联合检测血清HE4和CA153对乳腺癌早期诊断的价值

国际检验医学杂志２０１５年７月第３６卷第１３期Ｉｍ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ｊｕｌｙ　２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．１３　・论　著・　联合检测血清ＨＥ４和ＣＡ１５３对乳腺癌早期诊断的价值　

陈　慧　，陈光辉　，梁映亮　，徐灼均　，王万党　，曾今诚　（１．南方医科大学附属小榄医院，广东中山５２８４００；２．广东医学院东莞科研中心，广东东莞５２３８０８）　

摘要：目的探讨联合检测血清人附睾分泌蛋白４（ＨＥ４）与糖类抗原１５３（ＣＡ１５３）在乳腺癌早期诊断中的应用价值。方　法　收集乳腺癌患者４Ｏ例，乳腺良性疾病患者５Ｏ例及体检健康者３Ｏ例，采用免疫组化法检测组织中ＨＥ４的表达，采用化学发　光法检测血清ｃＡｌ５３和ＨＥ４的表达水平，并分析比较血清ｃＡ１５３和ＨＥ４单项或联合检测对女性乳腺癌的诊断价值。结果　乳　腺癌组织ＨＥ４高表达率明显高于乳腺良性肿瘤组织（Ｐ＜０．０５），乳腺癌患者血清ＨＥ４和ＣＡｌ５３水平均明显高于乳腺良性疾病　患者和体检健康者（Ｐ＜０．０５），同时乳腺癌患者血清ＨＥ４与ＣＡ１５３呈正相关（Ｐ＜０．０５）。血清ＨＥ４和ＣＡ１５３单一指标检测？　腺癌的检出率分别为８５．０　、６５．７　；而两者联合检测的检出率高达９２．５　，明显高于单项检测。结论　血清ＨＥ４对乳腺癌的　早期诊断具有参考价值，同时联合血清ｃＡ１５３检测能提高乳腺癌的检出率，可成为乳腺癌筛查和早期诊断的可靠模式。　关键词：乳腺癌；　人附睾分泌蛋白４；　糖类抗原１　５３　ＩＩＯｌ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２Ｏ１５．１３．０３９　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１５）１３　１８９３－０３　

ｌ’ｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＨＥ４　ａｎｄ　ＣＡｌ　５３　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｎ　Ｈｕｉ　，Ｃｈｅｎ　Ｇｕａｎｇｈｕｉ　，Ｌｉａｎｇ　Ｙｉｎｇｌｉａｎｇ　，ＸＭ　Ｚｈｕｏｊｕｎ　，Ｗａｎｇ　Ｗａｎｄａｎｇ　，Ｚｅｎｇ　Ｊｉｎｃｈｅｎｇ。　（１．ＸｉａｏｌａｎＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｔｏ　Ｎａｎｆａｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２８４００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｏｎｇｇｕａｎ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５２３８０８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｈｕｍａｎ　ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　４（ＨＥ４）ａｎｄ　ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　１５３（ＣＡ１５３）ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　４Ｏ　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ，５０　ｃａ—　ｓｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｅｎｉｇｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　３０　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ＨＥ４　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃ—　ｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　１ｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＣＡＩ５３　ａｎｄ　ＨＥ４　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ．Ｔｈｅ　ｄｉ　ａｇｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＨＥ４　ａｎｄ　ＣＡ１５３　ｏｒ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｆｅｍａｌｅ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＨＥ４　ｉｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｂｅｎｉｇｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ（Ｐ＜Ｏ．０５），ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＨＥ４　ａｎｄ　ＣＡ１５３　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｅｎｉｇｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＨＥ４　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ　ｅｏｒｒｅｌａ—　ｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｅｒｕｍ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ＣＡ１５３　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ＣＡ１５３　ａｎｄ　ＨＥ４（９２．５　）ｗａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣＡ１５３（６５．７　）ａｎｄ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＥ４（８５．０　）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｓｅｒｕｍ　ＨＥ４　ｈａｓ　ａ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｖａｌｕｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅ　ｃｏｍｂｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ＣＡ１　５３　ｃａｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｎ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｍｏｄｅｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ；ｈｕｍａｎ　ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　４；　ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　１　５　３　

