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93-全自动推片染色机染色条件设计探讨

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全自动推片染色机染色条件设计探讨

余珊、李晓帅、罗江卫 【摘要】

目的 对血涂片和骨髓片的染色原理及染色条件进行探讨，得出适合SC-120全自动推片染色

机的染色参数，并建立染色效果调试方法，引导临床实验室根据不同类型染色需要及各实验

室的染色质量要求优化其染色流程，提高血细胞镜检准确性。 方法 用高效液相色谱

（HPLC）方法分析多种品牌染色液的着色主要成分的含量，结合血细胞的染色原理及染色

过程，分析染料成分的差异可能导致染色效果不同。选取国内外具有代表性的两种染色方法：

瑞氏-姬姆萨和梅氏-姬姆萨，用迈瑞的SC-120全自动推片染色机进行两种方法的推片染色实

验，选取合适的临床样本在SC-120仪器上设置不同的染色参数完成推片染色，安排有镜检经

验的检验人员进行镜检，观察各染色条件下的染色效果，从而得到不同染色方法的最佳染色

条件。 结果 不同染色方法及品牌的染色液其染色的主要成分天青B和伊红Y含量差异较

大，从而导致染色效果的差异，应有针对性地选择合适的染色条件。在迈瑞SC-120全自动推

片染色机上使用瑞氏-姬姆萨染色液染色的最佳染色参数为：设置单染色方法的第三档，染

色时间为0.5+3+5min；使用梅氏-姬姆萨染色液染色疟原虫样本的最佳染色参数为：设置双

染色方法第四档，染色时间为0.5+1.5+7min；染骨髓样本的最佳染色参数为：设置双染色方

法第五档，染色时间为0.5+1.5+7min。 结论 不同染色方法及品牌的染色液需要设置不同

的染色参数，临床检验人员应充分考虑各种影响染色效果的因素，根据各实验室染色质量要

求制定符合自身实验室的染色方案，提高血细胞镜检的准确性。 【关键词】

天青B；伊红Y；SC-120全自动推片染色机；染色条件

血涂片和骨髓片染色液是由亚甲蓝和/或亚甲蓝氧化产物（天青B），和卤化荧光素（通

常为伊红B或Y）组成，目前临床实验室常用的染色方法有瑞氏、瑞氏-姬姆萨、梅氏-姬姆

萨等。1976年血液学国际标准化委员会（ICSH）成立了一个染色和染色方法专家小组，该

小组负责提出血液和骨髓片罗曼诺夫斯基染色法的标准化方法[1]。

该类染色液中的伊红为钠盐，其有色部分为阴离子，呈酸性，记为E-；亚甲蓝为氯盐，

其有色部分为阳离子，呈碱性，恰与伊红相反，记为M+。它们与细胞内的物质具有不同的

亲和力，而使其显现出不同的色调，以利辨认。 细胞的着色过程既有物理吸附作用，又有化学亲和作用。由于血细胞内不同结构所含有

的化学成分不同，对各种染料的亲和力也不同，细胞成分因选择性吸附其中的有色物质而着

色[2]。

图 1 亚甲蓝（A）、天青B（B）和伊红（C）的化学结构图

图 2 染料与DNA结合嵌入沟回中 血涂片和骨髓片染色液的主要原料是亚甲蓝和伊红Y，但在染色过程中起主要作用的却

是亚甲蓝的氧化产物天青B和伊红Y。目前该类染色液已商品化且品牌繁多，国内的临床

实验室以瑞氏-姬姆萨染色方法为主，国外的临床实验室以梅氏-姬姆萨染色方法为主。不同

厂家生产的染色液成分有差异，我们用高效液相色谱（HPLC）方法测试了目前国内外主要

使用的多种染色液中的天青B及伊红Y的含量（见图 3图 4、表 1和表 2）。

0 0

0 0 天青亚甲蓝AB

CD

图 3 不同品牌瑞氏（A）、瑞-姬氏（B）、姬姆萨（C）和梅氏（D）染色液的HPLC图谱（流动相为乙腈:水= 35:65，流速0.5 mL/min）

