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禽病毒性关节炎的实验室诊断技术

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禽病毒性关节炎的实验室诊断技术王鑫1，2（1.陕西省西安市临潼区动物卫生监督所，陕西临潼710600；2.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100）

摘要：禽病毒性关节炎（avianviralarthritis）也称“传染性腱鞘炎”，是近年来发现的一种由禽呼肠孤病毒引起的鸡慢性传染病，以侵害跗关节、趾关节及其肌腱和心肌为特征。该病分布广泛，在世界各地均有发生，对鸡的生产带来的经济损失很大。从流行病学、症状、病理变化以及实验室检查、血清学诊断和鉴别诊断等方面，对鸡病毒性关节炎疾病的综合诊断技术进行了概述。关键词：禽；病毒性；关节炎；实验室诊断技术中图分类号：S858.317.165文献标识码：A文章顺序编号：1672-5190（2009）11-0117-01

1病原分离1.1活体取样和处理将发病初期的罹患关节部位消毒，用注射器采取滑液。也可用消毒的棉拭子探入气管或泄殖腔内，旋转几次。取出后放入组织培养液（加双抗，必要时加抗霉菌药）内。置普通冰箱内2h以上。取上清液做病毒分离。1.2解剖取样和处理将发病初期的患肢消毒后，切开取肿胀的腱、腱鞘和关节囊刮取物，无菌采集样本后，单独或混合处理；以抗菌素处理2h以上，用PBS或生理盐水制成乳剂，取上清液做接种，必要时可用离心方法提取上清液。1.3鸡胚接种对病毒的初次分离，以卵黄囊（YS）接种较好。鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）接种的鸡胚（0.2mL/只）病毒也是在鸡胚中繁殖，初次分离不是所有鸡胚都死亡和出现病变，接种传代后2d大部分鸡胚开始死亡，死亡胚发育不良，胚体周身出血，肝周出血，肝和脾常肿大并有坏死灶。在CAM上可见有小的、分散的、稍微隆起的白色病变。YS接种的鸡胚于第3～4d后死亡，感染了的胚显著发紫，内脏出血。经尿囊腔（AC）接种的鸡胚通常见不到CAM上有白色坏死斑点。取尿囊液和CAM（YS接种的抽取卵黄液）做病毒鉴定。初次接种的被检物可能不出现病毒的某些特性，需继续传2～3代。仍无病毒性时，则判为病毒分离阴性。1.4雏鸡接种试验：将含毒的乳剂上清液或尿囊液足掌内接种2～3周龄肉用鸡（0.2～0.5mL/只），感染后2～4d足垫部肿胀。少数鸡趾关节出现红肿，病鸡表现跛行。足掌内接种的发病率为100%。其他途径接种感染的很少出现明显的病变，但经琼脂扩散试验检查均是阳性反应。2血清学诊断据Wood等报道，禽的呼肠孤病毒至少有11个血清型，所有的血清型都可以用琼脂扩散（AGP）试验检测出来，因此AGP试验是目前诊断病毒性关节炎的简便而又行之有效的方法。2.1材料准备2.1.1鸡胚尿囊液浓缩抗原制备：将病毒接种于9～10日龄鸡胚CAM上，接种后48～72h，收集鸡胚尿囊液，经3000r/min离心30min，取上清液定量分装于容器中冻干。2.1.2CAM抗原制备：将种毒接种于9～10日龄鸡胚CAM上，38.5℃孵化48～72h，收集CAM，用生理盐水充分洗涤后用玻璃匀浆器磨碎制成乳剂，冻融5次后上清液即可作为抗原。2.1.3阳性血清的制备：将含毒鸡胚尿囊液感染3个月以

上的成鸡，感染途径为点眼、滴鼻、足垫部及腿部肌肉同时接种，其剂量为1mL/只，间隔5d再接种1次，剂量为2mL/只，第2次接种2周后放血，分离血清，测抗体效价，在6log2以上者为合格，冻存。2.1.4琼脂板的制备：称量琼脂糖0.8g，加入100mLpH值

为6.4浓度为0.01mol/L的PBS液（甲液：3.58gNa2HPO4·

12H2O加蒸馏水至1000mL；乙液：1.36gKH2PO4加蒸馏水

至1000mL；待甲乙液充分溶解后，分别保存，用时取甲液24mL，乙液76mL混合即可。）中在水浴中煮沸充分融化，

加入8gNaCl，充分溶解后加入1%硫柳汞溶液1mL。冷至45～50℃时，将洁净的干热灭菌的直径为90mm的平皿置于

平台上，每个平皿加入18～20mL，加盖待凝固后，把平皿倒置以防水分蒸发，放普通冰箱中保存备用（时间不超过2周）。2.1.5诊断液：病毒性关节炎标准抗原、标准阴性和阳性血

