In vivo neutralization assays by monoclonal antibodies against white spot syndrome virus in cra
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Ａｃｔａ Ｏｃｅａｎｏｌｏ￣ｅａ Ｓｉｎｉｃａ ２Ｏ０８，Ｖｏ１．２７，Ｎｏ．２，Ｐ．１２６～１３２ ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｃｅａｎｐｒｅｓｓ．ｃｏｎ．ｃｎ Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｙｘｂｅ＠２６３．ｎｅｔ
Ｉｎ ｖｉｖｏ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｂｙ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｗｈｉｔｅ ｓｐｏｔ
ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｃｒａｙｆｉｓｈ（Ｃａｍｂａｒｕｓ ｐｒｏｃｌａｒｋｉｉ）
ＷＡＮＧ Ｙｉｎａｎ ，ＺＨＡＮ Ｗｅｎｂｉｎ ，ＸＩＮＧ Ｊｉｎｇ ，ＪＩＡＮＧ Ｙｏｕｓｈｅｎｇ
１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｑｕａｔｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｒｉｅｕｈｕｒｅ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉ— ｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄｎｏ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ５ Ｊｕｎｅ ２００７；ａｃｃｅｐｔｅｄ １９ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００７
Ａｂｓ！［ｒａｃｔ
Ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｅｉｇｈｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＭＡｂｓ）ａｇａｉｎｓｔ ｗｈｉｔｅ ｓｐｏｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ（ＷＳＳＶ）（２Ｄ２，２Ｂ２，１ Ｄ２， １Ｄ５，１Ｃ２，４Ａ１，６Ａ４ ａｎｄ ６Ｂ４）ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｇｉｌｌｓ ｆｒｏｍ ＷＳＳＶ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｓｈｒｉｍｐ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｄ ａｎｄ ｔｅｎ—ｆｏｌｄ ｓｅｒｉａｌｌｙ ｄｉｌｕｔｅｄ ｂｙ ＰＢＳ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＡｂｓ（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ＷＳＳＶ ａｎｄ ＭＡｂｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｃｒａｙｆｉｓｈ（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓ ｃｌａｒｋｉｉ）．Ａｆｔｅｒ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ，ｔｈｅ ｄｅａｔｈ ｒａｔｅｓ ｏｆ ｅｒａｙｆｉｓｈ ｗｅｒｅ ｃｏｕｎｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ＭＡｂｓ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｕｐｅｍａｔａｎｔ ａｎｄ ＷＳＳＶ ｏｒ ＰＢＳ ｗａｓ ｓｅｒｖｅｄ ａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｒ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ，ａｔ ｅａｃｈ ｖｉｒｕｓ ｄｉｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｍｅａｎ ｔｉｍｅ ｔｏ ｄｅａｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒａｙｆｉｓｈ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭＡｂ—ｔｒｅａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｎｇｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ，ｔｈｏｕｇｈ ｔｈｅｙ ａｌｌ ｓｈｏｗｅｄ １００％ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗｉｔｈｉｎ ２５ ｄ，ａｎｄ ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｆｅｗ ｃｒａｙｆｉｓｈ ｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏ１．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ＭＡｂｓ，２Ｄ２，２Ｂ２，１ Ｄ２ ａｎｄ １ Ｄ５，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｆｏｒｍｅｒ ｔｗｏ，ｄｅｌａｙｅｄ ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ａｎｄ １ Ｃ２，４Ａ１ ａｎｄ ６Ａ４ ｄｅｌａｙｅｄ ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｓ ｗｅｌｌ ｂｕｔ ｎｏｔ ｓｏ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ，ｗｈｉｌｅ ＭＡｂ ６Ｂ４ ｗａｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｎｌｙ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉ—ＷＳＳＶ ＭＡｂｓ ｃａｎ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ ＷＳＳＶ ｉｎ ｄｉｆｌｆｅｒｅｎｔ ｖｉｒｕｓ ｄｉ】ｕｔｉｏｎｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｒａｙｆｉｓｈ，ＷＳＳＶ，ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｉｎ ｖｉｖｏ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ
１ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ
Ｗｈｉｔｅ ｓｐｏｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｖｉｒｕｓ（ＷＳＳＶ），ｅｍｅｒｇｉｎｇ
ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅａｒｌｙ １９９０ｓ，ｈａｓ ｑｕｉｃｋｌｙ ｓｐｒｅａｄ ｔｏ ｔｈｅ ｓｈｒｉｍｐ ｆａｒｍｉｎｇ ａｒｅａｓ ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ ａｎｄ ｂｅ—
ｃａｍｅ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｐｅｎａｅｉｄ
ｓｈｒｉｍｐ（Ｗｕ ｅｔ ａ１．，２００５；Ｃｏｒｂｅｌ ｅｔ ａ１．，２００１；
Ｌｊｇｈｔｎｅｒ ｅｔ ａ１．，１９９８）．Ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ａ ｗｉｄｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｈｏｓｔｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｓｈｒｉｍｐ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ
ａｑｕａｔｉｃ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｃｒａｂｓ ａｎｄ ｃｒａｙｉｉｓｈ，ａｎｄ ｈａｓ ｃａｕｓｅｄ ｌａｒｇｅ ｅｃｏｎｏｍｉｃ ｌｏｓｓｅｓ（Ｒａｊｅｎｄｒａｎ ｅｔ ａ１．，