0 0

0 0 伊红亚甲蓝+天青AB

CD

图 4 不同品牌瑞氏（A）、瑞-姬氏（B）、姬姆萨（C）和梅氏（D）染色液的HPLC图谱（流动相为乙腈:水= 60:40，洗脱速度0.5 mL/min） 表 1 多种品牌染色液的亚甲蓝和天青B浓度 试剂类型 试剂品牌 亚甲蓝浓度（g/L） 天青B浓度（g/L）

瑞氏染色 国外品牌1 0.00 0.19 国外品牌2 0.09 0.04 国内品牌1 0.04 0.03 国内品牌2 0.06 0.03

瑞氏-姬姆萨染色 国外品牌1 0.00 0.20 国内品牌2 0.06 0.04 国内品牌3 0.09 0.06

姬姆萨染色 国外品牌1 0.00 0.24 国外品牌2 0.05 0.15 国内品牌1 0.05 0.04 国内品牌2 0.06 0.04

梅氏-姬姆萨染色 国外品牌1 0.06 0.05 国外品牌2 0.04 0.03

表 2 多种品牌染色液的伊红浓度 试剂类型 试剂品牌 主峰浓度（g/L） 杂峰浓度（g/L）

瑞氏染色 国外品牌1 0.29 0.02 国外品牌2 0.13 0.01 国内品牌1 0.05 0.02 国内品牌2 0.06 0.03

瑞氏-姬姆萨染色 国外品牌1 0.25 0.01 国内品牌2 0.09 0.04 国内品牌3 0.11 0.03

姬姆萨染色 国外品牌1 0.19 0.01 国外品牌2 0.26 0.03 国内品牌1 0.01 0.01 国内品牌2 0.08 0.03

梅氏-姬姆萨染色 国外品牌1 0.09 0.03 国外品牌2 0.07 0.00

从表 1、表 2的测试结果来看，国内外的不同品牌其染色液天青B和伊红Y的含量有

很大差异，这种差异或直接导致染色效果的不同，所以不同品牌的染色液需要设置不同的染色条件才能达到染色质量要求。对于采用手工方法制片的实验室，因其操作步骤繁琐、人为因素大，技术要求高，每个实验室应按照各自的实验室染色质量要求设计并建立染色流程的

标准SOP文档，从而更好地控制推片染色质量；近年来随着临床标本量的大幅增加，人工制片已不能满足大量临床工作的要求，自动化制备血涂片是行业大势所趋。此类仪器具有涂

片质量好且稳定、工作效率高、省时省力、安全，操作者不需要接触标本，可与流水线系统

组合，基于规则自动推片染色等优点。对于采用自动化仪器方法制片的实验室，保持仪器性

能稳定的同时也必须建立统一的适用于该仪器的染色参数。

本文使用迈瑞的SC-120全自动推片染色机，取合适的临床样本，设置不同的染色参数

完成推片和染色，安排有镜检经验的检验人员进行镜检，观察各染色条件下的染色效果，从

而得到不同品牌染色液染色的最佳参数及注意事项。

1 材料和方法

1.1 实验仪器及材料

 仪器：SC-120推片染色机一台，配套试剂为M-68DS稀释液（深圳迈瑞生物医疗

电子股份有限公司生产）。

 染色液及玻片：1）瑞氏-姬姆萨染色液（珠海BASO品牌）2）梅氏染色液（德国

Merck品牌）3）姬姆萨染色液（德国Merck品牌）4）玻片为显微镜载玻片（江

苏世泰实验器材有限公司）。

1.2 样本要求

 医院门诊与病房新鲜EDTA-K2抗凝的全血标本：离体≤4h，常温放置；常用抗凝

剂为EDTA-K2，EDTA浓度为1.5～2.2mg/ml。  样本量不少于1.5ml。

1.3 SC-120染色过程

步骤1：甲醇预固定（可选）步骤2：染液浸染步骤3：混合液（染液+缓冲液）浸染步骤4：冲洗 图 5 SC-120全自动推片染色机染色流程 上述流程中，甲醇预固定、染色液和混合液浸染的时间均可设，混合液的比例有多种档

