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短柄草的幼胚转化

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配制培养基过程中，在加入无机盐，有机物，糖类和凝胶后，调pH至固定值，
再121℃,20min灭菌后温度降至50℃左右时，再加入已过滤灭菌的激素，充分
摇匀后倒入培养皿。
1、幼胚胚性愈伤诱导和继代培养基
LS（无机盐，有机物）＋30g/L麦芽糖＋2.5mg/L 2,4-D＋2g/L凝胶，pH调至
5.8。
MSB3(无机盐，有机物)＋30g/L蔗糖＋0.6mg/L CuSO4＋2.5mg/L 2,4-D＋
2g/L 凝胶，pH调至5.8。
2、农杆菌培养用固体培养基
MGL＋30mg/L AS＋50mg/L壮观霉素＋10g/L琼脂粉，pH调至7.2。

3、侵染与共培养用培养基
pH均为5.5,其中MSB和MSB3参照Alves等（2009）发表的文献所配制。
表2.1侵染与共培养用培养基
Table 2.1 Medium for infection and co-culture
名 称
Name 培养基成分
Components 用途
Purpose
1/2MS 1/2MS（无机盐）＋15g/L蔗糖 侵染与共培养
MSB(Alves et al. 2009) MS（无机盐）＋10g/L蔗糖＋10g/L甘露醇
＋45mg/L AS 侵染
MSB3(Alves et al. 2009) MS（无机盐）＋30g/L蔗糖＋60mg/L AS 共培养
4、分化培养基
LS（无机盐，有机物）＋30g/L麦芽糖＋0.6mg/L CuSO4＋0.2mg/L KT＋
225mg/L Timentin＋2g/L凝胶
5、筛选培养基
LS（无机盐，有机物）＋30g/L麦芽糖＋0.6mg/L CuSO4＋0.2mg/L KT＋
0.16mg/LG418＋225mg/L Timentin＋2g/L凝胶
6、生根培养基
1/2MS（无机盐，有机物）＋15g/L蔗糖＋0.5mg/L NAA＋225mg/L Timentin＋
2g/L凝胶

（一）外植体的取材和消毒
取开花后14天幼穗，手工去除外稃，在超净台中将其放入已灭菌的塑料小罐中，用70％乙
醇进行消毒5min，用无菌水清洗3-4次，再用2.5％的次氯酸钠浸泡8min，无菌水冲洗5-6
次。

（二）胚性愈伤的产生
在超净台中，在解剖镜下剥取幼胚，盾片朝上置于诱导培养基上。培养器皿为直径9cm，高
2cm的一次性培养皿。每皿均匀的摆放25个幼胚，将培养皿密封后置于人工气候箱（Model
515, A Plus Co, Texas, USA）中，25℃恒温暗培养4周。在此期间，如有幼胚愈伤长出幼芽，
在超净台中使用手术剪将幼芽剪去，仍放置25℃恒温暗培养。4周后，将胚性愈伤移至新的
诱导培养基中进行继代，一周后侵染用。
（三）农杆菌的培养和重悬
将本实验用的农杆菌菌株在配好的MGL固体培养基（不添加AS）上划板，两天后长出单
菌落，将培养皿放置4℃恒温冰箱中保存。胚性愈伤继代5天后，挑取单菌落划板，划板用
培养基为MGL固体培养基（添加AS）。尽可能将此菌落的细菌划至新的培养基上，以便有
更多的菌用于重悬。2天后刮取培养皿中的农杆菌至已灭菌50ml离心管中，离心管中加有
30ml重悬液体培养基(如表2.1所示)，将菌液摇匀，调OD600=1，移至28℃摇床45min，即
可用于侵染。
（四）侵染与共培养
将继代7天的愈伤移至新的空培养皿中，用手术刀将其切碎成2-3mm的小块移至50ml装有
农杆菌菌液的离心管中，轻轻摇晃，置于25℃恒温条件下侵染10min，期间隔3-4min摇晃
一次。取出愈伤，并将其置于已灭菌的滤纸上，干燥10min左右。吸取2-3ml共培养液体培
养基至已灭菌的放有2层滤纸的培养皿中，并将农杆菌侵染的愈伤平铺于滤纸上，保证每个
愈伤都能接触到液体培养基。再将培养皿置于25℃恒温条件下暗培养2天。
（五）植株再生
将继代7天的愈伤移至新的空培养皿中，用手术刀将其切碎成2-3mm的小块移至50ml装有
农杆菌菌液的离心管中，轻轻摇晃，置于25℃恒温条件下侵染10min，期间隔3-4min摇晃
一次。取出愈伤，并将其置于已灭菌的滤纸上，干燥10min左右。吸取2-3ml共培养液体培
养基至已灭菌的放有2层滤纸的培养皿中，并将农杆菌侵染的愈伤平铺于滤纸上，保证每个
愈伤都能接触到液体培养基。再将培养皿置于25℃恒温条件下暗培养2天。

