芝田硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

１ ２ ２ Ｐ Ｒ 反 应 ． ． Ｃ
转 化至 大肠 杆 菌 中诱 导表达后 将 目的蛋 白利用 液相
电喷雾 串联质谱 的方法 分 析 ， 次确 定 了表 达 产 首
物 结构 的正确性 。
１ 实验 部 分
１ １ 材 料 ．
利用 重叠 延 伸 Ｐ Ｒ法 ， 应 程序 为 ９ Ｃ 反 ４℃ 变
ｂ 。将 得 到 的片 断 克 隆 于 载 体 ｐ Ｅ Ｔ 中 并 测 序 ， 连 接 至 表 达 载 体 ｐ Ｔ２ ｂ ｐ Ｇ Ｍ— 再 Ｅ － （＋） ， 组 质 粒 转 入 大 肠 杆 菌 ２ 中 重 Ｒ ｓ ｔ 。转 化 的重 组 大 肠 杆 菌 用 终 浓 度 １ ｍｏ Ｌ的 ＩＴ ｏｅａ中 ｔ ｍ ｌ ／ Ｐ Ｇ诱 导 外 源 基 因表 达 ， 用 Ｔｉ ｎ—Ｄ —Ａ Ｅ系统 ， 析 采 ｒ ｉｅＳ ＳＰ Ｇ ｃ 分 目标 蛋 白主要 以包 涵体 形 式 存 在 ， 质 量 分 数 可 达 ４ ．％ 。利 用 液 相 电 喷 雾 串 联 质 谱 方 式 （ ＣＥ Ｉ Ｓ ＭＳ 鉴 定 其 ８８ Ｌ —Ｓ— ／ ） Ｍ
Ｖｏ ． ７．Ｎｏ ３ １３ ． ２ ０ ０ｌ
豹 蛙 酶 的 基 因 克 隆 及 其 在 大 肠 杆 菌 中 的 表 达
张来颖 陈劲春
（ 京 化 工 大 学 生命 科 学 与技 术 学 院 ， 京 １０ ２ ） 北 北 ０ ０ ９
摘
要 ： 据豹蛙酶的氨基酸序列 ， 根 采用 大肠 杆 菌 偏 爱 密 码 子设 计 引 物 ， 叠 延 伸 Ｐ Ｒ法 合 成 出 目的基 因 ， ３０ 重 Ｃ 约 ５
Ⅲ期 临床研究 阶段 Ｉ ， 有 广 阔 的 市场 前 景 。然 ３ 具 ］
而从 北极 豹蛙 细胞 中提 取 已有太 多 不 足 ， 相关 基 因

基 金 项 目： 家 “ 六三 计 划 ” 国科 生 字 ［Ｇ ７ １２号） 国 八 （ １ ９ ］９ 作者 茼 介 ： 华 渡 （９ ５ ）男 ， 西 钦 ｜ ＾ ． 苏 １７ 一 ， 广 州 广西 大学 硕 士 生
Ｓｇ ｉｍａ公 司 ．
（ ）Ｐ Ｒ 一步 扩增 ６ ２ Ｃ ＨＡＭ． 据该基 因 的已知序 列 设 计 引物 ， 中 ， 根 其 上游 引 物 中包 含 了 蚜 的 Ａ
３ ｐ及 与 ｂ ｌ 配 对 的 １ ｐ片 段 ， 物 中 还 引 人 了 Ｅ ｏ ６ｂ ｇＭ ５ｂ 引 ｃＲ ｉ和 为 模 板 ，Ｃ 扩 增 口一 聚 糖 酶 杂 合 基 因 ｂ ｆ ＰＲ 葡 ｇＨＡＭ ．
２００ ２
文 章 编 号 ； ０ ｌ ７ ４ （ ０ ２ ０ — ０ ０ ０ ｌａ ４ ５ ２ ５ ） １０ １—４
一
葡 聚 糖酶 杂合 基 因 ｂ ｌ ｇ ＨＡＭ 的克 隆 及在 ｐ ｓ ｒｓ中的表 达 Ｐ． ａｔ ｉ ｏ
苏华 波 ，韦 宇拓 ，黄 鲲 ，赵 颖 怡 ，黄 日波
（ 西大学 生物技术实验中心 ， 西 南宁 ５００） 广 广 ３０ ５
维普资讯
第 太学学 报 （ 自然 科 学 版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＧｕ ｎ ｘ ｉｅ ｓｔ （ ｔＳ ｉＥｄ ｏ ｒ ａ ａ ｇ ｉ ｏ Ｕｎ ｖ ｒｉｙ Ｎａ ｃ ）
Ｖ ｏ【 ２ Ｎｏ ７ １ Ｍ ａ ｒ
１ 材料 和 方 法
（ ）材 料． １ 浸麻 芽 孢杆 菌 （ ａｉ ｕ ｃｒｎ ） 株 １ ６ ， 自中科 院微 生物 所 菌种 保 藏 中心． Ｂ ｃ ｓｍａｅａ ｓ 菌 ￣ ．４购 巴斯 德 毕赤 酵母 菌株 ＧＳ ｌ ， ｌ ５ ＫＭ７ １及表 达 载体 ｐ Ｉ Ｋ 购 自ｌ ｖｔ ｇ ｎ公司． Ｐ Ｃ９ ｎ ｉｏ ｅ ｒ 大肠 杆菌 菌株 Ｄ ｎ由本实 Ｈ５ 验 室保 存． 聚核 苷酵 由 Ｓ ｎ ｏ 寡 ａ ｇ ｎ生 物公司 合成． 核酸工 具酶 购 自大连 Ｔａ ａａ 地 衣多糖 （ ｃ ｅ ａ ） 自 ｋ ｒ． １ｈｎ ｎ 购 ｉ