位可调。

1.4 实验方法

1.4.1 BASO品牌的瑞氏-姬姆萨染色

 设置SC-120染色为单染第三档（详见表 3） 表 3 SC-120单染色液染色比例 档位 瑞-姬氏 混合液比例 瑞-姬式 缓冲液 第一档 6mL 0mL 5.4mL 第二档 6mL 0.3mL 5.4mL 第三档 6mL 0.6mL 5.4mL 第四档 6mL 0.9mL 5.4mL 第五档 6mL 1.2mL 5.4mL

 按下表 4分别设置染色时间，取临床样本进行推片和染色 表 4 染色时间设置 序号 甲醇 瑞-姬 混合液（1：9） 冲洗 染色时间 （min） 瑞-姬 缓冲液 1 0.5min 1min 1.5min 4次 0.5+1+1.5 2 0.5min 1min 2.5min 4次 0.5+1+2.5 3 0.5min 1min 5min 4次 0.5+1+5 4 0.5min 3min 5min 4次 0.5+3+5 5 0.5min 1min 8min 4次 0.5+1+8 6 0.5min 3min 8min 4次 0.5+3+8  镜下观察血涂片细胞的着色情况。

1.4.2 MERCK品牌的梅氏-姬姆萨染色

1.4.2.1 疟原虫样本血涂片染色

 设置SC-120染色为双染第三档和第四档（详见表 5）

表 5 SC-120双染色液染色比例 档位 梅氏 混合液比例 梅氏 姬姆萨 缓冲液 第一档 6mL 0mL 0mL 5.4mL 第二档 6mL 0mL 0.3mL 5.4mL 第三档 6mL 0.3mL 0.3mL 5.4mL 第四档 6mL 0mL 0.6mL 5.4mL 第五档 6mL 0.3mL 0.6mL 5.4mL 第六档 6mL 0.6mL 0.6mL 5.4mL 第七档 6mL 0.3mL 0mL 5.4mL 第八档 6mL 0.6mL 0mL 5.4mL 第九档 6mL 0.6mL 0.3mL 5.4mL  固定染色时间为0.5+1.5+7min、冲洗4次，分别对疟原虫样本进行染色。

 镜下观察血涂片疟原虫体着色情况。

1.4.2.2 骨髓样本染色

 设置SC-120染色为双染第三档和第五档（详见表 5）

 固定染色时间为0.5+1.5+7min，冲洗4次，分别对骨髓样本进行染色。

 镜下观察骨髓样本细胞的着色情况。 2 结果 2.1. BASO品牌的瑞氏-姬姆萨染色

图 6 不同染色时间瑞氏-姬姆萨染色的镜下效果图 从图 6细胞着色来看：

1） “瑞氏-姬姆萨+缓冲液”染色时间增加到5分钟时，中性粒细胞胞浆非特异性颗粒

有轻微增加的趋势，说明混合液染色时间不能太短，否则两类颗粒（非特异性及特

异性颗粒）均很难染上色； 2） 瑞氏-姬姆萨染色时间增加，细胞胞浆色彩、中性粒细胞胞浆特异性颗粒染色有增加

的趋势；

3） 综合细胞着色的效果来看，“0.5+3+5”时，细胞各种细微结构染色均很清晰，为最

佳染色参数。

2.2. MERCK品牌的梅氏-姬姆萨染色

2.2.1 疟原虫样本血涂片染色

图 7 不同染色参数设置疟原虫镜下效果图 从图 7细胞着色来看：

1） 第三档染色方法，镜下可见疟原虫，但虫体的细节结构（如薛氏点、疟色素）较模

糊；

2） 第四档染色方法加大了姬姆萨染色液的浓度，镜下可见疟原虫染色清晰、与第三档

染色相比其虫体立体感很强，各种细节结构（如薛氏点、疟色素）辨识度较高。

2.2.2 骨髓样本染色

图 8 不同染色参数设置骨髓片镜下效果图 从图 8细胞着色来看：

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天然染色创新实验报告(3篇)