清，按说明书操作。2.2AGP操作方法在制备的琼脂板上按7孔1组的梅

花形打孔（中间1孔，周围6孔），孔径4mm，孔距3mm，将孔中的琼脂用8号针头斜面向上从右侧边缘插入，轻轻向左侧方向将琼脂挑出，勿伤边缘或使琼脂层脱离皿底。用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚刚要溶化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。用微量移液器或带有6～7号针头的0.25mL注射器，吸取抗原悬液滴入中间孔，标准阳性血清分别加入外周的1，4孔中，受检血清按顺时针顺序分别加入4个外周孔。每孔均以加满不溢出为度，每加1个样品应换1个滴头。加样完毕后，静止5～10min，将平皿轻轻倒置，放入湿盒内置37℃温箱中作用，分别在24，48和72h观察并记录结果。2.3结果判定将琼脂板置日光灯或侧强光下观察，标准

阳性血清与抗原孔之间出现1条清晰的白色沉淀线，则试验可成立。参考文献：［1］收稿日期：2009－10－15

作者简介：王鑫（1978—），女，助理兽医师，硕士，主要从事动物卫生检疫与监督工作。

孙景秀，王晓峰，徐春英.肉仔鸡病毒性与细菌性关节炎混

合感染的诊治［J］.湖北畜牧兽医，2008（6）：38.

AnimalHusbandryandFeedScience畜牧与饲料科学2009，30（11-12）:117［2］［3］［4］［5］王丹.鸡病毒性关节炎［J］.郑州牧业工程高等专科学校学

报，2006，26（2）：28-29，31.付世海.鸡病毒性关节炎的鉴别诊断［J］.畜牧与饲料科学，2009，30（1）：186-187.

黄小波，曹三杰，文心田.肉鸡关节炎的诊断与防治［J］.安徽农业科学，2008，36（21）：9151-9152.窦春香，范秀兰.鸡病毒性关节炎的血清学调查［J］.上海畜牧兽医通讯，2007（2）：43.□

禽白血病的实验室诊断技术焦静波，王建军，杨建文（内蒙古包头市家畜改良工作站，内蒙古包头014010）

摘要：禽白血病是由禽C型反转录病毒群的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，主要是淋巴细胞性白血病，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病。大多数肿瘤侵害造血系统，少数侵害其他组织。早在20世纪的中后期就有人对该病进行了描述和报道，是人类最早认识的禽病之一。该病毒除能引起白血病外，还能引起骨髓细胞瘤、上皮细胞瘤等肿瘤性疾病，而且它诱发的肿瘤多与造血系统有关。由于禽白血病病毒与禽肉瘤病毒在理化特性、病毒形态以及致病性等方面具有许多相同的特征，因此常常统称为禽白血病/肉瘤病毒。介绍了禽白血病的病原学诊断和血清学诊断方法。关键词：禽；白血病；实验室诊断中图分类号：S858.353文献标识码：A文章顺序编号：1672-5190（2009）11-0118-04

1病原学诊断

禽白血病的病原在病毒分类学中属于脊椎动物RNA病毒反转录病毒科肿瘤病毒亚科C型肿瘤病毒属禽C型肿瘤病毒亚属禽肉瘤和白血病病毒。把白血病/肉瘤（L/S）病毒放在一个群中，是因为它们具有共同的物理和化学特征，还具有共同的群特异性gs抗原。它们对鸡可引起多种具有传染性的肿瘤。根据禽白血病病毒在不同的遗传学关系的鸡胚成纤维细胞培养物中的宿主范围、它们对同一亚群成员的干扰模式、它们用血清中和试验检测出来的病毒封套抗原，已被确定有A、B、C、D、E、F、G、H等亚群。近年来美国学者用一种PCR测定法从骨髓白血病肉种鸡群获取到禽白血病病毒亚群J，亚群J同样具有禽白血病病毒所共有的群特异性gs抗原。就自然流行情况来看绝大多数为亚群A病毒，亚群B病毒则比较少见，而其他亚群病毒则更为少见。禽白血病病毒粒子的构造：应用各种等级孔径的膜滤过方法、超离心方法、蔗糖密度梯度离心分离法及电子显微成像，可确定病毒粒子是直径为80～120nm的球形粒子。该病毒在细胞内增殖时期，用电子显微镜是看不到完整病毒的，当它成熟时，由细胞表面、包着宿主细胞表面的膜以出芽的方式而成为游离的病毒粒子，因此完整病毒粒子的封套具有宿主细胞的成分。它具有感染能力又称为外源性病毒。将病毒粒子应用6mol/L盐酸胍处理后，再在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，可以确认7种分子量不同的蛋白质成分，即gp85、gp35、p27、p19、p15、p12和p10。其中p27是形成病毒芯子壳上的子粒，是gs抗原的重要抗原成分。通常情况下，几乎所有的鸡体细胞内都带有一个内源性的病毒基因组，即产生一个完整的白血病病毒所必需的那些基因。它在某些特定的条件下，可以形成病毒粒子，但是它却没有感染力，所以就不能像外源性病毒那样扩散并传播到其他的鸡。1.1病料的采集和处理病鸡的全血和血浆（不用肝素而

