家兔DIC实验报告

实验 2 急性 DIC实验时间： 5 月 23 日实验目的】1、学习复制急性 DIC 动物模型的方法。

2、了解实验室诊断 DIC 的常用方法及其意义。

3、结合实验和血液学指标测定结果，联系理论知识加深理解实验对象】药品和试剂】1%普鲁卡因、 %枸椽酸钠液、 2%兔脑粉浸出液（临用时配制）、饱和氯化钠液、生理盐 水、 1%鱼精蛋白液。

实验器材】兔台、哺乳动物手术器械一套（包括手术刀、普通剪刀、眼科剪刀、止血钳）、电热恒 温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、刻度离心管（10ml ）、试管（13X 75mm 、15 X 100mm ）、刻度吸管（2ml 、5ml ）、试管架、微量定量移液器（10卩、1 50卩、1 500卩）1、 橡皮吸球、乳胶滴管、玻片、棉球、纱布、颈动脉插管（硅胶管）2 根、动脉夹，注射器。

实验方法】1、将家兔仰位固定兔台、 颈部剪毛、 皮下 1%普鲁卡因局部浸润麻醉，作正中纵切口 （约3~4cm 左右），常规暴露一侧颈总动脉，结扎其远心端，近心端用动脉夹夹闭；在结扎线下 方剪口插入硅胶管并固定，松夹放血7ml 至盛有 %枸椽酸钠液 2ml 的 10ml 刻度离心管中，立即混匀离心（ 3000rpm ， 5分钟），分离血浆，备作纤维蛋白原定量与 3P 试验。

再松动动 脉夹放血 2~3 滴于洁净玻片上，作凝血时间测定。

2、复制Die 模型：用10ml 注射器吸取2%兔脑粉浸液，按3ml/kg 的量缓慢（以每分钟 2ml 的速度为宜）注入家兔耳缘静脉内，同时观察其反应，如出现呼吸急促、躁动不安，即 停止注射，速行第二次采血（方法同 1），如未出现反应可注射毕后采血。

重复上述各项指 标测定。

4、整理并分析实验结果。

附 录】Die 的病因及发生机制。

家兔 1 只，雌（未孕）雄均可。

体重 kg 。

1、凝血时间测定（玻片法）：放血 2~3滴于洁净玻片上，同时按动秒表，用清洁废针2、纤维蛋白原含量测定（饱和盐水法）：取 15 X 100mm 试管一支，置样本血浆，加入饱和氯化钠溶液，立即混匀，于37C 水浴中孵育3分钟取出，再混匀后以 721分光光度计，520nm 滤光板比浊，读取光密度值；以生理盐水替代饱和氯化钠液作同样操作后为空 白对照管调零，测出光密度，按下式计算；正常注射后正常注射后N 测 D 测1 / / / / /// / 2 1'32 6'8 - -3721903 0'22 1 '2-+410186 40'550 '0/1 '0+++496224/232OD 520nm Fbg(mg/dl) OD 520nm Fbg(mg/dl)组别CT(mi n)3P test头挑拨血滴, 见有明显血丝出现，迅即停表，记录时间。

测定管光密度值10000.5纤维蛋白原（mg/dl ）3、3P 试验：取13 X 75mm 试管一支, 水浴中15分钟后取出，于黑色背景下观察, 性。

置血浆，加入1%鱼精蛋白液，轻轻摇匀，于37 C 如见絮状沉淀或胶冻状即为阳性，清澈则为阴【实验结果】【讨论】1、家兔实验性 DIC 的致病原因:兔脑脊液属于组织因子，大量的兔脑脊液静脉注射后，激活家兔的外源性凝血系统，启动凝血过程，依次激活凝血因子 FIX,FVIII,FX 等和凝血酶，从而使血小板聚集， 使纤维蛋白原变成纤维蛋白，促进凝血。

此外，凝血酶反馈性激活 FIX,FX,FXI,FXI 等，扩大凝血反应。

此为高凝期，微循环易形成广泛的微血栓。

大量凝血酶的激活和微血栓的形成， 大量消耗了血液中的凝血因子和血小板， 可能继发 性激活纤溶系统，造成凝血系统和纤溶系统不平衡， 血液处于消耗性低凝期， 有明显出血症 状。

