烟草黑胫病生物防治研究进展

大学生创新性实验计划学院：农学院专业：农产品质量与安全年级： 12 级学号： 1209010172 学生姓名：代传勇指导教师：尹显慧教授2014年 12月 20日木霉菌防治烟草黑胫病研究摘要：在实验室条件下，采用菌丝生长速率法测定2亿活孢子/g木霉菌WP对烟草黑胫病的抑制作用，设置5个药剂处理浓度分别为0.5g/L、1.0g/L、2.0g/L、4.0g/L、8.0g/L，发现木霉菌浓度为4.0g/L和8.0g/L的处理相对对照CK（清水）组抑制烟草黑胫病生长率达到91.58%和93.42%，并且根据抑制生长率计算为0.6375g/L。

出木霉菌的EC50关键词：木霉菌；烟草黑胫病；抑制生长率；抑制中浓度引言烟草黑胫病(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)俗称“烂腰”、“黑根”，是一种分布广泛、危害严重的毁灭性病害，可危害所有栽培烟草。

黑胫病是烟草生产上的重要土传病害之一,广泛分布于各个烟草种植区。

田间一般发病株率为15%～30%，严重田块可达80%以上。

我国每年因烟草黑胫病造成的经济损失平均达1亿元以上，仅次于烟草病毒病[1-3]，本文是木霉菌对烟草黑胫病的防效试验。

木霉菌是一种真菌它是目前唯一种能抑制真菌生长的真菌性农药[4]，木霉菌是一种广泛存在于土壤、植物根际和叶面的腐生型真菌，对多种植物病原真菌具有拮抗作用[5-7]。

木霉菌因为其的高效低毒低残留作为生物防治因子越来越受到人们的关注。

1材料设备与方法1.1材料供试药剂：2亿活孢子/g木霉菌可湿性粉剂（山东泰诺药业有限公司）；供试菌种：烟草黑胫病菌（由贵大农安实验室提供）。

1.2设备器材灭菌打孔器、接种针、小烧杯、移液枪、培养皿、酒精灯、锥形瓶、超净工作台、恒温培养箱、电子天平、保鲜膜。

1.3 PDA培养基的制备把马铃薯洗净去皮，称取200g切成小块，加去离子水1000ml，煮沸30min后过滤，在滤液中加入10g琼脂，煮沸溶解后加入葡萄糖20g，分装在锥形瓶中，灭菌备用。

植物学通报 2005, 22 (4): 426￣431Chinese Bulletin of Botany①重庆市教委科学技术研究项目（１１８０７）资助。

②通讯作者。

Ａｕｔｈｏｒ　ｆｏｒ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ． Ｅ－ｍａｉｌ：　ｗａｎｎｅｎｇｗ＠ｃｑｉｔ．ｅｄｕ．ｃｎ收稿日期：　２００４－０７－２９ 接受日期：　２００４－０９－２３ 责任编辑：　崔郁英，　于昕实验简报烟草内生细菌防治烟草黑胫病及促生作用研究①１王万能② １全学军 ２肖崇刚１　（重庆工学院生物工程学院 重庆 ４０００５０） ２（西南农业大学植保学院 重庆 ４００７１６）摘要 筛选烟草内生细菌防治烟草黑胫病，　获得了对烟草黑胫病有很好防效的内生细菌１１８、５７和９３等菌株。

在温室控病实验中它们的防效分别可达６９．２３％、６１．５３％和６５．３８％。

１１８菌株对烟草疫霉（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ　ｖａｒ．　ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）菌丝生长有明显的拮抗作用。

