隐匿性乙型肝炎病毒感染调查与分析

黑龙江省隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究目的:检查合格献血员中隐匿性乙肝病毒感染情况,探讨减少输血传播乙肝病毒的检测方法。

方法:随机抽取2005年2月～2007年8月黑龙江省医院收取血站合格全血标本560例,应用生化仪复检肝功能、酶联免疫方法复检HBV M,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测血浆HBV DNA载量,应用χ2检验方法统计分析。

结果:560例HBsAg阴性献血员血浆HBV DNA阳性率为11.07%,HBV DNA含量(9.72±8.95)×103 copy/ml,HBV DNA检出率与性别、年龄无关,抗-HBc 抗体阳性人群中HBV DNA检出现率较高,占17%,抗-HBs阳性或乙型肝炎病毒标志物全阴性也可检出HBV DNA。

结论:HBsAg阴性献血员中存在隐匿性乙肝病毒感染,现行的输血筛查存在HBV漏检,为隐匿性乙肝病毒感染的原因。

应重视隐匿性乙肝病毒感染引起的HBV的输血传播,应在现有的血液筛查中增加HBV 核酸检测及HBV M检测。

标签：隐匿性;HBV感染;荧光定量PCR;献血员隐匿性乙肝病毒感染是指血清HBsAg阴性,而应用聚合酶链反应(PCR)技术检测血清和(或)肝组织中HBV DNA阳性[1-3]。

隐匿性乙肝病毒感染作为乙肝病毒感染的一种特殊类型,是临床和流行病学的一大难题。

隐匿性乙肝病毒感染可经输血、器官移植、血液透析等方式传播,并可引起典型的乙肝表现[4-5]。

在印度,隐匿性乙肝已成为输血相关性乙肝感染的主要原因。

隐匿性乙型肝炎病毒感染影响供血源的筛选质量,从而使HBV传染源的管理更加困难,并与肝硬化、肝癌的发生相关[6-7],因此其临床意义重大。

本课题对筛检合格的献血员进行隐匿性乙肝病毒感染的检查,探讨如何进一步降低输血传播乙肝病毒的发生率。

1 材料与方法1.1 研究对象随机抽取2005年2月～2007年8月我院收到血站配送全血标本560例,其中男324例,女236例,年龄22～49岁,平均35.5岁。

２ ． ２ 隐匿性 ＨＢ Ｖ感 染 的诊断 ： ＨＢ Ｖ Ｄ Ａ Ｎ（＋） 是 ＨＢ Ｖ感染 及
复制的重要要依 据 。肝 细胞 内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ａ Ｎ有 三种存 在形 式 ， 即 复制型 、 整合 型、 游离型。只有游离 型才能经肝 细胞释放人血 ， 在血清 中检测 到 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ， 在 一定 程度上 反映肝 细胞 内 ＨＢ ￣
上海新华公 司。③ Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ定量 检测 ： 荧 光定量 Ｐ Ｃ Ｒ检 测采 用德 国 Ｒ ｏ ｃ ｈ ｅ公 司生 产 的 Ｌ ｉ ｇ ｈ ｔ Ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ｒ ４ ８ ０全 自动荧 光 定 量 Ｐ Ｃ Ｒ仪 ， 试剂 盒 购 自深 圳 匹基 公 司。Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ检 测 的下 限为
复制 的活跃程度 ， 临床上常 以此作为抗病 毒指征及判 断疗 效 的 依据 ， 但 血清 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ａ Ｎ水 平不 能完全 反映 肝细 胞 内 Ｈ Ｂ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 复制水平 。隐匿性 Ｈ Ｂ Ｖ感染 是 Ｈ Ｂ Ｖ感染 的特 殊形式 ， 由于
ＨＢ ｓ Ａ ｇ 缺失， 不能 以常 规方法诊 断 ， 其 检测依赖 于高灵敏 度 的 Ｐ Ｃ Ｒ方法 。另外需鉴别有无免疫应答 ， 有免疫应答则 有相应抗
老年人 比例较高 ， 这可能与老年人感染 Ｈ Ｂ Ｖ时间较长 ， 血液 中 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ 水平随感 染时间延 长而下 降或老 年人免 疫水平 较低 有 关 。⑨检测试剂的灵 敏度 和特 异性所致 。
１ ． ２ ． １ 辅助检查 ： ①ＨＢ Ｖ血清标志物检测 ： 采用 时间分辨 免疫 荧光分析法 。检 测仪 器 Ａ ｎ ｙ Ｔ ｅ ｓ ｔ ２ ０ ０ ０， 试 剂盒 均购 自上 海新 波 生物技术有 限公 司。② 甲、 丙、 戊 型肝 炎病毒 血清学 标志 物检 测系酶联免疫 吸附法 ， 采用雷勃 ＭＫ ３酶标 分析仪 ， 试剂盒 购 自

