大鼠取血方法

动脉采血有一定的难度，采血失败常导致或影响动脉血气分析化验结果的准确性。

临床对患者常选择：股动脉、桡动脉、足背动脉进行动脉采血。

大鼠一般采用腹主动脉采血法，腹主动脉采血法适用于取血量大，不易溶血，不损伤器官，不会出现因操作不当造成的气栓与淤血。

一、其具体操作步骤是：
1. 将大鼠腹腔注射10%水合氯醛以0.03 mL /kg 麻醉；
2. 仰卧固定在大鼠手术台上,背部放置一粗试管以充分暴露腹主动脉,常规消毒后用手术剪刀沿腹正中线剪开腹腔；
3. 准备采血时，先用棉花把肠管推开，将腹主动脉暴露完全（参见下图）；
4. 在腹主动脉分叉处向心端1～3 mm处最佳穿刺点。

术者右手持穿刺针，针尖斜面朝下，入针角度约25°～30°，朝向心端方向刺入，深度以5 mm左右为宜；
5. 针进血管后尽量不要抖动，缓慢抽血。

一般体重200～300 g大鼠可采血液5 mL以上，当然要技术熟练以后~一般测血气，可能需要0.2-0.5ml的血液，具体问问你们单位的检验部门。

目的规范实验人员进行大、小鼠采血的操作程序。

适用范围适用于需要对大、小鼠的采血操作。

职责.1 管理人员负责监督、管理；.2 实验动物中心技术员负责指导、教学；.3 实验人员选择合适的采血方法，并严格遵守本规程。

规程.1 大小鼠常用的采血方法有：眼眶静脉丛采血、剪尾采血、摘眼采血、心脏采血。

.2 眼眶静脉丛采血操作规程（如图）.2.1 采血前可按《大鼠小鼠麻醉标准操作规程》(CCAL-SY-SOP-24)将实验动物浅麻醉，但一般情况下不用。

.2.2 按抓取方法抓取实验动物，左手拇指、食指从背部较紧地握住实验动物的颈部（应防止动物窒息）。

.2.3 取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。

右手持长颈(3-4cm)硬质毛细玻璃管（内径 0.5-1.0mm），将采血管与面部成 45°的夹角，在泪腺区域内，用采血管由眼内角在眼睑和眼球之间向喉头方向刺入。

.2.4 刺入深度小鼠约为 2-3mm，大鼠约为 4-5mm，当达到蝶骨感到有阻力时，再稍后退 0.1-0.5mm，边退边抽。

.2.5 将采血管保持水平位，稍加旋转并后退吸引，由于血压的关系，血液回自动流入玻璃管中。

.2.6 得到所需的血量后，立即除去加于颈部的压力，同时拔出采血管。

为防止术后穿刺孔出血，用消毒纱布压迫眼球 30 秒。

.2.7 20-30g小鼠每次可采血0.2-0.3ml，200-300g大鼠每次可采血0.4-0.6ml 采血部位大约 3-7d 修复）。

.3 小鼠眼眶采血简易方法：用注射器针头代替毛细玻管，插入后挑起或压迫眼球，血液自动流出滴下。

.2 剪尾采血操作规程需血量较少时常用此法。

先将实验动物固定，将鼠尾浸在 45-50℃温水中浸泡数分钟或使用酒精棉球反复擦拭擦鼠尾，使尾部血管充盈，剪去尾尖1-2mm(小鼠)或 5-10mm(大鼠)，血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接使用吸管吸取。

生理学实验动物的取血方法（一）大鼠、小鼠1、尾静脉使鼠尾静脉充分充血后，用剪刀剪去尾尖，尾静脉知即可流出，用手轻轻从尾根部向尾尖部挤几下，可以取到数滴血。

2．眼眶动脉和静脉用左手抓住鼠，拇指和食指尽量将鼠头部皮肤捏紧，使鼠眼球突出。

右手取一无钩弯小镊，在鼠右侧眼球根部将眼球摘去，关将鼠倒置，头向下，此法由于取过程动物未死，心脏不断在跳动，因此取血量比断头法多，一般约可取出4-5%鼠体重的血液量。