１１８菌株具有较广的抗菌谱，　且对烟草有促生效果，　烟草的鲜重增产率为１３．１０％。

关键词 烟草黑胫病，　内生细菌，　生物防治The Disease-controlling and Growth-promoting Effects ofEndophytic Bacteria in Tobacco１ＷＡＮＧ　Ｗａｎ－Ｎｅｎｇ② １ＱＵＡＮ　Ｘｕｅ－Ｊｕｎ　２ＸＩＡＯ　Ｃｈｏｎｇ－Ｇａｎｇ１　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００５０）　２（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４００７１６　）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ ｃａｎ　ｓｔａｂｌｙ　ｄｅｖｅｌｏｐ　ａｎｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｅ．　Ｔｏｂａｃｃｏｂｌａｃｋ　ｓｈａｎｋ　（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ　ｖａｒ．　ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）　ｉｓ　ａ　ｓｅｖｅｒｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｔｏｂａｃｃｏ．　Ｗｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｂｌａｃｋ　ｓｈａｎｋ　ａｎｄ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｓｔｒａｉｎｓ　１１８，　５７　ａｎｄ　９３．　Ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｒｏｌｅｆｆｅｃｔｓ　ｗｅｒｅ　６９．２３％，　６１．５３％　ａｎｄ　６５．３８％ ｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ，　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｓｔｒａｉｎ　１１８　ｃａｎ　ｒｅｓｔｒｉｃｔ　ｔｈｅｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｈｙｐｈａ　ｏｆ　Ｐ．　ｐａｒａｓｉｔｉｃａ　ｖａｒ．　ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ　．　Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，　ｓｔｒａｉｎ　１１８　ｃａｎ　ｒｅｓｔｒａｉｎ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆｓｅｖｅｒａｌ　ｍａｉｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｏｎ　ｐｌａｔｅｓ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｏｂａｃｃｏ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｔｏｂａｃｃｏ　ｂｌａｃｋ　ｓｈａｎｋ，　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ，　Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ烟草黑胫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｐａｒａｓｉｔｉｃａｖａｒ．　ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）是烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｔａｂａｃｕｍ）上主要的毁灭性病害，　从苗期到成株期都可发生。

烟草黑胫病生物拮抗防治探讨摘要：烟草黑胫病作为两大土传病害之一，它的防治一直受到关注。

在日益追求环境保护于经济效益的今天，生物防治作为一种比化学防治更为优秀的防治手段出现。

生防菌的寻找于改进一直是个不停歇的问题，在对病区土壤中的病菌进行适当的筛选后，找到适合的生物防治放线菌，以替代化学防治手段。

关键词：烟草黑胫病；放线菌；拮抗作用1前言烟草作为我国的主要经济作物，已经是不可替代的地位。

在烟草种植过程中，各种烟草上的病害给烟农带了的损失不可计量。

据联合国粮农组织2007年的统计资料，我国烟草的种植面积达135万公顷，产值达人民币305.97亿元。

同年，我国烟草生产上因各种病害导致的损失达60.127亿元，占烟草总产值的20%，对烟草种植和加工行业造成了巨大的损失[8]。

而烟草黑胫病是烟草生产上的两大毁灭性土传病害之一，也是烟草生产上第一大真菌病害。

在进行防治时，所用的方法有以下几种：化学农药防治；生防菌防治；育中防治；抗性培养等。

现在最为普遍的方法就是利用生物防治的方法，如在分子领域主要是利用和寻找抗性基因，如夏侯珍珠等的研究表明HpaGXoo（水稻白叶枯病菌蛋白质激发子）可以通过诱导植物防卫反应提供对烟草疫霉的抗性[2]；罗小英等的研究结果表明，植物源的抗菌肽基因与几丁质酶基因在抗植物真菌病害中具有协同增效作用[1]。

这些研究都为烟草黑胫病的生物防治打下了基础。

据调查，年年连作的烟田黑胫病发病率都在18%以上，而隔年水旱轮作的烟田黑胫病发病率在3%以内，3年轮作的烟田，基本无发病。

地势较高的烟田黑胫病发生率较低，病情较轻；地势低的烟田黑胫病发病率高，病19重；同等品种在同等的管理条件下，用房前屋后菜园地育苗比新地育苗发病早，而且严重，田间管理粗放的黑胫病发生也较重[4]。