１９９９；Ｗａｎｇ ｅｔ ａ１．，１９９８）．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ
ｓｔｕｄｉｅｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｔ－ ｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｇｅｎｏｍｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＷＳＳＶ，ｗｈｉｃｈ ｃｌａｓ－
ｓｉｆｔｅｄ ＷＳＳＶ ａｓ ａ ｓｏｌｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｖｉｒｕｓ
ｇｒｏｕｐ（ｆａｍｉｌｙ Ｎｉｍａｖｉｒｉｄａｅ；ｇｅｎｕｓ 却 ）
（Ｖｌａｋ ｅｔ ａ１．，２００５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａ１．，２００２）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｉｔｅｍ：Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ｕｎｄｅｒ ｃｏｎｔｒａｃｔ Ｎｏ．２００６ＣＢ１０１８０６ ａｎｄ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ“８６３”Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａ ｕｎｄｅｒ ｅｏｒ１． ｔｒａｃｔ Ｎｏ．２００６ＡＡｌ０ｏ３ ｌ２． Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔ
ｈｏｒ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｂｚｈａｎ＠ＯＵＣ．ｅｄｕ．ｅｎ 维普资讯 http://www.cqvip.com ＷＡＮＧ Ｙｉｎａｎ ｅｔ ａ１．Ａｃｔａ Ｏｃｅａｎｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ２００８，Ｖｏ１．２７，Ｎｏ．２，Ｐ．１２６～１３２
ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｈｒｉｍｐ ａｎｄ ｔｈｅ
ｓｐｒｅａｄ ｏｆ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｒｕｓｔａｃｅａｎ ｂｏｄｙ ａｒｅ ｎｏｔ
ｋｎｏｗｎ ｙｅｔ ｔｈｏｕｇｈ ｔｈｅ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｓ— ｓｕｍｅｄ ｔｏ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（ＩＪｉ ｅｔ ａ１．，
２００６：ｖａｎ Ｈｕｈｅｎ ｅｔ ａ１．，２００１）． Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ａｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｒｏｕ—
ｔｉｎｅｌｙ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｖｉｒａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｖｉ—
ｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ，ｗｈｉｃｈ ｍｉｇｈｔ ｌｅａｄ ｔｏ ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ
ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ（Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ
２０００；Ｓｃｈｏｆｉｅｌｄ ｅｔ ａ１．，２０００）．Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎ ｔｉｂｏｄｉｅｓ ｒａｉｓｅｄ ｉｎ ｒａｂｂｉｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ
ＷＳＳＶ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｌａｒｇｅｌｙ ｕｓｅｄ ｉｎ
ＷＳＳＶ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ，ａｎｄ ｓｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅｍ
ｓｈｏｗｅｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａ１．，２００５：Ｗｕ ｅｔ ａ１．，２００５；ｖａｎ Ｈｕｈｅｎ ｅｔ ａ１．，
２００１）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ａ ｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｎ０ｒｍａｌ ｒａｂｂｉｔ ｓｅｒｕｍ ｃｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ ＷＳＳＶ，ｓｏ
ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｓｈｏｗｅｄ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｓｈｏｕｌｄ
ｂｅ ｊｕｄｇｅｄ ｃａｒｅｆｕｌｌｙ（Ｒｏｂａｌｉｎｏ ｅｔ ａ１． ２００６）．Ｏｎ ｔｈｅ ０ｔｈｅｒ ｈａｎｄ．ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
（ＭＡｂｓ）ａｇａｉｎｓｔ ＷＳＳＶ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｍａｉｎｌｙ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ
ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｓ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｆｅｗ ｒｅｐｏｒｔｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ＭＡｂｓ（Ｌｉｕ ｅｔ ａ１．，
２００２：Ｐｏｕｌｏｓ ｅｔ ａ１．，２００１）． Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ，ｖａｒｉｏｕｓ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｗｅｒｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｖｉｒｕｓｅｓ．Ｆｏｒ ｍａｎｙ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ
ｖｉｒｕｓｅｓ，ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ
ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ．Ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｓｈｒｉｍｐ ｖｉｒｕｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｉｎ
ｖｉｔｒｏ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗａｓ ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ａ
ｃｏｎｔｉｎＨＯＨＳ ｓｈｒｉｍｐ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ，ａｎｄ ｔｈａｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ａ ｃｒｉｔ— ｉｃａｌ ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ
（Ｗａｎｇ ｅｔ ａ１．，２０００；Ｔｏｎｇ ａｎｄ Ｍｉａｏ，１９９６；Ｌｕｅｄｅ—
ｍａｎ ａｎｄ Ｌｉｇｈｔｎｅｒ，１９９２）． Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｗｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ＷＳＳＶ ｂｙ ＭＡｂｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ
