,治疗性基金项目:河南省自然科学基金面上项目(212300410403);2022年度河南省人力资源和社会保障厅留学人员科研择优资助项目;河南省医学教育研究项目(Wjlx2021334)Advancesinapplicationoftransarterialchemoembolizationcombinedwithtargetedtherapy/immunotherapyinad vancedhepatocellularcarcinomaZHAOXiaohui,YAOQuanjun,LIHailiang,HUHongtao.(DepartmentofMinimallyInvasiveIntervention,TheAffiliatedCancerHospitalofZhengzhouUniversity&CancerHospitalofHenanProvince,Zhengzhou450008,China)Correspondingauthor:HUHongtao,huhongtaogy@163.com(ORCID:0000-0002-5432-4014)Abstract:Mostofthepatientswithhepatocellularcarcinoma(HCC)inChinaareintheadvancedstageatthetimeofdiagnosis,andthetreatmentmethodsforHCCmainlyincludetransarterialchemoembolizationandsystemictherapy.Thisarticleintroducesthetargeteddrugsrepresentedbysorafenibandlenvatinib,andtheemergenceofimmunotherapy.Atezolizumabcombinedwithbevacizumabhasbeenapprovedasthefirst-linetherapyforHCC,andmeanwhile,studiesonTACEcombinedwithtargetedtherapyand/orimmunotherapyhaveachievedasatisfactorytreatmentoutcome,whichbringsbettersurvivalandprognosisforpatientswithadvancedHCC.However,morestudiesareneededtosolvetheissuesrelatedtotheprognosisofadvancedHCC.Keywords:Carcinoma,Hepatocellular;TargetedTherapy;Immunotherapy;Chemoembolization,TherapeuticResearchfunding:HenanProvincialNaturalScienceFoundationGeneralProject(212300410403);2022HenanProvincialDepartmentofHumanResourcesandSocialSecurityResearchScholarshipforOverseasStudents;HenanProvincialMedicalEducationResearchProject(Wjlx2021334)DOI:10.3969/j.issn.1001-5256.2022.12.033收稿日期:2022-04-11;录用日期:2022-06-15通信作者:胡鸿涛,huhongtaogy@163.com 从2007年索拉非尼获批作为肝细胞癌(HCC)一线系统治疗药物[1-2],到2013年FOLFOX4化疗方案取得了较高水平的循证医学证据,肝癌的系统治疗取得了一定的进步,但患者的生存获益仍不理想,总生存期(OS)仅6.47个月[3]。