用枸橼酸钠抗凝）、卵蛋白、鸡胚以及肿瘤组织是分离病毒的最好材料，采集时应按常规无菌操作。粪便也可用来分离病毒，但需用青霉素、链霉素和两性霉素B进行处理。1.2病毒分离

1.2.1细胞培养：首先用洁净的无病毒的鸡胚制备继代成

纤维细胞，然后用可能含毒被检病料接种细胞，置35～37℃进行培养。接种培养后4～5d在显微镜下见到细胞集落，10d后肉眼也可看到时，则可认为被检材料中含有禽白血病病毒。1.2.2鸡胚接种：将被检材料静脉接种10日龄鸡胚，雏鸡

可正常孵出，数十天内出现病变。成红细胞白血病反映的临床表现有2种类型：即增生型（胚型）表现为血液中出现大量成红细胞，肝、脾肿大，呈樱桃红色至暗红色；贫血型则表现为血液中的红细胞较少，脾等内脏器官萎缩。若将被检材料接种鸡胚卵黄囊或绒毛尿囊膜，8d后可观察到痘斑样病灶。1.2.3动物试验：将被检材料于静脉或腹腔内接种1日龄

的易感雏鸡，经2～9个月出现临床应答。淋巴性白血病一般在14～30周龄间出现症状和病变。成髓细胞性白血病主要是白细胞总数增加，外周血白细胞数可达200万个/mm3

，病

毒主要侵害部位是骨髓。1.3抵抗力诱发因子试验（RIF试验）

①通常情况下，体外培养的鸡胚细胞接种感染白血病

病毒后没有任何病变发生，而被与白血病病毒同种亚群的肉瘤病毒感染后，就会产生在显微镜下甚至肉眼可见的肿瘤细胞集落。若鸡胚细胞先被白血病病毒感染，而后再感染肉瘤病毒时，则肉瘤病毒的生长、繁殖就受到干扰，降低了

收稿日期：2009－10－25

作者简介：焦静波（1960—），男，包头市首席兽医师，推广研究员，主要从事畜牧兽医技术推广工作。

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AnimalHusbandryandFeedScience畜牧与饲料科学2009，30（11-12）:118-121

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鸡病毒性关节炎怎么治疗

鸡病毒性关节炎怎么治疗

鸡病毒性关节炎怎么治疗很多朋友在平时的生活中都会出现关节疼痛的现象，尤其是到了阴雨天气的时候疼得更加厉害，其实有些关节病是由于感染上了一些病毒导致的，其中有一种疾病就叫做鸡病毒性关节炎，治疗这种关节炎可以采用中西结合的方法来进行，是具有一定效果的，那么鸡病毒性关节炎怎么治疗呢？对本病的治疗最主要是进行抗感染治疗：1、早期抗生素的选择需根据年龄，过去史，关节外感染灶，并结合滑液的革兰氏染色结果确定。