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农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株

农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株

农杆菌介导水稻幼胚转化获转基因植株朱常香;宋云枝;亓苏伟;郑成超;温孚江【期刊名称】《山东农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2000(031)001【摘要】本研究以根癌农杆菌LBA4404(pTOK233)为供试菌株,以水稻幼胚为供试材料,对影响农杆菌介导基因的转化效率的因素进行了研究,确立了农杆菌介导的水稻高效转化体系.采用所确立的转化体系转化了Radon、中国91、024283个水稻品种(系)幼胚,结果表明,gusA基因的瞬时表达率均在70%左右,最高为76%;gusA基因稳定表达率均在20%以上,平均为23%.转基因植株的GUS活性检测及Southern杂交分析表明,外源基因已整合于水稻基因组中,进行了有效地表达,且能稳定地遗传给后代,外源基因在后代遗传符合孟德尔遗传规律.【总页数】7页(P1-7)【作者】朱常香;宋云枝;亓苏伟;郑成超;温孚江【作者单位】山东农业大学,生命科学学院,山东,泰安,271018;山东农业大学,生命科学学院,山东,泰安,271018;山东农业大学,生命科学学院,山东,泰安,271018;山东农业大学,生命科学学院,山东,泰安,271018;山东农业大学,生命科学学院,山东,泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S511【相关文献】1.农杆菌介导水稻幼胚转化体系的建立 [J], 张毅;汪秀峰;李莉;倪大虎;陈亚琳2.基因枪转化小麦幼胚的再生培养与转基因植株的获得 [J], 尹钧;任江萍;宋丽;李磊;师学珍;郭向云3.水稻幼胚电激转化及转基因植株再生 [J], 王胜华;赵洁;杨弘远4.农杆菌介导GFP基因转化苹果茎尖碎片获得转基因植株 [J], 李玉生;吴永杰;程和禾;陈龙;赵艳华;吴雅琴5.应用基因枪将外源基因导人小麦幼胚获可育的转基因植株 [J], 陈乐玫;章力健;郭宝燕;贾士荣;许宁;赵南明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

植物生理学第三节 植物器官的生长分化

植物生理学第三节 植物器官的生长分化

MP = MONOPTEROS AXR6 = AUXIN RESISTANT 6 BDL = BODENLOS (BOTTOMLESS)
defective in embryo axis formation and vascular differentiation.
Hypocotyl and root are missing
a | Lateral root. PINs conduct auxin from the centre of the root (stele) to the new root tip (auxin is indicated in green and auxin transport is indicated by red arrows), and then away again through the epidermis. This forms the basis of the 'fountain' model of lateral root formation62. b | Embryo. Auxin is taken to the very young embryo by PIN7 (left). At a later stage (right), the auxin flux is reversed as PIN1, PIN4 and PIN7 conduct auxin out of the embryo. Transport by PIN1, PIN4 and PIN7 is indicated by blue, green and red arrows, in corresponding order. c | Shoot apical meristem. Auxin is redirected towards the site of new leaf formation (primordial P1 and P2 and the incipient primordium I1) in the epidermal layer. The shoot apex is indicated in blue. d | Leaves. Auxin mediates vascular tissue development (indicated as uninterrupted green lines) and patterning in the developing leaf through non-polar PIN1. The arrows indicate sites of auxin production and the red circles indicate auxin accumulation. e | Main root. PINs determine the flux of auxin towards the root tip in the centre of the root, and back again in the epidermis. This movement forms the basis of the root's ability to respond quickly to gravity. Parts a–e adapted, with permission, from Refs 62,125,153– 155 © (2003) Cell Press, (2005) Company of Biologists Ltd, (2005) Current Biology Ltd, (2004) Kluwer Academic Publishers, and (2005) Scandinavian Society for Plant Physiology, in corresponding order.
农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立

