隆丁区分

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[品管检验]隆丁蛋白质区分测定法
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发表于 2008-1-2 09:17 | 只看该作者 | 倒序看帖 | 打印
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原理:高分子含氮物质在酸性溶液中,易为单宁所沉淀。

磷钼酸可同时沉淀高、中分子含氮物质。

低分子含氮物则不为上述物质所沉淀。

因此,光侧单宁沉淀样品后所得滤液的含氮量,从总氮减去此值即得高分子氮。

在测磷钼酸沉淀样品后所得滤液的含氮量。

用单宁沉淀样品所得滤液的含氮量减去低分子氮,即为中分子氮。

仪器
(1)总氮测定仪器见大麦总氮测定的仪器。

(2)恒温水浴 20+0.1℃。

试剂
(1)总氮测定用试剂见大麦中总氮测定试剂。

(2)硫酸,比重1.4 100克硫酸加入92克水中。

(3)单宁溶液溶16克单宁于100毫升水中。

(4)钼酸钠溶液溶50克钼酸钠于100毫升水中。

操作
(1)用单宁沉淀
A 加100毫升样品(使其内含约80毫克左右氮)于一200毫升容量瓶中,加水到180—185毫升,加比重1.4硫酸4毫升,摇匀。

B 置容量瓶于20℃水浴中,保温15—20分钟,加10毫升单宁溶液,加水至刻度,摇匀,立即用折叠滤纸过滤,此滤液可重复过滤,直至滤清。

(2)用磷钼酸沉淀
A 加100毫升样品(使其内含约80毫克左右氮)于200毫升容量瓶中,加水到175毫升左右,加10毫升磷钼酸溶液,摇匀。

B 置容量瓶于20℃水浴中,保温15—20分钟,加10毫升比重1.4硫酸,加水至刻度。

摇匀后按上述方式过滤。

(3)取四只消化管,第一个为空白,第二个加入5.00毫升未吸收的麦汁,第三个加入5.00毫升单宁吸收过的麦汁,第四只加入5.00磷目酸吸收过的麦汁,四只管分别加入适量的催化剂、15毫升浓硫酸,同做总氮消化、蒸馏、滴定,分别测氮含量。

计算
三个区分中氮含量分别为:
P(总氮)=14*N*V*20
T(单宁吸收后麦汁中的氮)=14*N*V
M(琳目酸吸收后麦汁中的氮)=14*N*V
A (N,毫克/100毫升)=P-T*200/5*100/100
B (N,毫克/100毫升)=(T-M)*200/5*100/100
C (N,毫克/100毫升)=M*200/5*100/100
三个区分中含氮量在总氮中占的百分比分别为:
A区分=A/P*100%
B区分=B/P*100%
C区分=C/P*100%
式中P—100毫升样品中总氮含量(毫克)
T—用单宁沉淀后50毫升滤液中含氮量(毫克)
M—用磷钼酸沉淀后50毫升滤液中含氮量(毫克)
A—100毫升样品中高分子氮的含量(毫克)
B—100毫升样品中中分子氮的含量(毫克)
C—100毫升样品中低分子氮的含量(毫克)
V—消耗盐酸溶液的体积
N-0.02摩尔/升盐酸标准溶液的摩尔浓度
说明
(1)用单宁沉淀高分子氮对温度的变化非常敏感,最好实验室温度能保持近似20℃。

若用单宁沉淀后不能立即过滤,则在继续操作前,应在20℃放置15分钟。

在低于20℃时,滤液能重新混浊,甚至可以形成沉淀,这沉淀不能用过滤法除去。

在测定滤液的含氮量前应充分摇匀。

(2)硫酸和钼酸钠(NaMoO4.2H2O)作用生成钼酸,然后和试样中存在的磷酸盐作用生成磷钼酸,这样生成的磷钼酸作沉淀剂比市售的磷钼酸还好,因此操作中一般不直接加入磷钼酸,而用硫酸和钼酸钠代替。

结果表示方法
以%表示之,取一位小数。

正常范围值
A区分:25%左右
B区分:15%左右
C区分:60%左右。