.166-微F物与感染Journal of Microbes and Inf e ctons#June25,2020,15(3)：166-171http：".cddoi:10.3969/j.issn.1673-6184.2020.03.005•论著•献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的血清学特征分析吕莹13,伍晓菲2,毛日成1,贾尧2,张继明1,王迅21.复旦大学附属华山医院感染科,上海200040；2.上海市血液中心，上海200051；3.上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心中医科,上海201508摘要：旨在研究献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)的血清学特征。

收集上海市血液中心2013-2018年经核酸检测合格血液样本523例，不合格样本395例，分别采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantify polymerase chain reaction,FQ-PCR)和转录介导的扩增(transcriptionmediated amplification,TMA)技术对阳性样本进行HBV DNA鉴定;化学发光法对所有样本HBV表面抗体(抗-HBs)进行定量检测，对HBV e抗原(HBeAg)、HBVe抗体(抗-HBe)和HBV核心抗体(抗-HBc)进行定性检测。

结果发现197例HBsAg阴性样本的HBV DNA呈阳性，为OBI。

其抗-HBc阳性率为85.79%,抗-HBs阳性、抗-HBc阳性及抗-HBc单独阳性为OBI的主要血清学模式。

核酸检测阴性的合格献血者组以乙型肝炎两对半阴性及抗-HBs阳性为主。

OBI组抗-HBs水平分布以＜100mIU/mL水平为主，明显低于合格献血者组。

合格献血者组〉1000mIU/mL的比例高于OBI组。

以上结果表明上海地区献血人群中OBI者血清学分布特征与合格献血者组之间存在差异，为进一步研究OBI提供了数据参考*关键词：乙型肝炎；乙型肝炎病毒+隐匿性乙型肝炎病毒感染;核酸检测；乙型肝炎血清学标志物;合格献血者中图分类号：R446.62；R512.6+2文献标识码：AAnalysis of HBV serological characteristics in occult HBV infection among blood donorsLU Ying13,WU Xiaofei2,MAO Richeng,JIA Yao2,ZHANG Jiming,WANG Xun2V.Department of Infectious Diseases,Huashan Hospital,Fudan University,Shanghai200040,China；X.Shanghai Blood Center,Shanghai200051,China； 3.Department of Traditional Chinese Medicine,Shanghai Public Health Center,Fudan University,Shanghai201508,ChinaAbstract：ThepurposeofthisstudyistoanalysethehepatitisBvirus(HBV)serologicalcharacteristicsin occulthepatitisBvirusinfection(OBI)amongblooddonors.Weco l ected395nucleicacidtestpositive bloodsamplesfrom2013to2018inShanghaiBloodCenter#whichwerewithnormalALTandwithHBsAg#anti-HCVandHIVantigen-antibodynegative#andsubiectedthemforHBV DNAidentificationwithPCRor transcription-mediated amplification(TMA)e s ays.HBV serological markers were tested by chemiluminescentmethodina l ofthesamples.Wefoundthatamong395nucleicacidtestpositivesamples#197were positive for HBV DNA identification#which were considered to be OBI.Most of the OBI samples werepositiveforanti-HBc(85.79%).Themainserologicalpa t ernsinOBIwereanti-HBspositiveandanti-HBc positive or anti-HBc positive alone.The main serological pa t erns in the qualified blood donors were通信作者:张继明Correspondence to：ZHANG Jiming E-mail:jmzhang@吕莹，等：献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的血清学特征分析・167・seronegative and anti-HBs positive.The level of anti-HBs in OBI group was mainly below100mIU/mL andlower than that in the qualified blood donors(Z二-0.198,P<0.05).It indicated that the HBV serologicalmarkersin mosIofIheoccul HBV infecIed people in Shanghai area are differenIfrom Ihequalifiedblooddonors.Keywords:Hepatitis B；Hepatitis B virus；Occult hepatitis serological markers；Qualfied blood donors我国是乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）的高流行区，乙型肝炎病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen,HBsAg）携带率约为5%〜6%,慢性HBV感染者约7000万1*由于HBV可以经输血传播2,2015年，我国基本实现了核酸检测在血液筛查中的全覆盖，对献血者实施严格的HBsAg和HBV DNA筛查，经输血或血液制品传播HBV的事件已经较少发生3*在对献血人群进行核酸检测的过程中，发现了血清HBsAg阴性，但血清和（或）肝组织中HBV DNA阳性的隐匿性乙型肝炎病毒感染（occult hepatitisB virus infection,OBI）者36*由于全世界各地区HBV DNA检测手段、病毒流行及人群特征等的差异，目前仍无法得到OBI准确的流行病学及临床特征资料*本研究通过对选取的HBsAg阴性且HBV DNA阳性及HBsAg阴性且核酸检测阴性的样本进行研究,分析上海地区献血者OBI的HBV血清学特征，并与合格献血者的HBV血清学特征进行比较,从而为OBI的进一步研究提供数据参考*1材料与方法1.1研究对象取上海市血液中心2013年1月一2018年12月经核酸检测阳性样本395例，阴性样本523例*所有样本均经2次酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoMorbent a M ay，ELISA）检HBsAg、丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）抗体（抗-HCV）、人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）抗原-抗体结果为阴性,速率法检测丙氨酸氨基转移酶均合格*1.2试剂与仪器1.2.1试剂HBV-HCV-HIV（1+2型）核酸检测试剂〔cobas@TaqScreen MPX Test,荧光定量聚合酶链反应（fluorescence quantify polymerase chain reaction,FQ-PCR）〕购自Roche公司，HBV-B infection；Nucleic acid testing；HBVHCV-HIV（1型）核酸检测试剂〔Procleix Ultrio Plus Assay,转录介导的扩增（transcription-mediated amplification,TMA）技术+化学发光法〕购自GRIFOLS公司（原NOVARTIS公司）,HBV 表面抗体（抗-HBs）、HBV e抗原（hepatitis B e antigen,HBeAg）、HBV e抗体（抗-HBe）,HBV核心抗体（hepatitis B core antibody,抗-HBc）测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法）购自Abbott 公*1.2.2仪器所用仪器为Cobass201全自动核酸分析系统（Roche公司）、Tigris全自动核酸分析系统（GRIFOLS公司）和雅培I2000全自动免疫分析仪（Abbott公司）*1.31.3.1HBVDNA检测395例核酸阳性样本使用Roche或GRIFOLS鉴定检测试剂，分别采用FQ-PCR或TMA进行HBV DNA鉴定试验*1.3.2血清学检测所有样本使用化学发光法检-HBs、HBeAg、-HBe、-HBc*1.4统计学方法采用SPSS25.0统计学软件进行数据分析。