天然染色创新实验报告(3篇)

第1篇

一、实验背景

随着人们环保意识的提高和天然染料研究的深入，天然染色技术在纺织、化妆品等领域得到了广泛关注。天然染料具有无毒、环保、色彩丰富等特点，相较于化学染料具有更高的安全性和可持续性。本实验旨在探索天然染料的染色效果，创新实验方法，为天然染料的应用提供新的思路。

二、实验目的

1. 探索天然染料的染色效果；

2. 创新实验方法，提高染色效率；

3. 分析天然染料的染色原理，为实际应用提供理论依据。

三、实验材料

1. 天然染料：紫甘蓝汁、胡萝卜汁、红曲、靛蓝等；

2. 染色剂：无水乙醇、氢氧化钠、硫酸铜等；

3. 染色对象：棉、麻、丝等天然纤维；

4. 实验仪器：染浴锅、电子天平、温度计、pH计等。

四、实验方法

1. 天然染料提取：将紫甘蓝、胡萝卜、红曲等天然植物原料进行粉碎，加入适量的水，煮沸后过滤，得到天然染液。

2. 染料筛选：将天然染液进行pH值、浓度、温度等条件的优化，筛选出最佳的染色条件。

3. 染色实验：将天然纤维放入染浴中，按照最佳染色条件进行染色。

4. 染色效果评价：观察染色后的纤维颜色、均匀性、耐洗性等指标，评价染色效果。

5. 染色原理分析：通过分析天然染料的化学成分和染色过程，探讨染色原理。

五、实验结果与分析 1. 染色效果：本实验成功地将天然染料应用于纤维染色，得到的染色效果良好。紫甘蓝汁染色的纤维呈蓝色，胡萝卜汁染色的纤维呈橙色，红曲染色的纤维呈红色，靛蓝染色的纤维呈蓝色。

2. 染色原理：天然染料中含有多种有机化合物，如类黄酮、类胡萝卜素、多酚等。这些化合物在碱性条件下与纤维发生化学反应，使纤维着色。具体反应机理如下：

（1）类黄酮类化合物在碱性条件下，与纤维中的蛋白质、纤维素等发生络合反应，使纤维着色。

（2）类胡萝卜素在碱性条件下，与纤维中的蛋白质、纤维素等发生缩合反应，使纤维着色。

（3）多酚类化合物在碱性条件下，与纤维中的蛋白质、纤维素等发生氧化还原反应，使纤维着色。

免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及其对策

免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及其对策

第 1 页 共 10 页 免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及其对策

良好的免疫组化染色切片是正确推断染色结果的基础和前提。由于免疫组化染色过程中存在许多步骤或环节，每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果，因此，要做好一张高质量的免疫组化切片并不是一件特别简单的事。需要病理技术员和病理医生亲密协作、相互协调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和"杂音'染色片（有阳性信号）。

一、无色片

染色结束后，切片中见不到任何阳性信号。这是常规工作中比较常见的现象，消失这种现象，有两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有消失问题，组织或细胞的确不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可分为两种状况：（1）切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。消失这种状况，要麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了，要麽是技术员选错了蜡块。获得正确的切片进行染色是获得正确结果的前提。由此表明：制作出合格的免疫组化切片不仅仅是技术员的事，病理医生也起着不行缺少的作用。（2）染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如，组织未进行抗原修复，有的组织必需经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石 第 2 页 共 10 页 蜡包埋组织的抗体；或一抗失效，虽然抗体失效在理论上是一个渐渐的过，但间或也遇到突然失效的状况，抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的缘由。也可见于染色过程中漏掉了某一环节，如遗忘加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少了三抗，或配制DAB时少了过氧化氢。为了避开这种简洁的错误，有一种简洁的方法：在三抗孵育结束时，将切片上的三抗甩在一张白纸上，在将配制好的DAB滴一滴在白纸的三抗上，观看是否消失棕色。假如消失了，证明三抗和DAB的配制过程没有错误。假如这种DAB再滴到切片上没有消失任何阳性信号，问题肯定是出在三抗以前。假如纸上不消失棕色反应，问题确定在三抗或DAB的配制过程。这种简洁方法能快速的关心我们查找消失问题可能的缘由。

合成纤维最佳染色工艺的探讨

合成纤维最佳染色工艺的探讨

毕 业 论 文

(“卓越计划”学生用)

题 目： 合成纤维最佳染色工艺的探讨

学 院： 化 学 化 工 学 院

学生姓名： 李官博 学 号： 201206029120

专 业： 轻化工程 班级： 1291

学习企业: 东莞超盈纺织有限公司

企业指导教师： 杨 明

学校指导教师： 陈 镇

完成日期： 2016年5月10日

诚 信 声 明

本人声明：

1、本人所呈交的毕业设计（论文）是在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果；

2、据查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，毕业设计（论文）中不包含其他人已经公开发表过的科研成果，也不包括获得其他教育机构的学位而使用过的材料；

3、我承诺，本人提交的毕业设计（论文）中的所有内容均真实、可信。

作者签名：

日期： 年 月 日

毕业设计（论文）任务书

设计（论文）题目： 合成纤维最佳染色工艺的探讨

姓名 李官博 院部 化学化工 专业 轻化工程 班级 1291 学号 201206029120

学习企业名称 东莞超盈纺织有限公司 企业指导教师姓名 杨 明

学校指导教师 陈 镇 教研室主任 潘 璞

全自动染色机标准

全自动染色机标准

全自动染色机标准

全自动染色机是一种用于农学领域的工艺试验仪器，主要功能是实现对植物组织等生物样品的各种自动染色、封片处理。

全自动染色机标准包括以下几个方面：

1. 工作条件：环境温度为15°C～30°C，相对湿度应小于80%，电源为交流220 V±10%，50Hz±2 Hz。

2. 试剂分配准确度和重复性：在载玻片位置，试剂分配的准确度误差应不超过±10%，试剂连续分配10次的变异系数（CV）应不超过5%。

3. 携带污染：试剂吸样携带污染应小于10-6。

4. 主要功能：一次试验可运行四个不同的实验项目，最多可运行20片载片，有16个试剂放置位置；可为不同的实验项目设定不同的实验步骤；具有样本稀释、加样、洗板、孵育、加试剂等功能；加试剂前能自动吸掉载片上前一步加的缓冲液以避免试剂稀释；实验过程中，出现剂量不足时，有报警提醒功能；具有能根据实际需要，设定载片微孔加液位置的功能；具有扫描二维条形码功能。

5. 安全要求：主机应符合安全要求，并应满足《GB 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求》、《GB 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第9部分：实验室用分析和其他目的自动和半自动设备的特殊要求》和《YY 测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第2-101部分：体外诊断（IVD）医用设备的专用要求》的标准相关条款。

6. 电磁兼容要求：染色仪应满足《GB/T 测量、控制和实验室用电设备电磁兼容性要求第1部分：通用要求》和《GB/T 测量、控制和实验室用电设备电磁兼容性要求第26部分：特殊要求体外诊断（IVD）医疗设备》标准相关条款。

以上内容仅供参考，如需更多信息，建议查阅相关文献或咨询农学专家。