1. 为何要进行丙型肝炎病毒检测丙型肝炎是一种主要经血液传播,由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)所引起的肝脏炎症性疾病。
从严重程度看,丙型肝炎有可能只出现几周轻微症状,也可能终身患有严重肝病,并可能导致肝硬化或肝癌。
丙肝具有高隐匿性、高漏诊、高慢性化三大特点。
目前可使用抗病毒药物治疗丙肝。
全球每年有三、四百万人感染丙肝病毒。
约有1.5亿人患有慢性丙肝,并面临发生肝硬化和/或肝癌的风险。
每年有35万余人死于与丙肝相关的肝脏疾病。
丙型肝炎的监测方法有多种,包括丙肝病毒抗体酶免疫反应,重组免疫杂交法,和丙肝病毒核糖核酸定量测定。
其中,使用聚合酶链式反应(PCR)技术的丙肝病毒核糖核酸(HCV RNA)定量测定,可以在病毒感染1-2周之内就检测出病毒RNA的存在。
然而抗体则需要感染以后很长时间才能被检测到。
根据病毒RNA的存在,丙肝病毒感染并存在体内6个月以上的称为慢性丙型肝炎。
慢性丙型肝炎通常在感染病毒的前几十年没有表征,因此它的发现通常是因为检测到相关肝脏酶水平的升高,或者对高危易感人群的筛查。
但是检测无法区分慢性与急性。
对婴儿的检测更加困难,因为母体抗体可以在婴儿体内存在长达18个月。
(/liver/info-progress/show-60538_35.html) 由于HCV复制所依赖的RNA聚合酶缺乏校正功能,致使其基因组发生突变的频率较高,从而更容易逃避机体的免疫识别。
HCV的高度变异性,使其在不同地区、不同患者、甚至同一患者的不同病程中均呈现不同基因型。
通过测序技术检测丙肝病毒的不同突变称为丙肝病毒的分型。
丙肝病毒有六个基因型,而不同的基因型可能会对治疗产生不同的反应。
因此,在开始治疗前需要认真筛检,以确定最适当的治疗方案。
不同型别丙肝病毒对肝脏的损伤程度不同,导致疾病的严重程度不同。
对HCV基因进行分型有助于了解HCV感染的分布特征、变异及进化演变情况,有助于丙肝疫苗的研制。
随着医疗水平的不断提高,临床对血液安全的要求越来越高。
为保障临床用血安全,国家以法规、标准等多种形式对献血者血液ALT、HCV、HBsAg、HIV、梅毒螺旋体等进行了检测规定[1]。
但对人类Pegivirus (HPgV,之前被称为庚型肝炎病毒GBV-C/HGV)是否纳入常规化检测至今未明确,对于经血液传播且在一般人群中广泛存在但与疾病的关系还不确定的HPgV 因子的控制方法仍在研究之中。
本文就HPgV与输血安全研究进展作一综述。
1HPgV的发现1967年,Deinhardt F等将急性黄疸型肝炎患者(G.B.)的血清接种入狨猴体内导致狨猴肝炎发生,将可能引起肝炎的致病因子命名为GB病毒[2]。
1995年,美国Abbott实验室的Simons与Genelabs实验室的Linnend等采用分子病毒学技术分别分离出1种可能引起人类非甲非戊型肝炎GB病毒C(GBV-C)和庚型肝炎病毒(HGV)。
1996年,中国首次分离并报道了该病毒[3]。
GBV-C与HGV的核苷酸及氨基酸的同源性非常接近,经分析基因组序列发现他们为同一种病毒的不同分离株,于是GBV-C与HGV统一命名为庚型肝炎病毒(hepatitis gvirus,HGV)[2,4]。
2013年,国际病毒分类委员会批准在黄病毒科下设一个新属Pegivirus genus,GBV-C/HGV重新命名为HPgV[5-6]。
2HPgV基因型及分布HPgV为有包膜的单股正链RNA病毒,属黄病毒科Pegivirus属,直径50~100nm,其含有脂质包膜,上有包膜蛋白E1和E2。
含有一个开放读码框架(ORF),编码长约2900个氨基酸多肽,5’端为结构区,3’端为非结构区[7]。
目前,已经被鉴定的基因型有7种,彼此间的差异性为11%~14%[8],基因型1在西非人中分离,基因型2在美国、欧洲、南美、北非人群检测到,基因型3在亚洲和美洲印第安人中及造血干细胞移植患者中流行,基因型4通常发现于东南亚,基因型5在南非发现[9-10],可能涉及HPgV/HIV共感染的基因型6病毒在印度尼西亚人中发现[11-12],在中国云南地区发现新的基因型暂命名GBV-C7型,其在HIV-1感染的静脉吸毒人群中主要流行[13]。
新型分子诊断技术在传染性疾病检测和监测中的应用前景摘要:在探讨新型分子诊断技术在传染性疾病检测和监测中的应用前景,以提供对该领域的深入了解。
通过文献综述和案例分析,对PCR技术、全基因组测序和新兴的核酸放大技术等新型分子诊断技术在传染性疾病检测中的应用进行概述和总结。
新型分子诊断技术为传染性疾病的快速、准确和敏感检测提供了有力工具。
以HIV/AIDS和流感病毒为例,分子诊断技术在病毒感染的检测和临床应用方面取得了显著成果。
对于细菌感染,如肺结核和抗生素耐药菌的检测,分子诊断技术也展现出巨大潜力。
关键词:新型分子诊断技术、传染性疾病、PCR技术、全基因组测序、核酸放大技术、病毒感染、细菌感染、检测、应用前景引言:传染性疾病是全球卫生领域的重要挑战,对人类健康和社会稳定产生广泛影响。
随着全球化和人口流动的增加,传染病的爆发和传播速度变得更加迅速和复杂。
因此,快速、准确且敏感的传染性疾病检测和监测方法具有至关重要的意义。
然而,传统的传染性疾病检测方法存在一些局限性,如时间延迟、复杂操作和限制性设备需求等。
为了克服这些问题,新型分子诊断技术应运而生。
这些技术基于对病原体的核酸或蛋白质标志物进行检测和分析,能够提供快速、准确和高灵敏度的结果。
本文旨在探讨新型分子诊断技术在传染性疾病检测和监测中的应用前景。
首先,我们将介绍传染性疾病的全球流行趋势,以便更好地理解该领域的紧迫性和重要性。
接着,我们将回顾传统检测方法所面临的局限性,以突出新型分子诊断技术的出现和优势。
通过深入研究和应用新型分子诊断技术,我们有望在传染性疾病的检测和监测中取得显著进展。
这些技术的发展将提供更准确、高效和便捷的工具,有助于及早发现传染病疫情、追踪病原体传播途径并采取相应措施,以维护公共卫生和人类健康。
接下来的章节将对新型分子诊断技术进行概述,并重点介绍PCR技术、全基因组测序和新兴的核酸放大技术等技术在传染性疾病检测中的应用案例。
最后,我们将讨论新型分子诊断技术在传染性疾病检测和监测领域的应用前景,并展望未来可能的发展方向。
病毒学研究中的新进展和前沿技术现代病毒学研究是一个快速发展的领域,充满了前沿技术和新进展。
病毒是一类独特的微生物,具有高度的复杂性和多样性。
通过病毒学研究,人类能够更好地了解病毒的生物学特征和传播机制,为预防和治疗病毒感染提供有力的基础知识。
在这篇文章中,我们将探讨病毒学研究中的新进展和前沿技术。
一、基因组学基因组学是一项在病毒学研究中日益重要的技术。
病毒基因组是研究病毒生物学的基础,包含着病毒的遗传信息和生物学特征。
随着时间的推移,我们现在已经能够利用高通量测序技术快速测序病毒基因组,并对不同病毒基因组进行比较,进一步了解病毒间的关系和差异。
此外,病毒基因组的研究也能够为病毒疫苗的研发提供关键信息。
例如,在研发COVID-19疫苗时,基因组学技术被用于了解病毒传染性和生物学特征,从而帮助科学家们研发出有效的疫苗。
二、结构生物学结构生物学技术被广泛应用于病毒学研究,能够揭示病毒结构和功能的复杂性。
通过结构生物学技术,我们可以了解病毒在宿主细胞中的生长和复制过程,并发现可远程控制的潜力药物靶点。
最近,结构生物学技术的一个关键进展是微波辐射技术在冷冻电镜显微镜中的应用。
此技术可用于得到紧密契合病毒纤维上的高清晰度图像。
这项技术让研究人员可以更好地了解病毒入侵机制,并探索潜在的药物靶点。