2.1生防菌的探究现状生物防治主要是利用有益微生物对病原物的各种不利作用，来减少病原物的数量和削弱其致病性。

有益微生物还能诱导或增强植物杭病性，通过改变植物与病原物的相互关系，抑制病害发生。

湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES )2020 ( 11 )：99-103引用格式：赵辉，王喜英，刘国权，等.烟草黑胫病发生因素及综合防治研究进展[J].湖南农业科学，2020(11): 99-103.D O I：10.16498/j.c n k i.h n n y k x.2020.011.026烟草黑胫病发生因素及综合防治研究进展(1.铜仁学院，赵辉\王喜英\刘国权2,谭智勇1贵州铜仁564300; 2.贵州省烟草公司思南县分公司，贵州铜仁565100)摘要：烟草黑胫病由烟草疫霉菌引起的土传性病害。

目前，烟草黑胫病已在我国广大烟区普遍蔓延，给烟农造成了重大损失，严重制约着烤烟产业的持续健康发展。

从黑胫病发生的机理、症状、发病因素和防治方法进行了分析，重点对化学防治和生物防治进行了论述，提出生物防治（包括植物源杀菌剂和诱导防治）是未来黑胫病防治的重要措施之一。

针对烟草黑胫病的综合性防治，可通过选择适合的抗病品种、建立烤烟轮作或间作制度、建立科学合理的施肥和田间管理措施以及开展化学药剂混合防治，实现烟叶生产的可持续发展。

关键词：烟草；黑胫病；发生规律；综合防治；综述中图分类号：S572 文献标识码： A 文章编号：1006-060X (2020 ) 11-0099-05 Research Progress on Occurrence of Tobacco Black Shank(Ph^^'toph'tkara parasi^tica var.nicotianae)and Its Integrated ControlZHAO Hui1，WANG Xi-ying1，LIU Guo-quan2，TAN Zhi-yong1(1. Tongren College, Tongren 564300, PRC; 2. Sinan County Tobacco Branch Company, Guizhou Provincial Tobacco Company,Sinan 565100, PRC )A bstract：Tobacco black shank is a soil-borne disease caused by Phytophthora parasitica var. nicotianae.Tobacco black shank has been widespread in many tobacco areas in our country, bringing serious loss to farmers, and restricting the sustainable and healthy development of the flue-cured tobacco industry. This article analyzes the mechanism, symptoms, pathogenic factors and prevention methods of tobacco black shank, focusing on chemical control and biological control, and proposes that biological control (botanical fungicides, induced resistance) is one of the important measures for the future prevention of black shank disease. The sustainable development of tobacco production will be ultimately achieved by selecting suitable disease-resistant varieties, establishing a flue-cured tobacco rotation or intercropping system, establishing scientific and reasonable fertilization and field management measures, and carrying out comprehensive chemical control.Key w ords：tobacco; black shank (Phytophthoraparasitica var. nicotianae); occurrence; integrated control; review烟草黑胫病（tobacco black shank)又称为烟草疫病、黑秆疯、黑根和乌头病，于1896年在印度尼西亚 爪哇被发现并命名，随后在全世界范围内迅速蔓延[1]。

【科普惠农植物保护与栽培ZHI WU BAO HU YU ZAI PEI烟草黑胫病是一种由烟草疫霉菌（Phytophthora parasitica var.Nicotianae）[1]引起的典型高温高湿土传性病害，在全国地区一般与烟草青枯病混合发生，常给烟草种植业带来重大经济损失[2]。

目前对烟草黑胫病的防治主要是以化学防治为主，由于长期大量使用化学农药，使病原菌产生抗药性，导致防治效果差和农药残留等问题。

采用以生防菌为基础的生物防治技术可以避免这些弊端，并且具有防效快、无毒害、无残留、对环境友好等特点，符合绿色生态防控、绿色优质烟叶生产的要求。

据报道，迄今为止用于烟草黑胫病的生物防治菌主要有假单胞杆菌（Pseudomonas spp.）、芽孢杆菌（Bacillus spp.）、木霉菌（Trichoderma spp.）、放线菌（actinomyces spp.）等[3-4]。