大肠杆菌SecY蛋白转位通道的糖转运研究及其应用摘要：糖是生物体内的重要营养物质，在细胞内的转运过程中需要利用膜蛋白转运通道完成。

本研究利用基因工程技术构建大肠杆菌SecY蛋白的突变体，分析其对糖转运的影响。

结果表明，SecY蛋白的突变会引起糖转运的受阻，阻碍了细胞内的代谢过程。

同时，本研究还发现了一种SecY蛋白转位通道的激活剂，可以促进糖的转运和细胞代谢过程的进行。

该发现为疾病治疗和生物产业的发展提供了新的思路和方法。

关键词：大肠杆菌；SecY蛋白；突变体；糖转运；细胞代谢1. 引言糖是生物体内的重要营养物质，在细胞内需要利用膜蛋白转运通道完成转运过程。

SecY蛋白是一种重要的膜蛋白，在生物体内起着重要的质膜蛋白转运通道的作用。

研究SecY蛋白的突变体对糖转运的影响，有助于深入了解此蛋白的功能和转运机制，同时也可以为疾病治疗和生物产业的发展提供新的思路和方法。

2. 实验设计和方法本实验采用基因工程技术，构建大肠杆菌SecY蛋白的突变体。

利用各项生化和细胞学实验方法，分析SecY蛋白突变对糖转运的影响。

同时，本研究还使用高通量筛选技术，筛选出一种SecY蛋白转位通道的激活剂，评估其对糖转运和细胞代谢的影响。

3. 结果经过实验分析，我们发现SecY蛋白的突变确实会引起糖转运的受阻，阻碍了细胞内的代谢过程。

此外，我们还发现了一种SecY蛋白转位通道的激活剂，可以促进糖的转运和细胞代谢过程的进行。

这些发现为疾病治疗和生物产业的发展提供了新的思路和方法。

4. 讨论本研究的发现表明，SecY蛋白在细胞内起着重要的质膜蛋白转运通道的作用。

研究SecY蛋白的突变体对糖转运的影响，可以深入了解此蛋白的功能和转运机制，为疾病治疗和生物产业的发展提供新的思路和方法。

此外，我们发现的一种SecY蛋白转位通道的激活剂，可以促进糖的转运和细胞代谢过程的进行，展示了SecY蛋白转运机制在生物产业中的应用前景。

5. 结论本研究结果表明，SecY蛋白转位通道在糖转运过程中发挥了重要作用，其突变体对糖的转运产生了影响。

将其 克 降到表 达载 体上 ， 在大肠 杆 菌 中成 功表 达 ｒ重组 蛋 白， 研 究 了部 分纯 化 的 纤维 素 酶 的理 化 性质 ， 并 以
期 为深人 了解纤 维 素酶 住松萎 蔫病 中 的作用提 供理 论基 础 。
ｌ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 松 材 线 虫 ． ．
Ｅ ｃｌ ＤＨＳ ．ｏｉ ａ和 Ｅ ｃ ｌ Ｂ １ ＤＥ ） 自美 同 Ｎ ｖ ｇ ｎ公 司 ， 粒 ｐ Ｔ １ ｂ—ｃｔ 由本 实 验 室 构 建 并 ． ｏｉ １ （ ３ 购 ２ ｏ ａｅ 质 Ｅ ５ ｒＢ
保存 。
１ １ ３ 主 要 试 剂 ． ．
收 稿 ６卷 第 １期 ２０１ １年 ３月
青岛大学学报 （ 程技 术版 ） 工 Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＱＩ ＮＧＤＡＯ ＵＮＩ ＲＳ Ｔ （ ＶＥ Ｉ Ｙ Ｅ＆Ｔ）
Ｖｏ ＿ ６ ＮＯ １ Ｉ２ ．
Ｍ ａ ．２０ １ ｒ １
文 章 编 号 ： ０ ６ ９ ９ （ ０ １ ０ —０ ５ １ ０ ７ ８ ２ １ ） １ ０ ９—０ ７
现松 材线虫 分泌 的纤 维素 酶与拟 松材 线虫 的酶谱 存 在 着差异 ， 而且 松材 线 虫分 泌 的纤 维 素 酶还 具 有 分解 结
品 纤 维 素 的 能 力 。蒋 丽 雅 等 也 曾 对 松 材 线 虫 虫 体 提 取 液 和 分 泌 液 中 的 纤 维 素 酶 进 行 了 定 性 分 析 ， 果 表 结
６ Ｏ
青 岛大学学报 （ 程技术版 ） 工
基 金 项 目 ：同家 自然 科 学 基 金 资 助 项 目（ ｌ ７ ６ ； ３ Ｏ ４ ５ ） 山东 省 自然 科 学 基 金 资 助项 目（ ０ ０ Ｒ ０ ０ ７ ２ ２ １Ｚ Ｅ １３ ） 作 者 简 介 ：任 慧 杰 （ ８ ） 女 ， 东泰 安 人 ， 士 研 究 生 ， 究 方 向 为植 物 病 原 微 生 物 的 检 测 与控 制 。 １ ６ ， 山 ９ 硕 研 通 讯 作 者 ： 荣 贵 ， 授 ， 导 Ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ ｉ ＠ｙ ｈ ｏ ｃ ｒ 李 教 博 ｍａｌ ｏ ｇ ｕｌ ａ ｏ ． ｏｎ ： ｉ