三、单细胞分析技术单细胞RNA测序是一种近年来在病毒学研究中非常重要的技术。
该技术可以测量单个细胞中的RNA分子,从而帮助科学家更好地了解病毒感染过程中的细胞响应和炎症反应。
单细胞RNA测序技术还能够为深入研究有关病毒感染的免疫学响应机制,如细胞凋亡、免疫逃避和细胞介导的免疫应答提供关键数据。
这些数据将为科学家开发更有效的抗病毒疫苗和治疗方法提供重要参考。
四、生物信息学生物信息学是一种利用计算机技术和统计学方法对大规模生命科学数据进行分析和解释的学科。
在病毒学研究中,生物信息学可用于分析病毒序列数据、进行病毒基因组比较和进行数据挖掘。
HCV相关肝硬化抗病毒治疗现状李强;黄玉仙;陈良【期刊名称】《临床肝胆病杂志》【年(卷),期】2015(031)011【摘要】HCV相关肝硬化患者发生肝功能衰竭和肝细胞癌的风险高于非肝硬化患者.抗病毒治疗能够降低HCV相关肝硬化患者肝功能衰竭和肝细胞癌的发生率.介绍了目前HCV相关肝硬化患者抗病毒方案:聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α联合利巴韦林(RBV) (P/R)、直接抗病毒药物(DAA)+ P/R和无干扰素(IFN)方案,总结了HCV相关肝硬化患者的抗病毒治疗现状.认为DAA的出现提高了HCV相关肝硬化的持续病毒学应答率、降低了不良反应发生率,无IFN方案在HCV相关肝硬化患者抗病毒治疗中具有很大的优势和应用前景.【总页数】4页(P1813-1816)【作者】李强;黄玉仙;陈良【作者单位】复旦大学附属公共卫生临床中心肝炎一科,上海201508;复旦大学附属公共卫生临床中心肝炎一科,上海201508;复旦大学附属公共卫生临床中心肝炎一科,上海201508【正文语种】中文【中图分类】R512.63;R575.2【相关文献】1.HCV致失代偿肝硬化的抗病毒治疗 [J], Miquel;Navasa;Xavier;Fores;赵春燕(编译);杨露绮(审校)2.HBV和HCV相关肝硬化的抗病毒治疗 [J], 李瑜元3.HCV核心蛋白,p53,Mdm2,p14ARF在HCV肝炎肝硬化的表达及相关性 [J], 张志培;王文亮;邓中荣;王文勇;李擒龙;王丽4.中国大陆丙肝相关肝硬化及肝癌患者抗病毒治疗现状调查 [J], 卞丹丹;段钟平;蒋莹莹;周海洋;段淑丽;王钊;刘霜;刘梅;陈煜;郑素军5.HCV与HIV协同感染可缩短HCV相关性失代偿期肝硬化患者的存活期 [J], Pineda J.A.;Romero-Gómez M.;Daz-Garca F.;杨瑗因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
.综述. HIV-1新型重组毒株的不断出现对基因型耐药检测结果解释的挑战郑姗廖玲洁邢辉中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心病毒与免疫研究室,北京102206通信作者:邢辉,E m ail: xingh@,电话:************【摘要】艾滋病的流行仍然是重大的全球性问题。
由于HIV的变异与进化,各种新型流行重组型毒株不断被发现。
随着高效抗逆转录病毒疗法的推广使用,HIV耐药性的出现和流行传播增加了抗病毒治疗的难度,新型流行重组毒株的耐药情况研究也成为抗病毒治疗的一个不能回避的问题,本文从国内外HIV-1流行重组毒株的流行特点、全球HIV耐药总体水平及重组毒株耐药位点新发现以及表型耐药检测的研究进展几个方面进行综述。