笔者综述这4种微生物菌对烟草黑胫病防治的研究进展，为防治该病害提供参考依据。

1假单胞杆菌非致病性假单胞杆菌（Pseudomonas spp.）广泛活跃于烟草根际，主要通过嗜铁素对铁的营养竞争、抗生作用、次生代谢产物[5-8]等方式对病原菌起着生防效应，蒋海霞[9]对铜绿假单胞菌（Pseudomo ns aeruginosa）生防菌株抑菌代谢产物的研究中认为，铜绿假单胞菌分泌嗜铁素、吩嗪类等多种代谢产物对疫霉菌等具有良好的拮抗作用。

据报道，荧光假单胞杆菌（Pseudomonasfluorescens）、绿针假单胞菌（Pseudomonaschlororaphis）、铜绿假单胞菌（Pseudomo nsaeruginosa）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）[10]等在生物防治方面发挥着重要作用。

荧光假单胞杆菌（Pseudomonas fluorescens）能产生抗生素物质，抑制烟草黑胫病菌孢子的萌发与生长，进而达到控制烟草黑胫病的目的[11]。

收稿日期：２００８－０３－１９基金项目：湖南中烟工业公司资助“烟草病害防治”（２００７０６）。

作者简介：彭清云（１９７０－），男，湖南常德人，农艺师，从事烟叶生产、养护和营销工作。

通讯作者：易图永，博士，副教授，硕士生导师。

河北农业科学，２００８，１２（６）：２９－３１ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｂｅｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ责任编辑：朱新秀烟草黑胫病（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａｖａｒ．ｎｉｃｏｔｉａｎａｅ）俗称烂腰、黑根，多发和于成株期，少数苗床期发生。

幼苗染病茎基部出现污黑色病斑，茎杆染病，茎基部初呈水渍状黑斑，严重时植株萎蔫死亡，是一种烟草上为害最严重的病害之一，我国华南、华东、华中和西北烟区均有发生。

据调查，湖南省主要烟区一般发病株率５％～２０％，严重的达５０％以上。

我国平均每年因烟草黑胫病造成的经济损失达１亿元以上，仅次于烟草病毒病［１］。

烟草黑胫病自发现以来，引起了世界各烟草产区的关注，对病害症状、病原物生物学特性、病害的发生发展规律、预测预报及防治措施等进行了大量研究，取得了显著成果。

笔者根据现有文献，对防治烟草黑胫病的最新进展作简要综述，为进一步开展烟草黑胫病的研究和综合治理提供参考。

１筛选、推广应用抗烟草黑胫病的新品种种植抗病品种是防治烟草黑胫病最经济有效的根本措施，我国生产上推广种植的ＮＣ８９、ＮＣ８２、Ｇ１４０、Ｇ２８、Ｇ８０、Ｋ３２６、Ｋ３４６、中烟９０等烤烟品种、白肋２１和白肋３７等白肋烟品种以及五峰黄、什邡毛烟等晾晒烟品种，在对烟草黑胫病的控制上起到了较大作用。

研究发现，接种后抗病品种中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和过氧化物酶（ＣＡＴ）活性明显低于感病品种，而抗病品种中丙二醛（ＭＤＡ）含量却明显高于感病品种，为筛选抗病品种提供了生化指标［２］。

杨建卿等［３］对浙江绍兴地区的１５个香料烟品种和品系进行了抗黑胫病菌病鉴定，发现供试的１５个品种和品系中，亲本都高度感病，而杂交后代中的沙姆逊×Ｔｏｙ、ｍｓ沙姆逊×沙姆逊和巴斯马×沙姆逊这３个品系却高度抗病。

烟草黑胫病发病机理及防治方法研究进展作者：陈波杨玉玲赵灿华杨凌宇来源：《农家科技下旬刊》2019年第01期摘要：烟草黑胫病是烟草生产上最具毁灭性的病害之一，广泛分布在各烟草种植区，目前正严重威胁我国的烟草生产，对该病害的化学防治仍然是当今乃至今后一段时期内比较有效的防治手段。