乳腺癌是女性常见和多发的恶性肿瘤之一，据统计全球每　年约４５８　４００人死于乳腺癌，占恶性肿瘤死亡病例的１４　＿　，　近年来其发病率呈现上升趋势，且趋于年轻化＿２］，严重威胁女　性健康。乳腺癌的及早诊断对临床治疗和预后具有重要意义。　目前，乳腺癌检查主要依赖于乳房ｘ射线检查，然而这种方法　存在极大的局限性。一方面，ｘ射线具有潜在的致癌性，另一　方面，ｘ射线检查辨识度需要肿瘤大小在几毫米以上［３］。因　此，寻找新的乳腺癌早期诊断方法依旧是当前乳腺癌防治过程　中的重要课题。糖类抗原１５３（ＣＡ１５３》是一种表达在乳腺癌　细胞的相关抗原，在大多数乳腺癌的恶化过程中存在极高表　达，其在乳腺癌早期诊断中具有重要价值｜４］。前期研究中，笔　者所在课题组发现血清ＣＡ１５３与糖类抗原１２５（ＣＡ１２５）、癌胚　抗原（ＣＥＡ）和糖类抗原１９—９（ｃＡ１９—９）联合检测能提高乳腺癌　的诊断率，其联合检出率约７ｏ　ｌ＿５］。然而，４种肿瘤标志物联　合检测乳腺癌的检出率和特异度还不够理想。近年来，研究发　现人附睾蛋白４（ＨＥ４）在人正常组织及乳腺上皮细胞均有表　达，且在乳腺癌组织有较高水平表达，这表明ＨＥ４有可能成为　乳腺癌诊断的肿瘤标志物　６］。为探讨ＨＥ４及ＨＥ４联合　作者简介：陈慧，女，主管检验技师，主要从事肿瘤学基础研究。　ＣＡ１５３检测能否提高乳腺癌的检出率，本研究通过收集不同　乳腺疾病患者标本，判断ＨＥ４及ＨＥ４联合ＣＡ１５３检测对乳　腺癌诊断的价值，为乳腺癌的早期诊断提供参考。　１资料与方法　１．１一般资料２０１０年１月至２０１３年１２月南方医科大学附　属小榄医院收治的经病理确诊的女性乳腺疾病患者９Ｏ例：其　中乳腺癌４Ｏ例（乳腺癌组），年龄２８～５７岁，平均（４０．７±３．４）　岁；乳腺良性疾病５Ｏ例，年龄２５～５５岁，平均（３９．５－－＋－＿４．４）岁，　其中良性肿瘤２５例（乳腺良性肿瘤组），乳腺增生ｌ５例（乳腺　增生组），乳腺炎１ｏ例（ＥＬ腺炎组）。另选取３ｏ例女性体检健　康者作为健康对照组，年龄２３～５０岁，平均（３９．７±５．２）岁。　１．２方法　１．２．１　免疫组织化学检测　９Ｏ例乳腺疾病组织经石蜡包埋，　切片后采用链霉菌抗生物素蛋白一一过氧化物酶连接法（ＳＰ　法）检测组织ＨＥ４蛋白的表达情况。羊抗人ＨＥ４抗体　（１：４００稀释）购自美国Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司；二抗、二氨基联苯胺　（ＤＡＢ）显色试剂盒购自福州迈新生物公司。检测步骤参见试　剂盒操作说明进行。所有切片均采用双盲法，由２名有经验的　国际检验医学杂志２０１５年７月第３６卷第１３期Ｉｎｔ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ｊｕｌｙ　２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．１３　病理医师分别阅片。免疫组织化学结果判断如下：组织细胞细　胞质内出现棕黄色颗粒或团块为ＨＥ４阳性，无特异性染色为　阴性。判读采用二级计分法，染色强度计分标准：不着色为０　分，淡黄色为１分，黄色或深黄色为２分，黄褐色或棕褐色为３　分。阳性细胞范围计分标准：无阳性细胞为０分，阳性细胞小　于或等于２５％为１分，２６　～５Ｏ　为２分，大于５Ｏ　为３分。　将上述两项得分的乘积作为最终结果，以累积积分大于或等于　３分为高表达，否则视为低表达。　１．２．２血清ＨＥ４和ＣＡ１５３检测　所有研究对象均抽取清晨　空腹静脉血３　ｍＬ，待血凝固后分离血清，采用电化学发光免疫　检测法检测血清ＨＥ４和ＣＡ１５３水平。使用仪器为Ｃｏｂａｓｅ６０１　型全自动电化学发光免疫分析系统，试剂、校准品、质控品均为　原装产品。