实验方案方法有关氮
- 格式：docx
- 大小：112.33 KB
- 文档页数：8
实验方案和方法一、校准线绘制求解各处理吸光度的校准值，以校准值为横坐标，对应各处理的氮素含量为纵坐标（ug ），绘制校准线，校准线模拟是相似系数.01~*99.902=R 说明校准线模拟较为准确。
校准线模拟成功后，吸光度和氮素含量的函数即为氮素测定求解的模型。
1、硝态氮N NO --3校准线绘制（标准3KNO 贮备液mL ug /100）实验步骤：①将标准贮备液稀释10倍，即得mL ug /10标准使用液；②选取25L m 比色管进行实验测定；③向比色管中加入0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mL 标准使用液，每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到25mL ；⑤向每只比色管滴加0.05mL 氨基磺酸，摇匀；⑥再向各比色管滴加0.5mL HCl ，盖紧比色管塞子摇匀；⑦在双波长nm .0220、nm .0275下进行比色；⑧实验结果：.0275.02202A A A -=校2、总氮TN 校准线绘制（标准3KNO 贮备液mL ug /100）实验步骤：①将标准贮备液稀释10倍，即得mL ug /10标准使用液；②选取25L m 比色管进行实验测定；③向比色管中加入0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mL 标准使用液，每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到10mL ；⑤向每只比色管滴加5mL 碱性过硫酸钾溶液，摇匀，绑紧，在121.2℃下消煮半小时，拿出自然冷却；⑥再向各比色管滴加1mL 1+9盐酸溶液，摇匀，定容至25mL ，盖紧比色管塞子摇匀；⑦在双波长nm .0220、nm .0275下进行比色；⑧实验结果：.0275.02202A A A -=校3、铵态氮N NH -+4校准线绘制（标准Cl NH 4贮备液mL ug /1000） 实验步骤：①将标准贮备液稀释100倍，即得mL ug /10标准使用液；②选取50L m 比色管进行实验测定；③向比色管中加入0.00、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0mL 标准使用液，每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到50mL ；⑤向每只比色管滴加3mL 酒石酸钾钠溶液，摇匀；⑥再向各比色管滴加2mL NaOH 溶液，盖紧比色管塞子摇匀；⑦再向各比色管滴加1.5mL 钠氏试剂，盖紧比色管塞子摇匀10分钟显色后在单波长nm .0420下进行比色；⑧实验结果：实验空白校A A A r -=.0420二、实验测定（一）排水水样氮素测定总氮测定时，直接加未预处理的水样，若有沉淀，实验时，取上清液进行比色；硝态氮和铵态氮需对水样先进行絮凝、过滤预处理，提取上清液作为实验水样。
絮凝处理：排水水样300L m ，加4L m 10%硫酸锌溶液，摇匀后，滴加1L m 25%氢氧化钠溶液，或水样250L m ，加3L m 10%硫酸锌溶液，摇匀后，滴加0.8L m 25%氢氧化钠溶液，摇匀沉淀，絮凝后水样PH=10.5左右。
进行硝态氮比色时，要求PH=7.0，故絮凝、过滤后需调节pH ，实验经验为250mL 水样絮凝后加2mL1mol/L 的HCl 摇匀即可。
标准方法：100L m 样品中加入1L m 硫酸锌溶液和0.1~0.2L m 氢氧化钠溶液，调节PH 至10.5左右，摇匀，放置沉淀，中速滤纸过滤上清液，弃去初滤液20L m ，过滤液即为实验水样。
移液枪使用时，保持竖直不能水平横放，提取溶液时，摁至第一档，缓慢松开提取试剂或溶液；滴加试剂或溶液时，先摁至第一档，缓停2至3秒后再摁至第二档。
用完后复位即调节到最高量程。
定容时，先快后缓，可以加快定容速度，比色管成30°左右倾角，以免产生气泡。
如果定容时超纯水/蒸馏水需要量比较大，可以直接倾倒至刻度线下1至2厘米处时改为滴定。
试剂滴加完后尽快盖塞子密封，尽可能减少氨挥发或外界氨影响。
所有器皿、工具和仪器使用完以后必须归回原位。
1、总氮TN 测定实验步骤：①排水水样冷藏，不进行预处理；②选取25L m 洁净比色管进行实验测定；③用5L m 移液枪向比色管中加入3mL （浓度低时可取5、10mL ）水样，每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到10mL ；⑤向每只比色管滴加5mL 碱性过硫酸钾溶液，摇匀，绑紧，在121.2℃下消煮半小时，拿出自然冷却；⑥再向各比色管滴加1mL 1+9盐酸溶液，摇匀，定容至25mL ，盖紧比色管塞子摇匀；⑦在双波长nm .0220、nm .0275下进行比色；⑧实验结果：.0275.02202A A A -=校；实验空白校校A A A r -=2、铵态氮N NH -+4测定实验步骤：①排水水样冷藏，取出预处理；②选取50L m 比色管进行实验测定；③用10L m 移液管向比色管中加入10mL 水样（一般取样10L m ，浓度偏高时取1、2或5mL ），每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白； ④将各比色管定容到50mL ；⑤向每只比色管滴加3mL 酒石酸钾钠溶液，摇匀；⑥再向各比色管滴加2mL NaOH 溶液，盖紧比色管塞子摇匀；⑦再向各比色管滴加1.5mL 钠氏试剂，盖紧比色管塞子摇匀10分钟显色后在单波长nm .0420下进行比色；⑧实验结果：实验空白校A A A r -=.04203、硝态氮N NO --3测定实验步骤：①排水水样冷藏，取出预处理；②选取25L m 比色管进行实验测定；③直接向比色管中加入25.0mL (浓度高时，可取5、10mL)水样，每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到25mL （准确定量）；⑤向每只比色管滴加0.05mL 氨基磺酸，摇匀；⑥再向各比色管滴加0.5mL HCl ，盖紧比色管塞子摇匀；⑦在双波长nm .0220、nm .0275下进行比色；⑧实验结果：.0275.02202A A A -=校；实验空白校校A A A r -=（二）氨挥发氮素测定实验步骤：①实验田各处理取样，用500mL 试剂瓶收集，保持密闭以防氨挥发和外界氨造成实验影响，取样后试剂瓶中加300mL1mol/L 的KCl 溶液，振荡机振荡一小时（实验时根据具体情况适当调整振荡频率，一般振荡半小时），振荡后将提取液冷藏，备用；②选取50L m 比色管进行实验测定；③用10L m 移液管向比色管中加入10mL 氨挥发提取液（一般取样10L m ，浓度偏高时可取2、5L m ），每个处理设置3个平行实验，增加一组实验空白；④将各比色管定容到50mL ；⑤向每只比色管滴加3mL 酒石酸钾钠溶液，摇匀；⑥再向各比色管滴加2mL NaOH 溶液，盖紧比色管塞子摇匀；⑦再向各比色管滴加1.5mL 钠氏试剂，盖紧比色管塞子摇匀10分钟显色后在单波长nm .0420下进行比色；⑧实验结果：实验空白校A A A r -=.0420三、氮素测定中试剂配制1、碱性过硫酸钾溶液称取40克过硫酸钾，另取15克氢氧化钠，溶于无氨超纯水或蒸馏水，稀释至1000mL ，溶液存放在聚乙烯塑料瓶或棕色试剂瓶中。
2、1+9HCl 溶液将1mol/L 的盐酸以体积比为1:9溶于超纯水或蒸馏水中即得。
3、酒石酸钾钠溶液称取50或125克酒石酸钾钠溶于100或250mL 超纯水或蒸馏水中，加热煮沸除去氨，冷却定容至100或250mL 即可。
冷却过程中要用保鲜膜密封，以免外界氨再次融入溶液造成影响。
蒸馏时间一般以蒸馏掉100mL 水为依据。
4、25%氢氧化钠溶液称取25或62.5克氢氧化钠，加超纯水或蒸馏水至100或250克重所得的溶液，必要是也采用125克氢氧化钠配制500克溶液来配制。
5、钠氏试剂称取40克氢氧化钠，溶于125mL （实验中为150mL ）水中冷却至室温备用；另称取17.5克碘化钾和25克碘化汞溶于水中，然后将氢氧化钠备用溶液缓缓加入到此溶液中，不断搅拌均匀，用水稀释至250mL,正常情况下，颜色为青苹果颜色，贮存在聚乙烯塑料瓶中，密塞低温保存，静置一夜即可取上清液实验。
6、10%硫酸锌溶液称取10克硫酸锌容至100克溶液即可。
7、0.8%氨基磺酸溶液称取0.8克氨基磺酸，溶于超纯水中，稀释到100克时的溶液即为所需。
8、磷酸甘油50mL 磷酸，加40mL 丙三醇，加超纯水混匀滴定到1000mL 即可。
9、硝酸盐标准贮备液：标准3KNO 贮备液mL ug /100将0.7218克硝酸钾经105~110℃干燥2h 的硝酸钾溶于水中，移至1000mL 容量瓶定容混匀即可。
10、标准氨态氮溶液：标准Cl NH 4贮备液mL ug /1000。
称取3.819±0.004氯化铵，溶于水，移至1000mL 容量瓶定容，摇匀转移到试剂瓶即可。
四、实验需要的仪器和材料（一）氨挥发装置海绵直径16cm ，厚2cm ，PVC 直径15cm,高20cm(15cm)，一次2*5=10块，实验方案设计3个重复，一次（3*4+1）*2=26块。
配套的盖子。
两海绵间距1cm ，入土5cm 。
（二）土壤溶液收集器1、聚乙烯塑料瓶250mL(实际安装100mL,取样（25硝态氮+3总氮+10铵氮)mL*3个平行=114mL,需取样150~200mL)。
收集和取样，至少2*（3*4+1）=26个，收集瓶需要盐酸泡洗；2、软管接头5cm*3*13=195cm ，需200cm ；3、取土壤溶液导管（瓶高度深10cm+取样深度20/40/60cm+最高15cm 水层），故至少取相关导管长度⎪⎭⎪⎬⎫⎪⎩⎪⎨⎧⨯⨯⨯层根、层根、层根、cm cm cm b m cm 60--13100c cm 40--1380c 20--1360a 额外加一份排气导管，以便收集土壤溶液时将瓶中空气排出，实现结果表明，可以不用抽真空；4、取土壤溶液导管止水夹13×3=399个（8元一盒夹子）；5、为了防止收集瓶有污泥渗入，堵塞取液导管，在各取液导管收集瓶低端包扎防堵塞棉球3×13=39个。
6、收集瓶瓶口过滤网（一层纱布和一层2cm 海绵6cm ×6cm ×13×3，39块）。
7、尼龙扎带：大号4×12=48根；小号2×3个收集器×12组=72根，共需120根。
现场购买100根/一包、14元。
绑扎过滤网和固定土壤溶液收集瓶；8、为了施工方便，同时安装和搬运方便，需将土壤溶液收集瓶和取样导管固定在1m 杆上（实际现场采用竹竿）13根；9、标签13*3*2=78张，导管标签（20、40、60cm 处的取水样、排气标签）。