1－27 切破鼠尾静脉方法1－28 鼠尾静脉取血方法3．后眼眶静脉丛连续穿刺穿刺部位是在眼球和眼眶后界之间的后眼眶静脉丛。

采用特制的硬玻璃吸管，管长15厘米，前端拉成毛细管。

取血时，用手从背部捉住动物，同时用食指和拇指握住颈部，利用对颈部所加的轻压力，使头部静脉淤血，将消毒的吸管用抗凝剂湿润其内壁，从内侧眼角将吸管转向前，并轻压刺入，深约4-5mm就达到后眼眶静脉丛，血液自然进入吸管内。

在得到所需血量后，除去加于颈部的压力，同时抽出吸管。

1－29 小鼠后眼眶静脉丛取血方法1－30 大鼠后眼眶静脉丛取血方法4．断头用大鼠断头器或粗剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉，实验者立即将鼠颈向下，提起动物，对准准备好的容器，鼠血即可从颈部滴入容器内。

如图1－315．心脏左手固定鼠，在左侧第3-4肋间，用左手食指摸到心搏，右手取注射器选择心搏最强处穿刺。

如图1－321－31 小鼠断头取血方法1－32 小鼠心脏取血方法6． 颈静脉作一般颈外静脉分离手术。

颈静脉暴露楚后，用注射器针头沿静脉平行方向刺入，抽取所需血量，采用此法取血，体重20克的小鼠可取0.6ml左右，体重300克的大鼠可取血8ml左右。

1－33 大鼠颈静脉取血方法（二）家兔和豚鼠1、心脏：将兔仰卧固定在手术台上，把左侧胸部相当于心脏的部位的被毛剪去，用碘伏、酒精消毒皮肤。

实验者用左手触摸左侧第3-4肋间，选择心跳最明显处作穿刺。

一般由胸骨左缘外3mm 处将注射针头插入第三肋间隙。

大小鼠血清采集一、仪器耗材（一）共用低温恒温离心机、-20℃冰箱、4℃冰箱、鼠笼、无害化冰箱、50ml离心管、500ml血清瓶、一次性橡胶手套、移液器（0.1~1ml、1~5ml）及配套吸头、废弃吸头存储盒、75%酒精。

（二）小鼠1.5ml EP管、无盖离心管盒、弯头镊、眼科剪。

（三）大鼠麻醉剂（3%戊巴比妥钠）、5ml无菌注射器、大鼠解剖台、手术剪、利器盒、止血钳、弯头镊、10ml无抗凝剂真空采血管（含一次性采血针）、止血纱布、电子天平（精度0.1~1g即可）。

二、操作方法（一）小鼠血清的采集1、摘除眼球采血（1）使小鼠爬伸在笼盒上，左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部，用眼科剪减去小鼠待摘眼球脸部胡须；（2）中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；（3）用弯头镊夹取眼球；（4）根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入1.5ml EP管中；（5）同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；（6）当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。

2、分离血清（1）将EP管中的血室温静置2小时；（2）再置于4℃冰箱内3~4小时或过夜；（3）待血液凝固血块收缩后，4℃ 3500rpm离心10分钟；（4）使用移液器吸取上清液置于干净的50ml离心管中4℃冰箱暂存，待所有动物血清收集完成后，再次离心转移到500nl血清瓶中，保存于-20℃冰箱。

3、注意事项（1）采血场所有充足的光线，室温夏季保持在25~28℃，冬季保持在15~20℃为宜；（2）防止血液浸入眼部周围毛发，否则会造成污染和溶血；（3）按压心脏时，用力一定要适度，若用力过度，一是会造成动物采血中途死亡，使采血不完全，二是有可能引起溶血现象发生，影响血清质量；（4）采血用的器材和试管必须保持清洁干燥；（5）采血时要防止小鼠挣扎，否则会损失比较多的血液；（6）若一边眼球摘除后眼部发生凝血，无法继续采血时，可将另一侧眼球摘除，用相同的方法继续采血；（7）血液凝固后不宜在4℃放置过久，否则会溶血；（8）移液器吸取上清液时注意不要将血凝块吸取出来。