【关键词】艾滋病病毒;新型重组毒株;基因型耐药;表型耐药基金项目:国家科技重大专项(20172X10201101);国家自然科学基金(81471962 , 81261120393);北京市科技计划项目(D161100000416002 )D0I:10.3760/cma.j .issn. 1673-4092.2020.06.021国际病毒学杂志2020 年12 月第27 卷第 6 期International Journal of Virology, December 2020, Vol. 27, No. 6 • 525 •联合国艾滋病规划署(Joint United Nations Programme on HIV/AIDS, UNAIDS)网站数据表明,全球约有3 790 万HIV存活感染者,2016年的研究报告宣布约1820万艾 滋病感染者在接受抗病毒治疗,近几年接受治疗的人数 越来越多m。
目前抗逆转录病毒治疗成为艾滋病防治的重要措施,虽然有效的降低了新发感染和死亡的发生,但抗病毒治疗中H IV耐药性的产生和传播成为阻碍其效 果的障碍之一,因此需要做好传播性耐药监测、治疗前 耐药和治疗后耐药评估等工作。
HCV抗体检测介绍
HCV抗体检测是一种被用来检测HCV病毒感染的实验室检查,它能检测个体是否感染了该病毒。
HCV抗体是一种由被感染者体内产生的抗体,抗体的产生是人体免疫系统与HCV病毒的反应。
HCV抗体可在受感染之后4-9周开始出现,最终可在受感染者血液中持续存在数十年,因此,HCV 抗体检测是常规的HCV病毒检测方法之一
HCV抗体检测有两种形式:夹心抗体检测(ELISA)和血清沉淀实验(SPT)。
ELISA技术使用被感染者血清中的抗体和特异性抗原和指示剂来检测HCV抗体,而SPT由抗原板和血清组成,以发现半数血清。
ELISA 检测比SPT更为准确,但SPT技术的成本较低。
在临床实践中,HCV抗体检测可以用来诊断HCV感染,评估治疗疗效和监测复发。
HCV抗体检测可以帮助诊断最近或潜在的HCV感染,但如果患者的HCV抗体阴性,则不能确定他未曾感染HCV,因此,如果结果为阴性,建议进行HCV核酸PCR检测。
另外,HCV抗体检测可以用于评估治疗的有效性,一般情况下,如果HCVDNA水平下降到最低程度,HCV抗体水平也会随之下降,如果HCV抗体浓度在治疗结束后持续保持低水平,则表明治疗已经成功氶藩病毒。
HCV抗体检测介绍解析HCV是指丙型肝炎病毒(hepatitis C virus)。
该病毒主要通过血液传播,并导致急性或慢性肝炎。
对HCV进行抗体检测是一种常见的诊断方法,下面将介绍HCV抗体检测的原理、方法和临床意义。
HCV抗体检测的原理是通过检测人体对HCV感染产生的抗体来判断感染状态。
在HCV感染初期,病毒进入人体后,免疫系统会产生抗体来抵抗病毒。
这些抗体主要包括IgM和IgG抗体。
IgM抗体在感染初期产生,表明当前正在进行的活动性感染。
而IgG抗体在感染初期后产生,持续存在,用于判断患者是否曾经感染过HCV病毒。
因此,通常通过检测IgG抗体来判断HCV感染的情况。
HCV抗体检测的方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光法(IFA)。
ELISA是一种常用的抗体检测方法,其基本原理是利用酶作为标记物,检测抗体与抗原的结合情况。
在HCV抗体检测中,ELISA主要通过将HCV抗原固定在酒店板上,加入待测血清样本,若待测样本中存在HCV抗体,抗体将与抗原结合,然后通过酶的作用产生显色反应来检测HCV抗体的存在。
免疫荧光法是一种检测抗体的特异性方法,其原理是利用荧光标记的抗体与待测样本中的抗原结合,并使用荧光显微镜观察荧光信号来判断抗体的存在。
免疫荧光法能够提供更直观、敏感的结果,并且可以进行亚型化的检测,对于HCV抗体检测的评估和诊断起到了重要的作用。
HCV抗体检测在临床中有着重要的意义。
首先,对于肝炎病毒感染的筛查和诊断起到了关键的作用。
早期的HCV感染通常是无症状的,容易被忽略,而HCV抗体检测能够发现感染的早期阶段,及时进行干预治疗。
其次,HCV抗体检测对于患者治疗的评估也非常重要。