DIC 时产生的大量凝血酶和 FXIIa 等激活纤溶系统，产生大量纤溶酶，导致纤溶亢进，形成大量纤维蛋白降解产物，抗凝作用明显，为继发性纤溶亢进，此时出血十分显著。

（厉彬杰）2、CT 测定的原理：新鲜血液离体后，因子被异物表面（玻璃）激活，启动了内源性凝 血。

由于血液中含有内源性凝血所需的全部凝血因子、血小板及钙离子，血液则发生凝固。

血液凝固所需时间即为凝血时间（clotti ng rime , CT ）。

3、由实验结果分析,发生DIC 后，凝血时间变长。

机制：凝血物质被消耗而减少：在 耗，使得血液中纤维蛋白原、凝血酶原、 生障碍。

纤溶系统激活：血液中 F 刘激活的同时，激肽系统也被激活，产生缓激肽酶，使纤溶酶 原变成纤溶酶，激活纤溶系统。

纤溶酶除了可使纤维蛋白降解外，还可水解凝血因子，如：FV 、F 忸、凝血酶、F 刘等，使凝血功能发生障碍，使得凝血时间变长。

纤维蛋白（原）降解产物形成：在凝血过程中，凝血酶使纤溶蛋白原转变为纤维蛋白单 体，最终形成交联的纤维蛋白多聚体。

纤溶系统激活后，纤溶酶分解纤维蛋白原， 裂解出纤维肽A 和纤维肽B ,余下片段为X 片段，继续被分解为 D 片段和丫片段，丫片段可继续分解 为D 和E 片段。

如果纤维蛋白原先经凝血酶作用为纤维蛋白，纤溶酶再分解纤维蛋白，则 可使其分解为 X ' Y ' D ' E 及各种二聚体、多聚体等片段。

纤溶酶水解纤维蛋白（原）片 段，统称为纤维蛋白（原）降解产物（ FDP ）。

这些片段有明显的抗凝作用，如： 片段可妨碍纤维蛋白单体聚集，Y 、E 片段有抗凝血酶作用。

此外，多数碎片可与血小板膜1 '0 2'0 +++240 204 0'24/46284DIC 发生、发展过程中，大量血小板和凝血因子被消 FV 、F 忸、FX 及血小板明显减少，使凝血过程发X 、丫、D结合，降低血小板的黏附、聚集、释放等功能。

发生Die 后，有些组3P 实验呈强阳性，有些阳性不强或阴性。

机制：3P 试验即血浆鱼精蛋白副凝试验，其原理是：鱼精蛋白可与FDP 结合，将其加入患者血浆后，血浆中原与 FDP 结合的纤维蛋白单体与 FDP 分离后彼此聚合，形成不溶的 纤维蛋白多聚体。

在 Die 继发性纤溶亢进期，由于纤溶系统激活，产生大量纤溶酶。

纤溶酶 大量降解纤维蛋白多聚体，产生大量 FDP 。

FDP 与sFM 在血浆中可形成可溶性复合物，不会降解。

加入鱼精蛋白后，可溶性复合物解离，游离出的 FM 便会相互聚合形成不溶性的肉眼可见的颗粒状、絮状或胶冻状沉淀，因此可观察到阳性反应。

出现阴性结果的原因：由于 Die 激活外源性凝血通路，导致大量纤维蛋白原形成纤维蛋白单体及多聚体，因此 3P 实验应该可见沉淀，呈阳性。

至U 实际上未能观察到阳性反应， 可能为采血时家兔已处于Die 中晚期，sFM 也在纤溶酶的作用下降解成求较大分子量的FDP 或sFM ,因此未能形成沉淀。

发生Die 后，纤维蛋白原含量减少。

机制: 在凝血过程中， 凝血酶使纤溶蛋白原转变为纤维蛋白单体， 蛋白多聚体。

纤溶系统激活后，纤溶酶分解纤维蛋白原，裂解出纤维肽 片段为X 片段，继续被分解为D 片段和丫片段，丫片段可继续分解为蛋白原先经凝血酶作用为纤维蛋白，纤溶酶再分解纤维蛋白，则可使其分解为E'及各种二聚体、多聚体等片段。

纤溶酶水解纤维蛋白（原）片段，统称为纤维蛋白（原） 降解产物（FDP 。

这些片段有明显的抗凝作用，如：X 、Y 、D 片段可妨碍纤维蛋白单体聚集， 丫、 E 片段有抗凝血酶作用。

此外，多数碎片可与血小板膜结合，降低血小板的黏附、 聚集、释放等功能。

Die 晚期，纤溶系统激活后，纤溶酶分解纤维蛋白原，产生纤维蛋白降 解产物，因此，纤维蛋白原含量减少。

4、弥散性血管内凝血（Die ）的分期及治疗:高凝期：又称弥漫性微血栓形成期。

病初，机体的凝血活性增高， 以微血栓形成为主要 特点， 加之血小板的粘附性增高，各脏器微循环可有严重程度不同的微血栓形成。

期治疗应在于抑制广泛性微血栓形成， 防止血小板及各种凝血因子进一步消耗， 凝为主。

消耗性低凝期： 该期主要特点为大量凝血因子的持续消耗和血小板的减少， 溶功能增强。

因此会出现严重程度不等的出血症状， 也可能有休克或某脏器功能障碍的临床 表现。

该期微血栓形成仍在进行，抗凝治疗仍然非常重要，但因凝血因子的进行性消耗，故 应补充血小板和凝血因子。

继发性纤溶亢进期： 该期微血栓形成已基本停止， 主要特点为继发性纤溶亢进。

大多有 严重程度不同的临床出血症状，严重病人有休克及多器官功能障碍综合症（MODS ）的临床FDP,而3p 实验要最终形成交联的纤维A 和纤维肽B ,余下 D和 E 片段。

如果纤维X '、Y '、 D '、因此，该 即治疗以抗且继发性纤症状。

若临床确认纤溶亢进是出血首要原因， 则可适量应用抗纤溶药物，同时，由于凝血因 子和血小板消耗，也应积极补充。

5、DIC 的治疗 :Die 早期（弥漫性微血栓形成期）以微血栓形成为主，此期治疗目的在于抑制广泛性微 血栓形成，防止血小板及各种凝血因子进一步消耗，因此治疗以抗凝为主。

Die 中期（消耗性低凝期）此期微血栓形成仍在进行，抗凝治疗仍然必不可少，但因凝 血因子进行性消耗， 临床中引发出血情况， 故在充分抗凝基础上， 应进行补充血小板和凝血 因子的替代治疗。

Die 晚期（继发性纤溶亢进期）此期微血栓形成已基本停止，继发性纤溶亢进为主要矛 盾。

若临床确认纤溶亢进是出血首要原因，则可适量应用抗纤溶药物， 同时，由于凝血因子和血小板消耗，也应积极补充。

6、实验中出现失误，动脉夹松掉大量出血，导致兔子提前死亡。

实验中出现这种情况时，应立即找到出血原因，如本实验中应重新夹好动脉夹，使实验得以继续进行7、广泛的微血栓形成使回心血量明显减少，加上广泛出血造成的血容量减少等因素， 使心输出量减少 , 加重微循环障碍而引起休克。

Die 形成过程中产生多种血管活性物质（激肽、补体C3a 和C5a ）造成微血管平滑肌舒张，通透性增高，回心血量减少。

预防和去除引起 Die 的病因是防治 Die 的根本措施。

采用扩充血容量、解除血管痉挛 等措施及早疏通阻塞的微循环。

在高凝期可应用抗凝药物如肝素、 低分子右旋糖酐、 阿斯 匹林等阻止凝血过程的发动与进行， 预防新血栓的形成。

出血倾向十分严重的病人， 可输血 或补充血小板等凝血物质以及使用纤溶抑制剂。

8、注意事项采血时不得将动脉夹移开，以免放血后不能及时 夹闭动脉造成放血过量和失血。

采集抗凝血需掌握好血液 :抗凝剂之比例 （1:9） 并充分混匀 （颠倒混匀 ）。

注射兔脑浸液前，要做好第二次采血的一切准备工作，如换好新的动脉插管 管内可能已有血栓阻塞 ），或向导管内注入生理盐水。