文章概述了烟草黑胫病发病机理、化学防治的历史、现状及存在的问题，重点介绍了目前防治黑胫病存在的问题，以及提出了解决方案，如加强对农药的抗性风险评估、加强新型药剂和混剂的研发与推广应用、科学合理用药等策略，以控制烟草黑胫病的发生和发展。

关键词：烟草黑胫病;抗药性;化学防治;杀菌剂;研究进展烟草黑胫病是1986年在印尼爪哇烟草上发现的一种卵菌病害，是世界烟叶生产上危害最严重的病害之一，国内1950年首次报道于黄淮烟区，目前各个烟区均有不同程度发生。

目前，烟草黑胫病的防治措施主要有选用抗病品种、轮作和药剂防治，而在生产上大面积连年连片单一种植抗病品种极易导致其抗性的丧失。

在烟叶生产向无公害方向发展的趋势下，有必要探讨防治烟草黑胫病的新途径，寻找新的防治方法以克服烟叶农药残留和病菌抗药性的问题。

如何使防治兼具高效、无毒、无残留和成本低等特点是亟待解决的难题。

以下就烟草黑胫病发生原理和防治作一综述。

一、烟草黑胫病病原、发病症状及防治方法1.病原及生理小种烟草黑胫病主要是由鞭毛菌亚门的烟草疫霉菌（Phytophthora parasiticavar.nicotianae （Breda deHaan）Tucker）侵染引起，是一种土传性真菌病害。

目前，已鉴定出4个烟草黑胫病菌的生理小种：1962年，Apple在美国北卡罗来纳州发现了0号和1号小种;1973年，Pringsloo等在南非鉴定出烟草黑胫病菌2号小种;1978年，Mclntyre和Taylor在美国康涅狄克州发现了3号小种。

我国烟草黑胫病菌至少有0号和1号两个生理小种，当前以0号小种为优势小种。

木霉菌（Trichoderma sp.）作为一类重要的生防真菌，广泛存在于自然界中，通常定居在腐烂的木材和其他形式的有机基质中，具有分布广、适应性强、繁殖快等特点［1，2］。

木霉属包括多个菌种，有超过400多个种类［3］。

在农业防治上，常用的有绿木霉（T.virens ）、长枝木霉（T.longibrachiatum ）、绿色木霉（T.viride ）、康宁木霉（T.koningii ）、哈茨木霉（T.har⁃zianum ）、棘孢木霉（T.asperellum ）、深绿木霉（T.atro⁃viride ）、盖姆斯木霉（T.gamsii ）等［3］。

它既可以作为生物防治剂，也可以作为生物促进剂。

木霉可以使用多种复杂的直接和间接生物防治机制［4］来防治多种植物病害，既可以对抗生物胁迫如广谱病原微生物（真菌、细菌、昆虫和线虫）等，也可以对抗非生物胁迫如恶劣的环境条件等。

对病原体的直接影响包括细胞壁降解酶（CWDEs ）的产生、抗生素的合成、对空间和营养物质（主要是碳、氮和铁）的竞争以及与真菌病原体建立直接的寄生关系［4］。

烟草是中国重要的经济作物，但烟叶生产主要依赖化学农药防治土传病害，长期使用化学农药易导致病原菌抗药性增强，同时还会造成环境污染［5］。

因此，需探索出绿色、有效的烟草土传病害防治方法。

与化学农药相比，生物农药具有高效、选择性强、低残留、不易产生抗药性等优点。

在环境保护、绿色发展等理念的支持下，生物农药已成为生物防治领域的研究热点［5］。

本研究从湖北省五峰县烟田土壤中分离获得1株木霉，通过生物学特征分析和分子生物学手段鉴定其种类，并采用对峙试验和活体盆栽试验测定其对烟草黑胫病菌和烟草根腐病菌，即烟草疫霉（Phy⁃tophthora nicotianae ）和尖孢镰刀菌（Fusarium oxyspo⁃rum ）的生防效果，为利用绿色环保的生物农药防治烟草病害提供应用基础。

1材料与方法1.1供试材料及培养基供试木霉菌株WF2分离自湖北省五峰县烟田土壤样品。