通过监测HCV抗体的变化可以判断治疗效果以及预测复发的可能性。
此外,HCV抗体检测还可以用于评估肝炎病毒的流行病学调查和病毒学研究。
最后,需要注意的是,HCV抗体检测具有一定的错误率。
早期HCV感染往往抗体产生不稳定,导致抗体检测呈阴性结果,但实际上人体已经感染了病毒。
HCV
检测现状及新进展
发表时间:
2010-05-04T15:13:00.747Z 来源:《中外健康文摘》2009年18期供稿 作者: 李秀云1 王秀珍2
[导读] 我国平均感染率为3.2%。北方稍高,约为4.6%,南方为2.6%~2.9%,感染人数估计有3700万。
李秀云
1 王秀珍2
(
1辽宁省抚顺市中心医院 辽宁抚顺 113006; 2 辽宁省第三人民医院 辽宁开原 112300)
【中图分类号】
R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2009)18-0259-02
【摘要】
丙肝是严重威胁人类健康的传染病之一,主要通过血液传染。我国平均感染率为3.2%。北方稍高,约为4.6%,南方为2.6%~
2.9%
,感染人数估计有3700万。受感染的母亲传播给婴儿的发生率为5%。患急性肝炎后约有50%~70%的感染者有转为慢性肝炎的倾
向,重者
20~25年后可转化为肝硬化,肝硬化患者10年内有大约30%的发展为终末期肝病[1-2],并且HCV感染与原发性肝细胞癌有较密切
的关系。对于
HCV感染者,第3、5、7、10年的肝癌累积发生率达11%、18.1%、29%、45.6% [3]。随着医学检验的迅猛发展,HCV检测
技术也不断提高.但与检测乙型肝炎病毒(
HBV)相比,HCV的检测还有许多难题有待解决。
【关键词】
HCV 抗–HCV RNA ELISA RT-PCR
HCV
检测目前存在的主要问题有:1.由于HCV抗原结构的特殊性,直接检测血清中HCV抗原的技术问题还未彻底解决。2.抗体(抗-
HCV
)出现时间晚,从HCV感染后到抗体转阳的时间平均为50~70天,有的患者可延长至6~9个月,检测的“窗口期”较长。3.病毒基因型
复杂而且容易变异,使基因水平的检测质量不够稳定。随着有关人员近年来的不断努力和相关科学的迅猛发展,已经在
HCV检测技术方面
有了重要进展。
1
第三代抗-HCV试剂的应用
检测丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)仍是目前常用手段,这方面的检测方法主要是第三代酶免疫测定法(EIA)或间接酶免疫法
(
ELISA),我国大多采用ELISA方法。
ELISA
方法中包被抗原的组成和质量是关键因素。第三代ELISA试剂比第一、第二代试剂有明显的改进,其包被的抗原为HCV核心抗
原
NS3、NS4和NS5。由于第一、第二代试剂的重组基因多肽抗原中仍有SOD多肽,所以都存在抗-SOD造成的假阳性。而第三代HCV试
剂,用中国北方地区
HCV全基因序列,根据文献开发的预测蛋白理化性质及三级结构和抗原决定簇的位点的序列软件,完成了HCV全基因
序列的亲水性﹑亲近性﹑移动性分析,已预测到
HCV抗原决定簇的位点。第三代试剂的特异性达到99%[4]。抗-HCV检测可成为丙型肝炎
病毒早期感染的检测指标
[5]。
HCV
感染通常是持续的终生感染。虽然第三代HCV抗体ELISA试剂增加了HCV Ns5区表达的蛋白作为抗原,提高了试剂敏感性,HCV
感染的
“窗口期”通常还需要平均40多天。因此,第三代ELISA试剂仍需要提高和改进,例如在筛查试验的特异性方面,仍存在假阳性结果。
对强阳性或弱阳性样本的检测,国产试剂(主要厂家)的
s/co值高于进口试剂,但是无论对阳性及阴性样本检测,国产试剂的CV值及特异
性均明显低于进口试剂,以致出现更多的假阳性结果。此外,丙肝抗体酶免试剂皆没有灰区的设定,
s/co比值较低(但大于1)的结果也