一旦得到培养结果(24~48小时)和敏感性实验结果(3~4天)，应调整抗生素用药。

2、在怀疑为非淋球菌的革兰氏阳性菌感染时，应首选半合成青霉素(优福星)，先锋霉素，万古霉素(如果细菌耐药，如金黄葡萄球菌)或氯林可霉素。

疑为革兰氏阴性菌感染时，可用第三代先锋霉素和氨基糖苷类药物(感染严重时)以非肠道给药的方式给药直至药敏试验示有结果时。

3、非肠道给药至出现明显疗效(约2周)，然后需口服维持剂量的抗生素约2~6周后临床症状会有改善。

链球菌和嗜血杆菌感染2周即可根除。

葡萄球菌感染至少需3周通常是6周或更长的时间，特别是有过关节炎病史的患者。

4、除了应用抗生素，急性非淋球菌关节炎每天要至少一次用大号针头抽取关节脓液，定时冲冼，关节内镜冲洗或关节手术清创。

风湿性关节炎也应尽早进行手术清创引流。

关节在最初几天内可以上夹板以缓解疼痛，待好转后可进行主动的运动训练。

5、播散性淋球菌感染的治疗相同，与病期无关。

临床经验表明因淋球菌耐药性的不断变化应及时改变治疗方案。

播散性淋球菌感染不需要手术清创和引流，一般不会造成永久性的关节损伤。

若同时存在沙眼衣原体引起的生殖系统感染(50%)，应积极治疗，并且避免与患者有性接触(参见第164节)。

6、置换关节的感染需接受长期治疗。

它包括：(1)对不能手术的患者应长期服用抗生素;(2)伴有或不伴有关节融合的切除关节成形术(感染未控制的患者或骨储备不充分者);(3)手术摘除置换关节，仔细清除骨质和失活组织，长期服用抗生素;(4)立即或延期(1~3个月)植入新的经抗生素处理的关节。

鸡病毒性关节炎防治措施

鸡病毒性关节炎防治措施

鸡病毒性关节炎防治措施家禽病毒性关节炎主要发生于鸡，是由呼肠孤病毒引起关节滑膜炎、腱鞘炎的传染病。

一、病原呼肠孤病毒可经卵黄囊或绒毛尿囊膜接种在鸡胚内生长。

卵黄囊接种鸡胚，3-5天鸡胚死亡，鸡胚皮下广泛出血。

绒毛尿囊膜接种，在7-8天后鸡胚死亡，鸡胚肝脾肿大、坏死，绒毛尿囊膜出现分散的白色病灶。

病毒还可在原代鸡胚、肝、肺、肾、巨噬细胞和睾丸培养细胞内生长。

呼肠孤病毒对热有抵抗力，能耐受60℃8-12小时、56℃22小时，4℃下能存活3年以上。

对乙醚不敏感，对pH3、0.2%来苏儿、3%甲醛溶液均有抵抗力；70%酒精和0.5%有机碘可将其灭活。

二、流行特点本病只感染鸡，2周龄雏鸡较易感，自然发病多见于4-7周龄。

病鸡和易感鸡的直接或间接接触可引起传播。

病鸡可通过消化道和呼吸道排出病毒。

粪便是主要接触性传染源。

本病可以垂直方式传递。

病鸡产的蛋有的带毒，孵出的雏鸡发病。

潜伏期的长短因病毒的致病型、鸡的日龄和感染途径而不同。

气管内接种或直接接触病毒，其发病潜伏期分别为9天和13天。

三、临床症状肉用鸡和产蛋鸡都感染本病，以肉用鸡发病较多。

鸡群发病率5%-10%，死亡率约1%。

此外，慢性病鸡由于发育停滞，无商品价值而淘汰的可达20%-30%，对肉用鸡危害很大。

病鸡表现消瘦、贫血、排出水样稀粪及较多的白色尿酸盐，精神沉郁，食欲减退，步行困难，常伏在鸡舍一角，逐渐衰竭而死。

关节炎多发生在跗关节和趾关节，多数是两侧关节受侵害。

发病鸡群发育不整齐，出现多量跛行鸡。

四、病理变化多数病鸡的跗关节囊、趾关节囊、趾屈肌腱及伸肌腱出现潮红、肿胀病变，有的有波动感。

急性期的关节囊及腱鞘充血，有时伴有点状出血的水肿性肥厚，关节腔有草黄色或带血色的滑液增多，并混有纤维素性絮片。

大雏或成鸡易发生腓肠肌腱断裂。

转成慢性后，关节硬固变形，跗关节皮肤茶褐色，有的形成溃疡。

关节囊和腱鞘有纤维素性肥厚，关节两骨端形成溃疡。

病变部皮下水肿和出血。

肉鸡大肠杆菌性关节炎的临床症状、诊断和防控措施

肉鸡大肠杆菌性关节炎的临床症状、诊断和防控措施

肉鸡大肠杆菌性关节炎的临床症状、诊断和防控措施作者：崔丽来源：《现代畜牧科技》 2016年第9期崔丽（黑龙江省富锦市畜牧兽医局，黑龙江富锦156100）摘要：肉鸡大肠杆菌性关节炎在临床比较常见，主要是由于感染大肠杆菌而引起，主要特征是腿软，很难站立。