农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立

农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立作者：孙传波，郭嘉，袁英来源：《湖北农业科学》 2014年第12期孙传波，郭嘉，袁英（吉林省农业科学院生物技术研究所，长春１３００３３）摘要：以玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）ＨｉＩＩ的幼胚为外植体，β－葡萄糖苷酸酶基因（ＧＵＳ）为报告基因，通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆菌浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优化，以建立农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系。

结果表明，幼胚大小为１．０～１．５ｍｍ，农杆菌菌液的ＯＤ６００ｎｍ为０．５，４０℃热处理３ｍｉｎ，侵染８ｍｉｎ，共培养３ｄ和恢复培养４ｄ，１００ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素作为抑菌剂，双丙氨膦作为筛选剂时为最佳遗传转化条件。

通过该优化体系已获得多种转基因玉米材料，表明该体系具有较高的可重复性和可靠性。

关键词：农杆菌介导转化法；玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）；幼胚；遗传转化中图分类号：Ｓ５１３；Ｑ７８９文献标识码：Ａ文章编号：０４３９－８１１４（２０１４）１２－２７４３－０４收稿日期：２０１４－０２－１９基金项目：吉林省财政厅育种专项［吉财农指（２０１２）１０６２］作者简介：孙传波（１９８０－），男，山东莒县人，助理研究员，硕士，主要从事玉米遗传转化研究，（电话）０４３１－８７０６３２５６（电子信箱）４５１０３９１０６＠ｑｑ．ｃｏｍ；通讯作者，袁英，研究员，主要从事植物转基因育种研究，（电子信箱）ｃｈｕａｎｂｏｓｕｎ＠１６３．ｃｏｍ。

玉米（ＺｅａｍａｙｓＬ．）是重要的粮食作物和工业原料作物之一，在国民经济生产中具有重要战略地位。

利用基因工程技术手段创制性状优异的转基因玉米新种质具有重要的理论和现实意义，为玉米育种技术开辟了新途径。

自１９８８年Ｒｈｏｄｅｓ等［１］首次获得转基因玉米完整植株，１９９６年Ｉｓｈｉｄａ等［２］初步建立农杆菌遗传转化体系以来，玉米遗传转化研究得到了迅速发展，目前已有多种转基因玉米商业化生产。

浸花法转化拟南芥原理

浸花法转化拟南芥原理

浸花法转化拟南芥原理
植物细胞的原生质体在体外培养时，其分裂和生长均比较缓慢，一般不能长成成熟的植株。

但如果将植物细胞的原生质体用不同的化学溶液浸泡，使其发生形态上的变化，然后再接种于适当的培养基中，这种由植物细胞原生质体产生的后代就会发育成植株。

实验过程
将含有目的基因的拟南芥子细胞直接接种于含拟南芥花粉培养基上，如根瘤菌培养基（含有一定浓度的根瘤菌菌体和植物激素），一段时间后，可以观察到子叶萌发成苗，并可将生长出的植株通过有丝分裂再转化为植株。

原理解释
这种方法实际上是一种离体转化技术，其实质就是用化学试剂把拟南芥子细胞中的分裂原变成生长因子。

生长因子在植物细胞内有两种形式：一种是活细胞因子，它在活细胞内起着调节细胞分裂和生长的作用；另一种是死细胞因子，它在细胞死亡时才释放出来，如核黄素（维生素B2）、氯霉素（抗生素）等。

采用浸花法转化拟南芥原理，可以把拟南芥子细胞中的活细胞因子激活并释放出来。

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