报告阳性,亦是假阳性比较多的原因。
[6]
2
丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立
多年来,专业人员一直探索能够直接检测HCV抗原,以达到缩短窗口期的目的。但是由于HCV抗原的特殊性和相关抗体制备中存在的
困难,使这方面的进展受到阻碍。
2.1 HCV
核心抗原检测
HCV
核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染指标,几乎与HCV RNA同时出现,核心抗原和HCV RNA的动力学变化密切相关。
HCV
核心抗原检测用双抗体夹心法定性或定量检测血清样品中的HCV核心抗原,其基本原理是:以基因工程核心抗原免疫小鼠后获得
的纯抗
HCV核心抗原单克隆抗体作为固相包被物,用与固相包被物有不同抗原决定簇的抗-HCV核心抗原单克隆抗体作为辣根过氧化物酶标
记物,与血清中的
HCV核心抗原反应,OPD显色后进行定性或定量测定。该方法不受被检测样品中抗-HCV的干扰,检测结果准确可靠。可
用于
HCV早期急性丙型肝炎诊断,抗-HCV阳性感染者的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析[7]。
有报道,HCV-CAg检测可以较HCV抗体检出时间提早23~46d[8],且EIA法较PCR法简便、快速,现有能力开展ELISA检测的实验室
无需增加特殊设备,均可检测。其结果与
RT-PCR方法的复合率为85.71%。因此,在不具备RNA检测条件的实验室开展HCV-CAg检测时很
好的筛查方法。有报道,在对
180例抗-HCV阴性患者的筛查中,检出HCV-CAg阳性2例,表明仅用抗-HCV检测将有可能存在0.55%感染
者漏诊的风险,尤其是对手术前丙肝病毒筛查的病例,它涉及到术中感染责任和用血安全等问题。丙肝核心抗原检测在一定程度上降低了
这些风险。因此
,丙肝核心抗原检测可作为HCV抗体检测的补充试剂。
2.2 HCV
抗原检测
十几年来,一些学者曾经试图建立血清中各种HCV抗原的检测方法,但由于血液中HCV抗原含量太低,用常规方法无法检测出。近年
来,由于
HCV单克隆抗体的研究成功,已有国内外学者发表了肝组织及人体分泌物中HCV抗原检测成功的报导。如果能加强对HCV中和抗
体
Wv、抗-HCV-IgM、抗-HCV核心抗体的研究[9],进一步开发对血清及肝组织内HCV抗原的测定,可能会在丙肝的实验诊断方面取得更大
进展。
3
丙型肝炎病毒RNA的检测
现在用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测血清中的HCV RNA。基本原理是首先经逆转录酶作用,在特异性引物存在下,将HCV
RNA
逆转录为单链的CDNA,再通过PCR将CDNA扩增。定性PCR的灵敏度高于定量PCR。罗氏公司的定性PCR的灵敏度为50KIU/L,定
量
PCR为600KIU/L;拜尔公司的定性PCR的灵敏度为10KIU/L,其定量PCR为615KIU/L。定性PCR检测主要用于急性丙型肝炎诊断,而定
量
PCR则用于疗效监测。
最新报导,应用转录介导的扩增系统(TMA)可以将HCV RNA的检出率提高到5~10Iu/ml的水平。其原理为:目标序列在逆转录酶作用
下,以引物为引导进行逆转录,逆转录酶的
RNA酶H活性将杂合链上的RNA降解以后,合成双链的DNA,并在T7 RNA多聚酶的作用下,转
录出成千上万个目标
RNA序列,这些RNA又可以作为模板进行下一个循环,整个反应是一个自我催化过程,灵敏度高,反应条件简单,扩
增效率高,无需专门的扩增仪器,整个反应在一个试管中进行,减少污染。
参
考 文 献
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