检测结果以血清ＣＡ１５３水平大于２５　Ｕ／ｍＬ作为　阳性判断标准，血清ＨＥ４水平大于１４０　ｐｍｏｌ／Ｌ为阳性判断标　准。以上所有操作步骤严格按照说明书进行。　１．３统计学处理　采用Ｇｒａｐｈｐａｄ　ｐｒｉｓｍ　５进行统计‘分析，计　数资料采用百分率进行描述并行．）ｆ。检验；计量资料采用　±　进行描述行ｔ检验，相关性分析采用Ｐｅａｒｓｏｎ相关性分析，Ｐ＜　０．０５为差异有统计学意义。　２结　果　２．１组织ＨＥ４表达比较ＨＥ４在不同乳腺疾病乳腺组织中　的表达呈现明显差异。乳腺癌组织中ＨＥ４高表达率为８７．５　（３５／４０），乳腺良性组织中ＨＥ高表达率为２０．０　（１０／５０），两　者比较差异有统计学意义（Ｙ。一４０．５，Ｐ＜０．０５）。乳腺良性肿　瘤组织中ＨＥ４高表达率为２８．０　（７／２５），乳腺增生组织中　ＨＥ４高表达率为２０．０　（３／１５），乳腺炎组织中ＨＥ４高表达率　为０．０　（０／１０），各组之间ＨＥ４表达率差异无统计学意义　（Ｐ＞０．０５）。乳腺癌组织ＨＥ４高表达率高于乳腺良性肿瘤组　织，两组比较差异有统计学意义（．）ｆ　一２３．８２，Ｐ＜０．０５）。　２．２血清ＨＥ４比较　不同乳腺疾病患者血清ＨＥ４和ＣＡ１５３　水平也存在明显差异。乳腺癌患者血清ＨＥ４水平［（１７０．９０±　１３．５９）ｐｍｏｌ／Ｌ］高于乳腺良性疾病患者［（７４．９６±４．８９）ｐｍｏｌ／　Ｌ］和体检健康者［（５１．３７土３．７Ｏ）ｐｍｏｌ／Ｌ］，且乳腺良性疾病患　者高于体检健康者，差异均有统计学意义（ｔ值分别为６．７３５、　７．４５１、３．９７３，Ｐ＜０．０５）。乳腺良性疾病患者中，乳腺良性肿　瘤患者血清ＨＥ４水平高于乳腺增生患者和乳腺炎患者，差异　均有统计学意义（　值分别为３．１８６、２．７２１，Ｐ＜０．０５）。乳腺增　生患者、乳腺炎患者及体检健康者间血清ＨＥ４水平差异均无　统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表１。　２．３血清ＣＡ１５３水平比较　乳腺癌患者血清ＣＡ１５３水平　［（２９．１０士１．３６）Ｕ／ｍＬ￣高于乳腺良性疾病患者［（１９．４３±　０．６１）Ｕ／ｍＩ．￣和体检健康者［（１６．９９士０．７９）Ｕ／ｍＬ￣，且乳腺良　性疾病患者高于体检健康者，差异均有统计学意义（ｔ值分别　为６．５５９、７．０９０、２．４７９，Ｐ＜０．０５）。乳腺良性疾病患者中，乳　腺良性肿瘤患者血清ＣＡ１５３水平高于体检健康者，差异有统　计学意义（￡一３．７３７，Ｐ＜０．０５）。乳腺良性肿瘤患者、乳腺增生　患者和乳腺炎患者间血清ＣＡ１５３水平差异均无统计学意义　（Ｐ＞０．０５）。见表１。　２．４血清ＨＥ４和ＣＡ１５３水平相关性分析Ｐｅａｒｓｏｎ相关性　分析显示，乳腺癌患者和乳腺良性肿瘤患者血清ＨＥ４水平与　血清ＣＡ１５３水平均呈正相关（相关系数ｒ分别为０．４４７　６、　０．４０３　３，Ｐ＜０．０５）；乳腺增生患者、乳腺炎患者及体检健康者　血清ＨＥ４水平与血清ＣＡ１５３水平均无明显相关性（相关系数　ｒ分别为０．１０３　０、０．０９１　０、０．３０３　４，Ｐ＞０．０５）。　２．５血清ＨＥ４、ＣＡ１５３单独检测及联合检测的检出率乳腺　癌患者血清ＨＥ４、ＣＡ１５３检出率最高，分别为８５．０　、６７．５　，　各组血清ＨＥ４、ＣＡ１５３检出率比较差异有统计学意义（Ｐ＜　０．０５）。乳腺癌患者血清ＨＥ４与ＣＡ１５３联合检测检出率最高　（９２．５　），各组血清ＨＥ４与ＣＡ１５３联合检测检出率差异有统　计学意义（Ｐ＜０．０５）。乳腺癌患者血清ＨＥ４检出率高于　ＣＡ１５３检出率，差异有统计学意义（Ｙ　一７．８１３，Ｐ一０．００５　２）；　乳腺癌患者血清ＨＥ４与ＣＡ１５３联合检测检出率高于ＨＥ４、　ＣＡ１５３单项检测。见表２。　表１　血清ＨＥ４和ＣＡ１５３水平　较（ｊ±ｓ）