Ｈ Ｂ Ｖ的生命周期 有关 ， 其 产生 的共价 环状 Ｄ Ｎ Ａ持续存
在并与宿主细胞 Ｄ Ｎ Ａ整合 ， 并作 为模 板参 与基 因转 录 ，
这可 能导致 了 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ 表 达 的改 变 以及 Ｏ Ｂ Ｉ 患 者Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ
西 学 ２ ０ １ ５年 １ １月 第 ３ ７卷 第 １ １期
ｌ ６ ４ ５
隐 匿 性 乙型 肝 炎 病 毒 感 染 发 生 机 制 的 研 究 进 展 及 临床 意义 ▲
庞 婧 邓 志华 （ 山西 医科大 学第 二 附属 医 院消化 内科 ， 太ａ ｉ ｌ ： Ｐ Ｊ ３ １ ９ ７ ＠１ ６ ３ ． ｅ ｏ ｍ）
性的传染病 ， 据统计全球约有 ３ ． ５亿 乙型肝 炎患者 ， 而我 国属于乙型肝炎病毒 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｉ ｔ ｉ ｓ Ｂ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｈ Ｂ Ｖ） 感染的高发
区。随 着 聚 合 酶 链 式 反 应 （ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，
蛋 白均受 到影 响 ， 但 调控元 件均 未被 影 响。同 时发现 ，
终 止密码 子在 Ｏ Ｂ Ｉ 患者 Ｈ Ｂ Ｖ基 因组 ｓ区 中罕有 ， 这可 能是 Ｏ Ｂ Ｉ 患者血清 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ 阴性的原 因。此外 ， Ｏ Ｂ Ｉ 患者
Ｐ Ｃ Ｒ ） 以及免疫组织化学等分子生物学技术的不断发展及 广泛应用 ， 发现部分 Ｈ Ｂ Ｖ携带者血 清 中并未检测 到乙肝
阴性 、 血 清Ｈ Ｂ Ｖ — Ｄ Ｎ Ａ低 水平 或者肝 脏 组 织 ＨＢ ｓ Ａｇ的 隐 匿性 。本文 就 Ｏ Ｂ Ｉ 发 生机 制 的研 究进展及 临床 意 义作一 综述 。