海能仪器：海参中蛋白的测试方法(凯氏定氮法)

蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。

1 原理蛋白质是含氮的有机化合物。

食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。

然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

2试剂所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。

2.1硫酸铜。

2.2硫酸钾。

2.3硫酸。

2.42%硼酸溶液。

2.5混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。

也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。

2.640%氢氧化钠溶液。

2.70.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。

3仪器定氮蒸馏装置：如图所示。

（图略）4操作方法4.1样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。

小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。

取下放冷，小心加20ml水。

放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。

取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。

4.2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。

4.3向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml 水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。

生命科学学院科研训练报告海参种营养成分测定the content of nutrients in the Sea Cucumber专业：食品质量与安全姓名：马风敏学号：201055505211指导老师：许波(副教授)2012年11 月7 日完成地点（实验室）成绩评定[摘要]海参中各营养成分的含量通过国标法可测得。

1海参中的糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的出现吸收峰，通过标准曲线得出海参的浓度，进而得出海参中糖的含量。

海参中糖的含量为6%~31%，具很高的营养价值。

2水分的测定：恒重法测定。

3灰分的测定：乳化液灰分测定方法。

4蛋白质：凯氏定氮法。

关键词：海参糖类蒽酮水分蛋白质凯氏定氮法标准曲线Abstract: T he content of nutrients in the sea cucumber can be measured in GB.1.Sea cucumber in the sugars and Anthrone reaction generating a colored substance absorption peaks in the visible region appears. The concentration of the standard curve of sea cucumber, then come to the sea cucumber in sugar content.2 Determination of moisture constant weight Determination3 Determination of ash the method of determination of ash content of the emulsion4 Protein Kjeldahl methodKeyword：the sea cucumber, sugars, anthracene ketone, moisture,protein, Kjeldahl nitrogen , determination standard curve1前言海参是一种名贵海产品，因补益作用类似人参而得名。

凯氏定氮法测定蛋白质的原理
凯氏定氮法是一种用于测定蛋白质氮量的精确方法，也称为凯氏分解法。

该方法利用
碱性液体对蛋白质发生解胞反应，在分解过程中将蛋白质中的氮以NH3形式放出，从而得
到它的总氮含量。

细菌蛋白质的氮量可通过凯氏定氮法来测定。

定氮的步骤如下：
1.将样品加入微量Kjeldahl试剂盒中，其中包括氢氧化钠，挥发性酸，硫酸钾等药剂。

2.用高温(>450℃)对样品进行热处理和灼烧，碱水反应，将所有有机物分解成无机物，它们表现为CO2，H2O和NH3气体。

3.在接下来的步骤中，NH3由KOH的帮助被处理，其中KOH吸收NH3气体，形成氢氧
化铵溶液。

4.同时添加NaOH，将此溶液示波，分解NH3，测定处理后的溶液中的氢氧化铵的含量，从而求出氮的量。

5.最终能分解出的氮量是蛋白质氮量的两倍，因为氨基酸中，每个氨基酸中都有一个
氮原子。

凯氏定氮法与其他氮测定方法相比，尤其是火焰光谱技术，具有优越的操作便捷性和
准确度，以及可以处理低活性和少量样品的特点。

同时，它也有不足之处，如花费大量时间，成本昂贵，操作流程繁琐和精密。

凯氏定氮仪原理和操作步骤核心提示：凯氏定氮仪原理：蛋白质是含氮的有机化合物。

食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。

然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。

1.有机物中的胺根在强热和CuSO4，浓H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4反应式为2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化剂）2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3溶液中反应式为:（NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO42NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O3.用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量点焊机反应式为：（NH4）2B4O7 H2SO4 5H2O＝（NH4）2SO4 4H3BO3（NH4）2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3 凯氏定氮仪操作步骤：（一）消化1、准备6个凯氏烧瓶，标号。

1、2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。

再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g，浓硫酸2.0mL，30%过氧化氢1.0mL。

4、5、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。

4、5、6号烧瓶中加入蒸馏水1.0mL代替样液，其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。

2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。

先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。

待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。

在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。