走动时，往往将跗关节着地，也就是所谓的用膝走路。

少数病鸡的关节处发生红肿，通常是跖关节和跗关节容易发生，且往往是单侧性的发生病变。

关键词：肉鸡；大肠杆菌性关节炎；临床症状；诊断；药物治疗；饲养管理；免疫预防中图分类号：S858. 31文献标识码：B文章编号：2095-9737(2016)09-0088-011 病原学大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，无法形成芽孢，呈直杆状，两端钝圆，往往单个散在或者成对排列，大部分菌株周边生有鞭毛，能够自行运动，但也有部分变异菌株没有生长鞭毛或者丢失鞭毛而不能够运动。

除个别菌株外，一般都能够看到荚膜，但往往生有微荚膜，使用碱性染料能够让病菌着色良好，且菌体两端有时会略微深染。

2 临床症状病鸡表现出精神沉郁，羽毛蓬松、杂乱，双翅下垂，走动困难，往往呈俯卧状，症状严重时会发生瘫痪，只能够卧底不起；同时伴有腹泻，排出血样便，并散发恶臭味；往往有一侧或者两侧跗关节发生肿大，有些跗关节局部存在热感，经过触诊有波动感。

3 实验室诊断细菌学诊断。

在表现出明显症状的病鸡，取心脏、脾脏、肝脏、关节液分别在普通琼脂平板和兔鲜血平板上接种，置于37℃恒温下培养一段时间进行观察。

结果发现心脏、脾脏和肝脏接种的平板上都没有生长细菌；接种关节液的平板上在24h后都生长有菌落。

挑取单个菌落经过染色后进行观察，发现革兰氏阴性杆菌，将其接种在麦康凯培养基上能够长出粉红色菌落，判断是大肠杆菌。

病毒分离。

取肝脏、脾脏、肺脏等内脏组织和关节液分别进行研磨，以每分钟5000转的转速进行lOmin离心，取上清液添加在每毫升含有20001U的双抗中进行过夜处理，通过卵黄囊接种到5～7日龄鸡胚，置于37℃温度下进行5天的培养观察，并连续进行3代盲传，结果发现接种鸡胚没有出现死亡，也没有其他任何病变。

肉鸡病毒性关节炎的防治

肉鸡病毒性关节炎的防治

肉鸡病毒性关节炎的防治一般肉鸡病毒性关节炎的发病时间是于15日龄后开始发病，以一侧或两侧跛行为主要症状，膝关节增生肿大，病程历经2d后，病鸡出现下痢，排黄色水样便。

开始误诊为新城疫，并采取对症治疗，用水溶性红霉素饮水，饲料中添加复合维生素B等，历经3d治疗不见好转，鸡病出现暴发性蔓延，并伴随鸡死亡。

后在农业部动检所的帮助下，经剖检、化验室等综合诊断，确诊为肉鸡病毒性关节炎。

1、发病情况一般肉鸡病毒性关节炎的发病时间是于15日龄后开始发病，以一侧或两侧跛行为主要症状，膝关节增生肿大，病程历经2d后，病鸡出现下痢，排黄色水样便。

开始误诊为新城疫，并采取对症治疗，用水溶性红霉素饮水，饲料中添加复合维生素B等，历经3d治疗不见好转，鸡病出现暴发性蔓延，并伴随鸡死亡。

后在农业部动检所的帮助下，经剖检、化验室等综合诊断，确诊为肉鸡病毒性关节炎。

2、临床症状在急性感染期，鸡表现跛行，部分鸡生长受阻，慢性感染期鸡的跛行更加明显，少数病鸡跗关节不能运动。

肉鸡群受到感染后，首先表现为传染性滑膜炎，16000只3~4周龄鸡中的4000只发病，发病率达25%，在4~5周龄时，大约有2400只鸡死亡，死亡率达15%，另外，还有4600只鸡生长停滞。

3、剖检变化鸡跖屈肌健和跖肌健肿胀，从跗关节上部的触诊能明显感觉到跖伸肌健的肿胀，爪垫和跗关节一般不出现肿胀。

跗关节常含有少量草黄色或血样渗出物，个别病鸡有大量脓性渗出物，与传染性滑膜炎病相似，感染早期跗关节和跖关节健鞘有明显水肿，跗关节内滑膜经常有点状出血。

4、诊断根据症状和病变可做出初步诊断。

病变主要涉及跖伸肌和屈肌及心脏组织内异嗜细胞浸润，这些有助于与细菌和霉形体性滑膜炎区分开。

荧光抗体技术能检查腱鞘内的呼肠孤病毒，或用鸡胚、鸡胚肝细胞分离病毒提供进一步诊断。

通过爪垫接种易感一日龄鸡确定一个从受感染关节分离的呼肠孤病毒相对致病性。

如果有致病灶，在接种后72h内病毒性可诱发爪垫出现明显炎症反应。